LC-MS/MS法同时测定ICR小鼠肝脏中15种胆汁酸及其在雷公藤甲素肝毒性研究中的应用

目的：建立同时测定ICR小鼠肝脏中15种胆汁酸的LC-MS/MS法,将其应用到雷公藤甲素肝毒性研究中。方法：小鼠经腹腔注射1 mg·kg^-1雷公藤甲素后,进行血清生化、肝病理切片检查。将肝脏用0.1%甲酸-75%乙腈混合液进行匀浆并经样品处理,采用Ultimate^® AQ-C₁₈色谱柱,流速0.3 mL·min^-1,进行15种胆汁酸色谱分离。结果：LC-MS/MS法测定的15种胆汁酸在2.8~8 000.0 nmol·L^-1浓度范围内具有较好的线性关系,加样回收率在85.8%~114.0%之间,日内、日间精密度均在0.7%~10.8%范围内;腹腔注射1 mg·kg^-1雷公藤甲素后小鼠出现了肝毒性,雷公藤甲素组的胆汁酸浓度有明显上升。结论：该方法准确、稳定性好、灵敏度高,能满足ICR小鼠肝脏中多种胆汁酸的含量测定,为雷公藤甲素肝毒性研究提供了进一步的理论基础。     

亚胺培南血药浓度测定方法改进及其在血浆中稳定性考察

目的:建立高效液相色谱法测定人血浆中亚胺培南浓度,并重点考察亚胺培南血浆样品的稳定性。方法:采用Venusil XBP C₁₈ (5μm,4.6mm×250 mm)色谱柱,以10 mmol·L^-1磷酸二氢钾-含四丁基溴化铵(0.3 mmol·L^-1)甲醇液(96:4,V:V)为流动相,调节pH至7.2,柱温为30℃,内标为5-羟基吲哚-3-醋酸,检测波长300 nm。稳定剂0.5mol·L^-1 3-吗啉丙磺酸缓冲液(pH6.8)-乙二醇-水,体积比2:1:1。结果:低、中、高3个浓度提取回收率分别为(89.6±1.7)%,(93.9±2.2)%,(91.4±0.4)%,批内、批间RSD均小于15%;血浆中亚胺培南在0.1~100 μg·ml^-1浓度范围内线性关系良好(r=0.995~0.996),定量下限为0.1μg·ml^-1;不加稳定剂时,含亚胺培南的血浆样品在室温、4℃、-30℃条件下分别可以稳定2,6,8 h,加入稳定剂后分别为6,12,48 h。结论:本试验建立的分析方法线性范围宽,操作简便,准确度高,可用于亚胺培南血药浓度的测定,适用于重症感染患者治疗药物监测。     

复方小檗碱鞣酸蛋白胶囊的质量控制研究

目的：建立测定复方小檗碱鞣酸蛋白胶囊中4种成分含量及马来酸氯苯那敏与硝酸硫胺含量均匀度的方法。方法：采用均匀实验优选复方小檗碱鞣酸蛋白胶囊中4种成分含量测定提取方法,采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以磷酸盐缓冲液[0.05 mol·L^-1磷酸二氢钾溶液和0.05 mol·L^-1庚烷磺酸钠溶液（1：1）,含0.2%三乙胺,并用磷酸调节至pH 3.0]-甲醇（43：57）为流动相;检测波长262 nm;进样量10 μL,测定复方小檗碱鞣酸蛋白胶囊中盐酸小檗碱、马来酸氯苯那敏、硝酸硫胺和乳酸依沙吖啶含量及马来酸氯苯那敏与硝酸硫胺含量均匀度。结果：硝酸硫胺在25.02~200.2 μg·mL^-1、马来酸氯苯那敏在6.555~78.66 μg·mL^-1、盐酸小檗碱在12.01~96.06 μg·mL^-1和乳酸依沙吖啶在2.491~24.91 μg·mL^-1范围内呈良好的线性关系。回收率分别为104.19%、98.41%、100.48%和98.72%,RSD（n=9）分别为0.56%、1.16%、1.72%和1.67%。结论：建立了简便、快速、准确测定复方小檗碱鞣酸蛋白胶囊中4种成分含量及马来酸氯苯那敏与硝酸硫胺含量均匀度的方法,为复方小檗碱鞣酸蛋白胶囊质量标准的完善提高提供依据。     

