多重脑震荡对大鼠认知行为及多巴胺能神经元的影响

目的 探讨多重脑震荡(MCC) 大鼠认知行为及多巴胺(DA)能神经元的变化.方法 用金属单摆打击装置复制MCC大鼠模型,动物随机分为对照组和伤后1～24 d6个损伤组;应用Morris水迷宫实验,评价大鼠学习记忆功能,用免疫组化结合图像分析方法,研究伤后中脑黑质致密区(SNC)、腹侧被盖区(VTA)DA能神经元变化,并在光镜下对酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞进行计数.结果 在水迷宫测试中,伤后16 d组大鼠逃避寻找平台的时间明显延长;在无平台探测实验中,伤后8、16 d组大鼠在原有平台第三象限停留时间明显减少.在免疫组化实验中,SNC DA能神经元表达在伤后4、8 d组明显升高;VTA在2、4、8、16 d组明显升高(P＜0.05).结论 多重脑震荡大鼠出现较为严重的认知行为障碍;伤后大鼠SNC、VTA DA能神经元表达出现不同程度的增高.     

脑震荡对大鼠认知行为及前额叶皮质多巴胺能神经纤维的影响

目的:探讨脑震荡(BC)大鼠认知障碍的特征及其与前额叶皮质(PFC)多巴胺能神经纤维变化的关系。方法:用金属单摆打击装置复制大鼠单纯性BC模型,伤后分1~24 d多个损伤组;用Morris水迷宫评价大鼠的学习记忆功能;用免疫组织化学技术研究BC后PFC多巴胺能神经纤维的变化。结果:BC伤后1~3 d大鼠隐匿平台逃避潜伏期显著延长,BC后除1 d外,其余各组PFC多巴胺能神经纤维的密度和免疫反应显著高于对照组。结论:BC后大鼠出现近期空间学习记忆功能障碍,多巴胺能神经纤维TH表达增高并持续一段时间。TH早期增高可能是神经递质紊乱,随后持续增高可能是一种代偿反应。     

依达拉奉对永久性脑缺血大鼠脑内Nestin表达的影响

目的观察Nestin在永久性脑缺血大鼠脑内的变化及依达拉奉干预的影响。方法制作大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)SD大鼠模型,应用抗Nestin和抗Nestin/GFAP抗体进行免疫组化单标和免疫荧光双标染色。结果缺血后脑组织有大量Nestin阳性表达,阳性细胞主要分布于缺血侧侧脑室的室管膜下区(SVZ)、梗死灶周围大脑皮质和纹状体。细胞呈星状多突起,形似星形胶质细胞,且脑缺血后的大部分Nestin阳性细胞与星形胶质细胞标记物GFAP有共表达。缺血侧SVZ的Nestin阳性细胞数和免疫阳性表达强度于脑缺血后3 d达到高峰;梗死灶周围大脑皮质和纹状体区阳性细胞数和阳性表达强度分别于缺血后3 d和1周达到高峰;部分细胞聚集于梗死灶边缘,形成一个明显的梗死灶边缘带。经依达拉奉干预后,Nestin阳性细胞计数和表达强度与盐水组比较均升高(P<0.05),尤其在缺血治疗后3 d和1周(P<0.01)。结论脑缺血后,SVZ以及梗塞灶周围大脑皮质和纹状体区域大鼠Nestin阳性细胞数量增多、表达增强;经依达拉奉干预治疗后,Nestin阳性细胞的表达进一步增强,提示依达拉奉治疗可能促进脑缺血后神经干细胞的增生和分化,促进损伤组织的修复,发挥神经保护作用。     

脑缺血时中缝背核5-HT变化的免疫组化观察

目的：探讨沙土鼠有离缺血时中缝背核神经元５－ＨＴ的变化。方法：用免疫组织化学ＡＢＣ法及图象分析对沙土鼠缺血不同时间以及缺血１０分钟后再灌不同时间其中缝背核神经元６－ＨＴ的变化进行研究。结果：脑缺血１０钟、３０分钟时,沙土鼠脑中缝背核５－ＨＴ阳性神经元的平均光密度值（ＯＤ）值与对照组比较无显著性差异;而缺血４小时时则明显降低,差异有显著性（Ｐ〈０．０５）,脑缺血１０分钟后,再灌流２０分钟,５－ＨＴ下     

