重组人肝再生增强因子可促进实验性肝纤维化基质分解素-1的基因表达

目的：了解重组人肝再生增强因子（hALR)对实验性肝纤维化基质分解素－1（MMP3）基因表达的影响。方法：建立四氯化碳（CCl4)中毒性及人血白蛋白免疫损伤性两种大鼠肝纤维化模型,在造模的同时给予不同剂量的重组hALR。在不同的时间点留取大鼠肝组织标本,提取总RNA,用RT－PCR测定MMP3的基因表达水平。结果：在两种模型中,hALR治疗组大鼠肝组织MMP3的基因表达水平在模型形成的不同阶段均明显高于模型组;高剂量hALR组大鼠肝组织MMP3的基因表达水平均明显高于低剂量组。结论：重组hALR可能有促进大鼠实验性肝纤维化MMP3基因表达的作用。     

抗人肝再生增强因子抗体识别部位的确定

目的：确定抗人肝再生增强因子单克隆抗体所识别的抗原表位。方法：采用蛋白质预测软件预测人肝再生增强因子的抗原决定簇,根据预测结果合成肽进行竞争ELISA验证单克隆抗体所识别部位。结果：人肝再生增强因子的第6～15,68～80以及105～112位氨基酸残基是其抗原表位。结论：采用计算机软件预测,并在此基础上经合成肽验证的方法是一种可靠的抗原表位确定方法。     

筛选与KDR有结合活性的小肽

目的：从噬菌体12肽库和环7肽库中,筛选能够与KDR分子有特异结合活性的小肽。方法：以KDR/IgGFc为靶分子筛选噬菌体12和肽7肽库,经过3轮筛选和竞争性洗脱后,由ELISA、细胞-ELISA和竞争结合实验,鉴定阳性噬菌体克隆并测序。结果：从40个噬菌体克隆中得到12个能特异性与靶分子结合的阳性克隆,其中,6个噬菌体克隆与靶分子有较强的结合力,6个结合力较弱。结论：测序结果表明,12条小肽的一级结构中没有发现共同模式。特异性与KDR结合的活性小肽,有望在临床上作为放化疗药物的导向肽,以提高药物的选择性和降低其毒副作用。     

二甲双胍对巨核细胞白血病细胞株Dami细胞增殖的抑制作用及其机制

目的：研究二甲双胍对巨核细胞白血病细胞株Dami细胞生长的影响,初步探讨二甲双胍抑制Dami细胞增殖的分子机制。方法：将培养的Dami细胞分为空白对照组,1、2、4、8、16和32 mmol?L-1二甲双胍处理组;MTT法检测不同浓度二甲双胍作用后Dami细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期分布,免疫印迹分析Cdc2和Cyclin B1蛋白的表达以及Cdc2蛋白的磷酸化修饰。结果：MTT检测,与空白对照组比较,32 mmol/L二甲双胍处理组0、24、48、72和96 h Dami细胞增殖抑制率明显升高［（35.1±2.3）%、（49.7±5.1）%、（78.8±0.9）%、（79.1±3.0）%和（85.2±3.2）%］（P<0.01）;在二甲双胍处理72 h后,1、2、4、8、16和32 mmol/L处理组Dami细胞增殖抑制率分别为（33.8±1.3）%、（51.9±2.2）%、（59.4±1.6）%、（65.5±2.0）%、（75.5±0.9%）和（79.1±3.0）%,二甲双胍对Dami细胞的增殖抑制作用呈时间和剂量依赖性。流式细胞术检测,与空白对照组比较,1、2和4 mmol/L二甲双胍处理组G2/M期细胞比例从（26.0±0.5）%升高至（38.5±1.5）%、（48.4±1.1）%和（58.2±2.7）%,4 mmol?L-1二甲双胍处理组G2/M期细胞比例明显高于对照组（P<0.01）。免疫印迹分析,与空白对照组比较,4 mmol/L二甲双胍处理组Cdc2和Cyclin B1的表达水平明显下降,Cdc2在Try15位点磷酸化明显上调,而在Thr161位点的磷酸化明显下调。结论：二甲双胍能抑制Dami细胞增殖并诱导其发生G2/M期阻滞,其机制可能与Cdc2/Cyclin B1复合物的活化受到抑制有关。     