来那替尼对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制

目的:探讨来那替尼对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:以0,0.5,1和2 μmol·L^-1四种浓度的来那替尼处理人乳腺癌细胞BT474,MTT法检测其对细胞增殖的影响;流式细胞术检测其对细胞生长周期及凋亡的影响;蛋白免疫印迹法检测其对细胞凋亡信号通路相关蛋白的表达水平。结果:MTT实验结果表明来那替尼可显著抑制人乳腺癌细胞的增殖,2 μmol·L^-1来那替尼处理96 h后,其细胞存活率为31%;流式细胞分析结果表明来那替尼可将BT474细胞阻滞在G₀/G₁期,2 μmol·L^-1来那替尼阻滞效果最为明显,处于G₀/G₁期的细胞百分比为76%;来那替尼也可促进细胞凋亡,2 μmol·L^-1剂量时凋亡率为19.3%。蛋白免疫印迹结果表明来那替尼可减弱细胞内AKT、mTOR的磷酸化蛋白表达水平。结论:来那替尼可能通过抑制细胞内PI3K-AKT-mTOR信号通路促进乳腺癌细胞凋亡,为乳腺癌的治疗提供理论依据。     

LC-MS/MS法测定人血浆中利培酮和9-羟基利培酮的浓度及临床应用

目的：建立简单快速的液相串联质谱法（LC-MS/MS）测定人血浆中利培酮及其代谢物9-羟基利培酮的浓度。方法：血浆样本采用甲醇沉淀蛋白法处理,以地西泮为内标,采用ES Industries Sonoma C₁₈（2）色谱柱（100 mm×2.1 mm,3 μm）分离化合物;流动相包括A-50%甲醇水溶液（含6 mmol·L^-1乙酸铵）、B-0.1%甲酸乙腈溶液;梯度洗脱,总流速0.60 mL·min^-1;进样量10 μL;柱温30℃。采用正离子MRM模式扫描,电喷雾电离,利培酮、9-羟基利培酮及地西泮内标离子通道分别为m/z411.3→m/z191.1、m/z427.2→m/z207.0和m/z285.1→m/z193.1。依据《中国药典》（2015年版）通则中9012"生物样品定量分析方法验证指导原则"对所建方法进行验证。结果：利培酮在0.16~101.40 μg·L^-1的浓度范围内线性关系良好（r>0.999）,9-羟基利培酮在0.40~256.80 μg·L^-1浓度范围内线性关系良好（r>0.999）;在定量下限,低、中、高浓度批内与批间精密度的标准偏差（RSD）均小于10.9%,准确度符合要求;含分析物血浆样品在不同储存条件下结果稳定。该法已成功应用于临床样本治疗药物监测。运用此方法监测分析一千多份临床样本得出总利培酮临床实际测定浓度范围为13.30~93.22 μg·L^-1。结论：本研究建立了测定血浆中利培酮及其代谢物9-羟基利培酮浓度的快速、简便、实用的LC-MS/MS方法。利培酮临床实际测定浓度范围相比于神经精神药理学与药物精神病学协会专家组推荐治疗浓度范围更宽,且多次监测的患者中女性血药浓度相对于男性更趋于稳定。     

