高转移肺癌细胞株95 D中特异表达的C3orf1基因分析

目的 进一步了解肺癌转移的分子机制,筛选高转移肺癌中差异表达的基因。方法 利用荧光差异显示技术（DD—PCR）获得差异片段,对这些片段进行克隆和序列分析。通过在GenBank中同源性检索,查找差异片段相对应的同源基因。利用定量PCR检测验证该基因表达的差异性,并对该基因的结构进行预测。结果 通过DD—PCR得到9个差异片段,其中一个片段对应于C3orf1基因。定量PCR验证的结果表明,C3orf1基因在高转移肺癌中的表达量显著高于其他被测试的5种肿瘤细胞。该基因的读码框长858bp,编码285个氨基酸,分子量约32200。蛋白质结构预测分析发现,该基因含有7个类似表皮生长信号区,N端有一含有24个氨基酸的信号肽,并且还可能有3个2S-2Fe铁氧化还原蛋白铁硫结合信号区,2个维持自身静态平衡的VWFC信号区和2个硫解酶活性区。结论 C3orf1基因在高转移肺癌中异常表达,可能是分泌型的生长因子类蛋白,刺激细胞的生长。     

血小板活化因子反相高效液相色谱法测定及其在老年性疾病中的应用

目的 建立血小板活化因子(PAF)的反相高效液相色谱(rHPLC)检测法,与生物学检测法比较,探讨其在老年脑梗死、高血压、冠心病等疾病中的意义。方法 采用rHPLC对100例健康对照者、23例脑梗死、28例高血压病、65例冠心痛患者血PAF进行分析。结果 rHPLC法与生物学法相关性较好,操作简便,重复性好,灵敏度高,干扰因素少。脑梗死、冠心痛患者血PAF值显著高于参考值（P＜0．01);高血压病组与对照组比较,无显著性差异(P＞0．05)。结论 rHPLC法测定PAF更具可靠性,更能正确地反映血中PAF水平;有助于进一步推动PAF的临床与基础研究。     

脐血造血干/祖细胞体外扩增及移植动物模型分析

目的　探讨脐血造血干 /祖细胞体外扩增和体内重建造血的潜能。方法　利用造血干 /祖细胞培养、体外扩增、移植动物模型等技术 ,研究不同比密ficoll分离液分离的脐血造血干 /祖细胞的造血活性。结果　比密 1.0 6 4 g/ml分离液分离的 10 5个脐血MNC中 ,CFU GM集落数为 373± 2 89,BFU E为 12 1± 70。在G3(GM CSF和IL 3融合蛋白 )、IL 6、TPO(thrombopoietin)作用下 ,1.0 6 4 g/ml分离液分离的脐血造血干 /祖细胞在体外扩增 14d ,CFU GM扩增 5 2 .2倍。给经 8.5Gy致死剂量照射的小鼠输注 1.0 6 4 g/ml分离液分离的脐血造血干 /祖细胞 ,体内产生的脾结节 (CFU S)是输注 1.0 77g/ml分离液分离细胞的 2 .2倍。结论　比密 1.0 6 4 g/ml分离液分离的脐血造血干 /祖细胞 ,在体外具有较高的增殖、持续造血的能力及较强的体内造血重建潜能     

羊水栓塞诊疗中的轻重缓急

正羊水栓塞(amniotic fluid embolism,AFE)是一种少见但极其凶险的产科并发症,其发病急,病情变化快,是产科常见的死亡原因之一。文献和媒体常有所报道,导致人们似乎有了谈"羊栓"甚至是羊水而"色变"之感。事实上,AFE并非都是致命的,其发生发展同其他任何事物一样有轻重缓急之分,也有发生、发展和转归的过程。本文对AFE的相关进展在诊疗理念层面进行简要综述。AFE概述     

