真核细胞DNA碱基损伤及切除修复酶

哺乳动物细胞DNA碱基损伤是基因毒素所致DNA损伤事件中最主要的损伤类型;无嘌呤/无嘧啶碱基位点是DNA分子频发生成的结构损伤。DNA糖苷酶、AP内切核酸酶等DNA修复酶借助碱基切除修复机制修复这些损伤,在DNA损伤修复中起关键作用。     

神经元特异性烯醇化酶ABC—ELISA方法的建立与应用

应用人脑神经元特异性烯醇化酶(NSE)和兔抗人NSE抗体,建立了测定NSE浓度的ABC—ELISA方法。该法灵敏度高、特异性强,标准曲线线性关系好;可用于临床分析病人血清的NSE浓度和诊断肺小细胞癌。     

Livin——癌症治疗的新靶点

Livin是IAPs(inhibitorsofapoptosisproteins,IAPs)蛋白家族的新成员 ,有BIR和RING指结构域 ,能够与Caspas es蛋白结合 ,抑制其介导的细胞凋亡。它在大多数正常成人组织中不表达、在一些肿瘤细胞中的高表达 ,与肿瘤的关系为人们所关注 ,是肿瘤治疗的潜在靶点。     

血管内皮生长因子受体KDR的靶向制剂的制备

目的：研究从噬菌体肽库中筛选到的与血管内皮生长因子受体Ⅱ(KDR)有特异结合活性的小肽，做为KDR靶向药物的先导物质的应用。方法：从噬菌体肽库中筛选能特异结合KDR的噬菌体克隆，挑选结合力最强的克隆测序并化学合成小肽P5，梯度ELISA、阻断实验和竞争结合实验测定小肽在体外与KDR的结合活性。将P5与生物素(NHS-d-Biotin)、BSA化学偶联，ELISA法和细胞免疫组化实验检测偶联物与KDR的结合活性。结果：化学合成的小肽P5在体外能特异结合KDR，Kd=168．6nmol／L，约是KDR与配体血管内皮生长因子(VEGF165)亲和力的1／30，P5能阻断VEGF165与KDR的结合活性，但不能竞争VEGF165与KDR的结合活性。将P5作为导向物质化学合成的P5-BSA-Biotin，在体外同样具有与KDR和细胞表面KDR分子结合的特性。结论：化学合成的小肽P5有望作为先导分子，在以KDR为靶点的肿瘤靶向治疗中得到应用。     

肿瘤标志物—神经元特异性烯醇化酶在肺小细胞癌中的临床意义

报告采用ABC酶联免疫法检测治疗前肺癌病人血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)的活性水平结果。其中肺小细胞癌(SCLC)85例,非肺小细胞癌(NSCLG)194例,良性肺病60例;健康对照(73名)总体均值为9.2±5.0ng/ml。如将NSE>20ng/ml定为正常上限值,SCLC的阳性检出率为91.8％,NSCL)和良性肺部疾病的阳性检出率则分别是12.4％和3.3％,其他非肺部的恶性肿瘤的阳性检出率也很低。因此,NSE是SCIC和NSCLC鉴别诊断的特异性标志物。更有意义地是,NSE可用来监测临床治疗反应,并能预报复发。     

药物的聚乙二醇修饰研究进展

目的 介绍了药物聚乙二醇技术及其在药物研究中的应用最新进展。方法 以国外大量有代表性的献为基础，简要论述了聚乙二醇的生理化学特性、药物的聚乙二醇修饰的优势、修饰技术及其在药物研究中的应用和存在的问题，并评述其应用前景。结果 药物的聚乙二醇修饰技术改变了药物的分子结构，从而改进了药物动力学和药效学的性质，增加了注射药物的临床应用范围和疗效。结论 聚乙二醇修饰技术成功应用于蛋白质药物、有机小分子的前体药物和脂质体药物的研究，显示了药物的聚乙二醇修饰技术良好的应用前景。     

非糖基化尿激酶原的研究

目的：构建一种非糖基化、抗凝血酶激活的尿激酶原突变体，并观察其表达及活性情况。方法：使用PCR扩增的方法，将302位天冬酰胺（Asn302）突变为丙氨酸（Ala302），去掉糖基化位点；将156位精氨酸（Arg156）突变为赖氨酸（Lys156），去掉凝血酶作用位点。将突变体基因转染到哺乳动物细胞中。收取无血清培养上清．并用纤维蛋白板溶解圈法鉴定活性。结果：PCR产物经琼脂糖电泳鉴定分子质量略大于1200bp，与理论分子质量1296bp基本符合。转染成功的细胞株用于扩大培养。纤维蛋白板溶解圈法测定上清活性为295．58IU／mL。结论：非糖基化、抗凝血酶的尿激酶原突变体构建成功。转染后细胞生长良好，表达水平较高。     

重组人肝再生增强因子对实验性肝纤维化血清透明质酸浓度的影响

为了解重组人肝再生增强因子（hALR)对大鼠实验性肝纤维化形成过程中血清透明质酸浓度的影响，建立了四氯化碳中毒性及人血白蛋白免疫损伤性两种大鼠肝纤维化模型，在造模的同时给予不同剂量hALR治疗，并在不同的时间点留取大量血清标本，测定透明质酸浓度。结果表明，在两种模型中hALR两组大鼠血清透明质酸浓度在造模过程中的不同阶段均明显低于模型组，高剂量hALR组大鼠血清透明质酸浓度均明显低于低剂量组，上述结果提示，重组人肝再生增强因子可降低实验性肝纤维化大鼠血清透明质酸含量。     

重组人肝再生增强因子对肝纤维化大鼠基质分解素—1基因表达的影响

为了解重组人肝再生增强因子（hALR）对肝纤维化大鼠基质分解素－1（MMP3）基因表达的影响,建立CCl4中毒性及人血白蛋白免疫损伤性两种大鼠肝纤维化模型,模型完成后予不同剂量hALR治疗,在不同的时间点留取大鼠肝组织标本,提取总RNA,用逆转录定量聚合酶链反应（RT－PCR）测定MMP3的基因表达。结果在两种模型中hALR治疗组大鼠肝组织MMP3的基因表达水平在治疗过程中的不同阶段均明显高于模型组;高剂量hALR组大鼠肝组织基质分解素－1的基因表达水平均明显高于低剂量组,提示hALR可增强肝纤维化大鼠MMP3的基因表达。     

人血小板生成素在大肠杆菌中的高效表达

目的：人血小板生成素（ＴＰＯ）在大肠杆菌中的高效表达。方法：利用ＰＣＲ技术,扩增出了（１－１７４个氨基酸的）人血小板生成素ｃＤＮＡ,并将其克隆到ｐＧＥＸ－１λＴ载体中,构建了融合蛋白表达质粒。重组子用限制性内切酶酶切鉴定。表达产物ＳＤＳ－聚丙烯胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）。结果：限制性内切酶酶切鉴定表明重组子含有正确的（１－１７４氨基酸）ＴＰＯｃＤＮＡ片段;表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ相对分子质量