118例肾移植患者他克莫司血药谷浓度与肝肾功能及血常规指标的关系

目的:分析肾移植患者他克莫司(FK506)血药浓度的监测情况,探讨FK506血药浓度与肝肾功能及血细胞之间的关系,为临床的合理用药提供依据。方法:收集某院2011年9月-2013年9月118例肾移植患者FK506血药浓度的数据,及血药浓度测定当天的生化、血常规检测结果。根据FK506血药浓度分为6组(1μg·L^-1≤Ⅰ组≤4μg·L^-1,4μg·L^-1<Ⅱ组≤7μg·L^-1,7μg·L^-1<Ⅲ组≤10μg·L^-1,10μg·L^-1<Ⅳ组≤12μg·L^-1,12μg·L^-1<Ⅴ组≤15μg·L^-1,Ⅵ组>15μg·L^-1),对6组中的肝肾功能及血常规指标进行统计分析。结果:肾移植术后患者的FK506血药谷浓度有78.40%在5~15μg·L^-1,其中有68.33%在目标浓度范围内。不同浓度组间,肾功能指标UREA、CREA、eGFR及血常规中RBC、Hb、Hct和GLU均存在显著差异(P<0.01),Ⅵ组的eGFR明显低于其他组,而GLU明显高于其他组;肝功能组合中TP、ALB、GLB和AST、TBIL虽然存在统计学差异但并无明显临床意义。结论:该院肾移植术后患者的FK506血药谷浓度基本控制在5~15μg·L^-1;FK506对肝功能影响较小,临床药师需提醒医师FK506血药浓度过高可能容易引起高血糖和肾毒性。     

高效液相色谱-荧光检测法测定盐酸帕罗西汀在小鼠血浆和脑组织中的蛋白结合率

目的:建立生物样品中盐酸帕罗西汀浓度的高效液相色谱-荧光检测方法,测定盐酸帕罗西汀在小鼠血浆和脑组织中的蛋白结合率。方法:以盐酸普萘洛尔为内标,血浆和脑组织匀浆样品采用醋酸乙酯萃取,采用高效液相色谱-荧光检测方法,其中色谱柱为Eurospher 100-5 C₁₈柱(250 mm×4 mm, 5 μm);流动相为乙腈-0.5%三乙胺水溶液=35:65(磷酸调pH值至3.5);柱温:40℃;流速:1 mL·min^-1;检测波长:激发波长295 nm,发射波长350 nm,进样量:20 μL。蛋白结合率的测定采用平衡透析法。结果:血浆和脑匀浆液中盐酸帕罗西汀在0.05~10 μg·mL^-1范围内线性关系良好,血浆与脑匀浆液基质提取回收率均>75%;日内、日间精密度均<10%。磷酸盐缓冲液盐酸帕罗西汀在0.005~0.5 μg·mL^-1内线性良好,定量下限为0.005 μg·mL^-1,且日内、日间精密度均符合要求。当血浆和脑匀浆液中盐酸帕罗西汀质量浓度为1.0,3.0,6.0 μg·mL^-1时,血浆蛋白结合率分别为(96.14±0.38)%,(96.07±0.88)%,(97.25±0.23)%;脑组织蛋白结合率分别为(99.84±0.031)%,(99.83±0.021)%,(99.80±0.041)%。结论:本研究建立的分析方法快速、简单、灵敏、准确,可用于生物样品中盐酸帕罗西汀含量的测定。小鼠血浆和脑组织中盐酸帕罗西汀蛋白结合率高,只有极少的药物以游离形式存在而发挥作用。     

高效液相色谱法测定重症患者亚胺培南血药浓度及PK/PD达标率研究

目的：建立高效液相色谱法测定重症患者血浆中亚胺培南浓度,并将接受连续性肾脏替代疗法（continuous renal replacement therapy,CRRT）与未接受该疗法患者的结果进行对比,为临床调整用药提供依据。方法：以0.5 mol·L^-1的3-吗啉丙磺酸缓冲液（pH 6~8）-乙二醇-水（2：1：1）为稳定剂,以5-羟基吲哚-3-乙酸为内标,采用超滤离心管去蛋白法进行前处理,取滤过液进样。色谱柱为TSKgel ODS-100V（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相为甲醇-10 mmol·L^-1磷酸二氢钾（6：94,磷酸调pH为6.7~7.0）,流速为0.9 mL·min^-1,检测波长为300 nm,柱温为30℃,进样量为30 μL。测定分析33例接受亚胺培南/西司他丁治疗的重症患者的血药谷浓度,CRRT组14例,非CRRT组19例,以100% T>MIC作为PK/PD靶目标计算用药达标率,评估给药方案。结果：亚胺培南在0.5~50 μg·mL^-1内线性关系良好,定量下限为0.5 μg·mL^-1;批内、批间RSD均小于10%;稳定性试验结果表明血浆样品在处理过程中较稳定。当MIC大于2 μg·mL^-1时,达标率显著降低,且接受CRRT治疗患者的达标率低于未接受CRRT治疗患者。结论：该方法前处理过程简单,灵敏准确,分析时间短,适用于临床亚胺培南个体化用药指导。     