人参多糖注射液联合表柔比星治疗乳腺癌的临床研究

目的探讨人参多糖注射液联合表柔比星治疗乳腺癌的临床疗效。方法选取2016年2月—2017年2月在临沂市肿瘤医院治疗的乳腺癌患者78例,根据治疗用药的差别分为对照组(39例)和治疗组(39例)。对照组静脉滴注注射用盐酸表柔比星,每个疗程第1天给予90 mg/m2,1次/3周;治疗组在对照组基础上静脉滴注人参多糖注射液,4 m L/次,2次/d。两组均治疗6周。观察两组患者临床疗效,同时比较治疗前后两组患者肿瘤标志物水平、血清细胞因子水平和不良反应情况。结果治疗后,对照组客观缓解率(ORR)和临床获益率(CBR)分别为35.90%和69.23%,均分别明显低于治疗组的58.97%和87.18%,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。治疗后,两组血清糖抗原125(CA125)、糖抗原153(CA153)、癌胚抗原(CEA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、可溶性CD105(S-CD105)和转化生子因子-β1(TGF-β1)水平均显著降低(P0.05),干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-12(IL-12)水平显著升高(P0.05),且治疗组上述肿瘤标志物和细胞因子水平明显优于对照组(P0.05)。治疗期间,治疗组不良反应发生率明显低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论人参多糖注射液联合表柔比星治疗乳腺癌可有效降低机体肿瘤标志物水平和改善机体细胞因子表达水平,具有一定的临床推广应用价值。     

稳定表达EGFP-LC3蛋白SH-SY5Y细胞系的构建

目的:建立稳定表达微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)与绿色荧光蛋白(EGFP)形成的融合蛋白(EGFP-LC3)的人神经母细胞瘤株SH-SY5 Y细胞系,验证EGFP-LC3点状聚集物能够实时直观地反映自噬小体和自噬流.方法:以人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)的cDNA为模板,克隆LC3,并连接EGFP绿色荧光蛋白.将EGFP-LC3连接入慢病毒载体GV348中,构建慢病毒表达载体EGFP-LC3-GV348.慢病毒转染人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5 Y细胞),使用3μg/mL嘌呤霉素筛选并处理细胞1月,筛选得到EGFP-LC3稳转系.诱导自噬后,用共聚焦显微镜观察LC3荧光斑点并定量分析.Western blot检测目的蛋白表达情况.结果:经酶切证实,EGFP-LC3-GV348慢病毒表达载体构建正确.在激光共聚焦显微镜下,可以观察到细胞内的绿色荧光EGFP代表的自噬小体,活体染料LysoTracker Red DND-99将溶酶体染成红色荧光,红色荧光与绿色荧光重叠代表自噬溶酶体.无血清诱导自噬后,自噬小体(绿色荧光斑点)明显增加,差异有统计学意义(P<0.001).Western Blot免疫印迹可见EGFP-LC3融合蛋白表达条带.结论:成功构建了稳定表达EGFP-LC3的SH-SY5 Y细胞系,EGFP-LC3荧光斑点可以直观实时反映自噬囊泡,为进一步探讨神经退行性疾病的自噬机制提供了实验基础.     