亚硒酸钠对大鼠胃癌变前期胃窦粘膜G、D和EC细胞的影响

目的：探讨亚硒酸钠对大鼠胃癌变前期胃窦粘膜Ｇ细胞、Ｄ细胞和ＥＣ细胞的影响。方法：用免疫组织化学及图像分析法,观察亚硒酸钠对Ｎ－甲基－Ｎ’－硝基－Ｎ－亚硝基胍诱发的大鼠胃癌变前期胃窦粘膜Ｇ细胞、Ｄ细胞和ＥＣ细胞的变化。结果：Ｎ－甲基－Ｎ’硝基－Ｎ－亚硝基胍短期灌胃后（阳性对照组）,胃窦粘膜Ｇ、Ｄ、ＥＣ细胞的数量和平均光密度值（ＯＤ值）与正常对照组比较均显著减少（Ｐ〈０．０１）。Ｎ－甲基－Ｎ’－硝基－     

不同类型脑震荡对基底前脑胆碱能神经元的影响

目的 通过免疫组织化学的方法,观察不同类型脑震荡大鼠基底前脑胆碱能神经元的影响,初步探讨脑震荡认知障碍的机制。方法 成年SD大鼠36只,复制不同损伤程度的脑震荡模型,用胆碱乙酰转移酶（ChAT）标记基底前脑的胆碱能神经细胞,光镜下计数,并捡测反映ChAT活性的荧度值。结果 单纯型、复杂型脑震荡与对照组相比,复杂型脑震荡组与单纯性脑震荡组相比,大鼠基底前脑内侧隔核、斜角带核垂直支ChAT阳性表达细胞数减少,ChAT活性降低,差异具有显著性。结论 不同类型的脑震荡基底前脑胆碱能神经元变化程度不同,这种变化可能是脑震荡后不同程度认知障碍的病理学基础。     

广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶AcCBL1和AcCBL2基因的克隆、表达及鉴定

目的克隆、表达广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶1 (AcCBL1)和AcCBL2基因,分析重组半胱氨酸蛋白酶rAcCBL1和rAcCBL2的免疫反应性。方法基于广州管圆线虫Ⅳ期幼虫的cDNA文库筛选获得AcCBL1和AcCBL2基因,构建pET-28a-AcCBL1和pET-28a-AcCBL2重组质粒,转入大肠埃希菌BL21 (DE3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达、镍柱纯化后,利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)分析重组蛋白表达情况。蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白对6×His标签单克隆抗体、感染广州管圆线虫的小鼠和患者血清的免疫反应性。结果AcCBL1和AcCBL2基因PCR扩增产物分别约为1 000、1 100 bp。SDS-PAGE结果显示, rAcCBL1为可溶表达蛋白,相对分子质量(M_r)约为37 800; rAcCBL2主要以包涵体形式存在,约为M_r 40 800。Western blotting结果显示, rAcCBL1和rAcCBL2能与6×His标签单克隆抗体、感染广州管圆线虫的小鼠和患者血清特异性结合。结论成功克隆和表达AcCBL1和AcCBL2基因,二者表达产物均具有良好的免疫反应性。     

三重脑震荡鼠模型建立及组织病理学动态改变观察

目的建立三重脑震荡（MCC）大鼠模型,观察MCC鼠不同结构神经元及轴索的病理学变化,探索运动员多次脑震荡损伤机制。方法用金属单摆闭合性脑损伤打击装置复制大鼠MCC模型48只,随机分为1、2、4、8、16和24d组（n=8）。另设正常对照组（n=8）。定时戊巴比妥钠麻醉,4％多聚甲醛心腔灌注处死,取脑。用Nissl染色、Bielschowsky银染和Weil髓鞘染色显示神经元、轴索和髓鞘,对固缩变性神经元数目、轴索直径和髓鞘变性进行半定量分析。结果伤后：①1～24d皮层、海马和脑干网状结构神经元不同程度固缩变性,以2d组为重;②轴索不同程度的肿胀、变形、排列紊乱、收缩球形成;轴索直径平均值均大于对照组,以2、4d组最为明显（P〈0．05）;③髓鞘肿胀、淡染,灰度值增高,与对照组相比,1～16d组均有统计学意义（P〈0．05）。结论大鼠MCC后,脑神经元出现不同程度弥漫性的固缩变性,轴索肿胀、髓鞘淡染的病理改变。