高效液相色谱-串联质谱法同时测定人血浆中瑞格列奈和二甲双胍及其在人体药动学中的应用

目的:建立高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)同时测定人血浆中瑞格列奈和二甲双胍浓度的方法,并进行人体药动学研究。方法:以乙腈沉淀蛋白处理血浆样品,替米沙坦做内标,采用Kromasil 60-5CN色谱柱(2.1 mm×100 mm, 5 μm),流动相为20 mmol·L^-1醋酸铵水溶液(含0.2%甲酸)-乙腈(45:55);质谱采用电喷雾离子化-多反应离子监测(ESI-MRM)。并测定12名健康志愿者单剂量口服瑞格列奈盐酸二甲双胍复方片(2 mg:500 mg)后瑞格列奈和二甲双胍的血浆浓度。结果:瑞格列奈和二甲双胍分别在0.05~50 μg·L^-1、2~2 000 μg·L^-1范围内线性良好,定量下限分别为0.05 μg·L^-1和2 μg·L^-1,日内日间精密度均小于8%,提取回收率分别为77.32%~80.65%和78.98%~82.46%。瑞格列奈和二甲双胍的主要药动学参数C_max分别为(29.50±9.57),(1 167±197.77)μg·L^-1;t_max分别为(0.83±0.39),(1.88±0.64)h;t_1/2分别为(1.11±0.38),(4.31±0.86)h;AUC_0→∞分别为(56.90±20.31),(7 407.32±1 653.25)μg·L^-1·h^-1。结论:建立的分析方法灵敏、准确可靠,样品处理快速、简便,适用于瑞格列奈/盐酸二甲双胍复方片人体药动学和生物等效性研究。     

中空纤维离心超滤法检测人血浆中氨茶碱的游离药物浓度

目的:建立一个准确、简单、快速的分析人血浆中游离氨茶碱浓度的方法,并应用于临床治疗药物监测。方法:0.5 ml血浆样品经过中空纤维离心超滤(HFCF-UF)处理,以甲醇-10 mmol·L^-1乙酸铵缓冲溶液(15/85, V/V)为流动相,采用Diamonsil C₁₈色谱柱分离,流速为1.0 ml·min^-1,检测波长为275 nm,进样量为20 μl。结果:血浆中游离氨茶碱浓度在0.25~25 μg·ml^-1范围内线性关系良好,最低定量限0.1 μg·ml^-1,日内、日间RSD分别小于1.1%和1.3%。结论:该方法简单、准确、重现性好,特别适合基层开展临床游离药物浓度的监测。该方法成功的应用于临床游离氨茶碱浓度的监测,为临床游离氨茶碱治疗药物监测提供了一个可靠的分析平台和进一步阐述游离药物浓度与药物疗效或毒性之间的关系奠定了基础。     