α5亚基γ-氨基丁酸A受体在坐骨神经损伤大鼠认知功能中的作用

目的 探讨α5亚基γ-氨基丁酸A受体（α5-GABA_ARs）在坐骨神经损伤（SNI）导致的慢性神经病理性痛大鼠认知功能中的作用。
方法 选择成年雄性SD大鼠32只,8～10周龄,体重200～230 g。采用随机数字表法将大鼠分为四组：假手术组（N组）、SNI组（S组）、SNI+二甲基亚砜 （DMSO）组（P组）、SNI+α5-GABA_ARs反向激动剂组（L组）,每组8只。N组仅暴露右侧坐骨神经及其三个终末支,不结扎。S组结扎右侧胫神经和腓总神经并剪断。P组和L组结扎右侧胫神经和腓总神经并剪断,于术后第22天新物体识别实验和术后第23天Y迷宫实验前30 min分别腹腔注射10%DMSO 1 ml和L655708 1 mg/kg。于术前1 d和术后第3、7、14、21、22和23天测定四组机械缩足阈值（MWT）,术后第22天行新物体识别实验,记录大鼠对新物体和旧物体的探索时间并计算辨别指数,第23天行Y迷宫实验计算自发交替百分比。采用Western blot法检测海马组织α5-GABA_ARs和谷氨酸脱羧酶-67（GAD67）蛋白含量,采用免疫荧光法检测海马组织α5-GABA_ARs与小清蛋白（PV）双阳性细胞数,α5-GABA_ARs与生长抑素（SST）双阳性细胞数。
结果 与N组比较,S组、P组和L组术后第3、7、14、21、22和23天MWT明显降低（P<0.05）,海马组织α5-GABA_ARs蛋白含量明显升高（P<0.05）,S组海马组织α5-GABA_ARs与PV双阳性细胞数明显增多（P<0.05）,α5-GABA_ARs与SST双阳性细胞数明显增多（P<0.05）。与S组比较,L组对新物体的探索时间明显延长（P<0.05）,辩别指数、自发交替百分比和海马组织GAD67蛋白含量明显升高（P<0.05）。
结论 α5-GABA_ARs反向激动剂L655708可以增加坐骨神经损伤大鼠海马组织GAD67蛋白含量,逆转GABA能系统功能破坏,改善认知功能障碍,进一步显示 α5-GABA_ARs参与了慢性神经病理性痛导致的认知功能障碍。     

CK技术检测存活心肌的实验研究

本文利用彩色室壁运动分析技术（ＣｏｌｏｒＫｉｎｅｓｉｓ，简体ＣＫ）与小剂量多巴酚丁胺超声心动图负荷试验（２ＤＥ－ＤＥ）相结合（ＣＫ－ＤＥ），对６条开胸犬心肌顿抑模型进行研究，结果与２ＤＥ－ＤＥ、核素心肌灌注显像和病理检查比较，发现２３个经病理证实的存活心肌节段中ＣＫ－ＤＥ能检出２２个，２ＤＥ－ＤＥ能检出２１个，核素心肌灌注显像以存活分数≥０．１为标准能检出１７个；以存活分数≥０．２为标准能检出１１个。表明ＣＫ－ＤＥ检出存活心肌较核素心肌灌注显像敏感。     

老年脑梗死患者恢复期情绪障碍的特征

背景脑卒中后情绪障碍以焦虑、抑郁常见,但是有关老年脑梗死患者恢复期情绪障碍的研究报告较少.目的探讨老年脑梗死患者恢复期情绪障碍的特点以及情绪障碍与神经功能障碍的关系.设计病例-对照研究.单位苏州市广济医院精神科和苏州市第二人民医院神经内科.对象2001-05/2003-06苏州市第二人民医院神经内科住院后出院的患者87例(病例组),男48例,女39例,年龄61～84岁.均首次发病,病程在第3个月的恢复期者.选择本院健康体检人员68例为对照组,神经系统检查和躯体检查正常,无精神病史,无痴呆表现,男39例,女29例,年龄60～82岁.方法根据统一的指导语,在病程第3个月完成症状自评量表(SCL-90)和改良爱丁堡-斯堪的那维亚量表(SSS)评定,一致性检验Kappa值为0.82.主要观察指标①SCL-90总分和因子分.②SSS总分.结果病例组SCL-90总分、阳性项目、阳性总分、阳性均分均高于对照组(t=4.14～8.09,P=0.000).病例组SCL-90躯体化因子、强迫因子、人际关系因子、抑郁因子、焦虑因子、恐怖因子、精神病性因子评分高于对照组(u=2.107～8.811,P=0.000).两组在敌对和偏执因子的差异无统计学意义(P＞0.05).病例组SCL-90总分及因子分与神经功能缺损总分呈正相关(r=0.806～0.293,P＜0.01).结论老年脑梗死患者恢复期常见抑郁、焦虑和恐怖等情绪障碍.其情绪障碍与神经功能缺损的严重程度有关.