预设靶标的放射免疫疗法:一种有潜力的癌症治疗手段

放射免疫治疗常因放射标记的抗体在循环中存留时间过长所致毒性而应用受限.预设靶标的放射免疫疗法(PRIT),通过去除循环放射标记的抗体和使用清除较快的放射性核素,能最大限度地降低毒性.虽然动物实验和临床研究有理想的结果,但仍存在许多问题.DNA重组技术和蛋白质工程的进展、α粒子放射性核素的应用、重视PRIT临床试验设计等,会加速PRIT在癌症治疗中的应用.     

波形蛋白在细胞凋亡中的变化

波形蛋白(vimentin)是一种中间纤维蛋白，由单一多肽链构成，主要分布在中胚层来源的组织中。在细胞中，波形蛋白主要作为结构蛋白起作用。在细胞凋亡过程中，波形蛋白很快被水解。其主要的裂解位点分别位于Asp85和Asp259位置；波形蛋白的裂解是由半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶(caspase)或被该酶激活的一组蛋白酶介导的；由caspase介导的波形蛋白在Asp85位的裂解导致产生一个N端小片段，此片段能够诱导依赖于caspase的细胞凋亡。     

羧肽酶A/B亚家族

羧肽酶A/B是一类水解蛋白质或多肽C 端氨基酸残基的外肽酶。众多学者对其特性、结构及功能进行了深入的研究,最近的研究显示羧肽酶A/B具有一些新的功能。此文拟对羧肽酶A/B亚家族成员的特性、结构特征、结构与功能及其与疾病的关系作一简要综述     

大鼠羧肽酶原B在毕赤酵母中的表达与培养条件优化

目的:利用毕赤酵母表达系统,表达大鼠羧肽酶原B(procarboxypeptidaseB,proCPB)蛋白,同时探讨最优表达条件,为规模化发酵生产羧肽酶B奠定基础。方法:以RTPCR法从SD大鼠胰腺细胞中克隆了proCPB基因,将其插入pPIC9载体,转入毕赤酵母Gs115细胞,在甲醇的诱导下表达目的蛋白。结果与结论:首次实现了proCPB在毕赤酵母中的成功表达;通过表达条件的优化,使用BMGY(pH6.0)培养基,添加0.5%(体积比体积)的酪蛋白水解物和3mmol/L的PMSF,于28℃,每隔12h补加0.5%(体积比体积)的甲醇,重组酵母Gs115proCPB表达的重组蛋白可达500mg/L,表达的目的蛋白占总蛋白的94%,活化后的重组CPB相对分子质量为35.1×103,与理论值(35.2×103)极相近。活性测定表明,重组proCPB活化后的CPB的比活力可达110U/mg(CPB参照品为180U/mg)。     

无胶筛分毛细管电泳分离相差单个碱基的脱氧寡核苷酸方法初探

目的：建立和优化分离不同碱基数目硫代脱氧寡核苷酸的有效方法。方法：用去离子水溶解硫代脱氧寡核苷酸样品并采用核酸蛋白分析仪定量。在无胶筛分毛细管电泳分离分析之前超声波和高速离心脱气。无胶筛分毛细管电泳以线性大分子ssDNA 100-R Gel作为分离介质。为得到最佳效果，对毛细管温度、分离电压、进样方式和进样时间进行了优化。结果：灵敏度、迁移时间和重现性的最佳实验条件为：毛细管温度25℃，电动进样10kV10s，DAD检测器波长为255nm，18kV恒压分离模式。在此条件下，成功分离了依次相差一个碱基的21种脱氧寡核苷酸[pd(A)40-60]。结论：建立并优化了一种简单快速分离相差单个碱基的脱氧寡核苷酸的毛细管电泳方法。