姜黄素衍生物C15对白血病K562/A02细胞多药耐药的逆转作用

目的: 探讨姜黄素衍生物C15对人白血病K562/A02细胞多药耐药(multidrug resistance,MOR)的逆转作用及其作用机制。方法: 四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;流式细胞术检测P-糖蛋白(P-gp)外排泵功能和细胞周期;免疫印迹法检测蛋白表达;P-gp-Glo^TM Assay System试剂盒检测P-gp ATP水解酶(ATPase)活性。结果: C15对K562/A02细胞半数抑制浓度(IC₅₀)大于50 μmol·L^-1。对K562/A02细胞无明显细胞毒的浓度为2.5,5.0,10.0 μmol·L^-1的C15逆转对K562/A02细胞对阿霉素(ADR)耐药的倍数分别为2.60,5.39,11.39,对长春新碱(vincristine, VCR)耐药的倍数分别为4.50,18.07,124.35,但是对非P-gp底物的化疗药物顺铂(cisplatin, CIS)和敏感细胞K562基本无逆转效果。2.5,5.0,10.0 μmol·L^-1 C15可以增加耐药细胞K562/A02胞内罗丹明123(Rh-123)的蓄积量分别为1.93,2.30,2.47倍。C15增加阿霉素(adriamycin, ADR)在K562/A02细胞中的蓄积水平,降低P-gp介导的Rh-123外排速率。2.5,10.0 μmol·L^-1 C15与300 nmol·L^-1VCR联合作用后,可使K562/A02细胞的G2/M期比例从9.36%增加到67.57%和69.38%。C15对P-gp蛋白和ATPase的活性没有抑制作用。结论: C15可能是P-gp的非衣物型抑制剂,且具有逆转K562/A02细胞MDR的作用,该作用与其抑制细胞P-gp的外排泵功能有关。     

高效液相色谱-串联质谱法同时测定大鼠血浆中阿托伐他汀钙和非洛地平的浓度

目的：建立快速灵敏高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）法同时测定大鼠血浆中阿托伐他汀钙和非洛地平的浓度,并研究其单用及联用时在其体内的药动学特征。方法：色谱柱：Diamonsil ODS C₁₈（150 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相：甲醇-0.1%甲酸水溶液（70∶30,V/V）;流速：0.8 mL·min^-1,进样量10 μL。采用ESI+源,选择性离子检测方式（SIM）,对离子反应m/z 559.2（阿托伐他汀钙）,m/z 406.0（非洛地平）,m/z 325.2（内标为甲基睾酮）进行检测。结果：阿托伐他汀钙和非洛地平在0.01~0.8 μg·mL^-1范围内线性关系良好,定量下限0.01 μg·mL^-1,精密度、稳定性均符合要求。与单用组相比,药物联用组阿托伐他汀钙的最大血药浓度由（677.74±100.86）μg·L^-1增加到（789.80±12.16）μg·L^-1,血浆药物-时间曲线下面积由（5 755.90±1 210.84）h·μg·L^-1增加到（6 931.74±228.11）h·μg·L^-1,半衰期由（3.77±0.89）h变为（3.60±0.36）h;联用组中非洛地平的最大血药浓度由（492.40±69.30）μg·L^-1上升到（751.50±26.12）μg·L^-1,血浆曲线下面积由（4 150.66±725.61）h·μg·L^-1增加到（6 854.87±725.61）h·μg·L^-1,半衰期由（2.64±0.20）h延长至（2.88±0.23）h。结论：该方法灵敏、准确、可靠,专属性强,适用于阿托伐他汀钙和非洛地平在大鼠体内的药动学研究。     

复方龙星片高效液相色谱指纹图谱研究

目的：建立复方龙星片的高效液相色谱指纹图谱。方法：采用迪马Spursil C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,以水-甲醇-0.2%甲酸乙腈-0.01 mol·L^-1磷酸二氢钾溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长：254 nm;进样量：15 μL,柱温：30℃。结果：确定了17个共有峰,并对其中10个峰进行了归属。10批样品指纹图谱的相似度均在0.94以上。结论：该方法稳定、重复性好,为复方龙星片的质量控制提供参考。     

尿激酶中分子组分比2种测定方法的建立和比较研究

目的:建立尿激酶中分子组分比测定的分子排阻色谱法与十二烷基硫酸钠毛细管电泳法,并对2种方法的方法学验证与样品测定结果比较。方法:分子排阻色谱法采用TSKgel G2000SWXL色谱柱(7.8mm×300 mm,5μm),以0.1 mol·L^-1磷酸二氢钠缓冲液(pH 3.0)为流动相,流速0.5 mL·min^-1,柱温35℃,检测波长280 nm,进样量50μL;十二烷基硫酸钠毛细管电泳法采用未涂层熔融石英毛细管(50μm×30.2cm,有效长度20.2 cm),分离电压为15 kV,柱温25℃,检测波长214 nm,进样端为正极,5 kV压力进样20 s。结果:通过对分子排阻色谱法与十二烷基硫酸钠毛细管电泳法的方法学验证与样品测定结果的比较,证明两种方法测定结果基本一致。分子排阻色谱法:高分子量与低分子量尿激酶质量浓度在0.05~5.1mg·mL^-1范围内呈良好的线性关系;检测下限分别为1.5μg·mL^-1与5.1μg·mL^-1,定量下限分别为5.1μg·mL^-1与16.9μg·m L^-1;8批样品中高分子量与低分子量尿激酶相对含量范围分别为87.0%~96.4%与3.6%~13.0%。十二烷基硫酸钠毛细管电泳法:高分子量与低分子量尿激酶质量浓度在0.1~5.2 mg·mL^-1范围内呈良好的线性关系;检测下限分别为2.5μg·mL^-1与51.8μg·mL^-1,定量下限分别为7.5μg·mL^-1与155.4μg·m L^-1;8批样品中高分子量与低分子量尿激酶相对含量范围分别为88.2%~97.3%与2.7%~11.8%。结论:分子排阻色谱法与十二烷基硫酸钠毛细管电泳法都适用于尿激酶中分子组分比的测定并互为补充。     

高效液相色谱法检测脑脊液中万古霉素药物浓度方法学建立

目的：建立一种有效、灵敏、准确的可用于检测人脑脊液内万古霉素浓度的方法学。方法：色谱柱：Diamonsil C₁₈（200 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相：乙腈-0.05 mol·L^-1磷酸二氢钠溶液（pH 3.6）（9：91）,流速：0.8 mL·min^-1,紫外检测波长：236 nm,内标：去甲万古霉素,柱温：40℃,进样量：20 μL。结果：万古霉素峰与其他药物峰分离良好,不受脑脊液内源性物质干扰。在0.40~101.00 μg·mL^-1范围内万古霉素浓度和两者峰面积比值呈线性关系（r=0.999 6）,最低定量限0.40 μg·mL^-1。万古霉素和内标的保留时间分别为13 min和10 min,日内和日间RSD均小于10%,低、中、高3个浓度提取回收率分别为60%、30.6%、28.8%。结论：此方法具有较高可行性,准确度高,适用于脑脊液中万古霉素浓度检测。     

高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中抗肿瘤化合物WJD-A-1及其药动学研究

目的：建立大鼠血浆中抗肿瘤化合物WJD-A-1的高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）测定方法，并研究静脉注射WJD-A-1后在大鼠体内的药动学特征。方法：以苯海拉明为内标，大鼠血浆样品经甲醇-乙腈处理，用色谱柱Waters ACQUITY UPLC^® BEH C₁₈（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）进行分离，以甲醇-0.1%甲酸（80∶20）为流动相，采用电喷雾离子源（ESI）正离子模式及多重反应监测模式，检测离子对分别为WJD-A-1（m/z 480.6→334.6，480.6→164.3）以及苯海拉明（m/z 256.0→166.8）。将建立的检测方法应用于测定大鼠静脉注射化合物WJD-A-1后的血浆浓度。结果：大鼠血浆中化合物WJD-A-1在5.40~5.40×10³ ng·mL^-1浓度范围内线性关系良好；低、中、高3个质控浓度下的日内、日间精密度均小于10%，质控样品的准确度为97.45%~106.80%；提取回收率为95.40%~96.17%，无明显基质效应且稳定性良好。大鼠静脉给与化合物WJD-A-1三个剂量75，150，300 μg·kg^-1后，血浆中WJD-A-1的半衰期t_1/2分别为（0.10±0.05） h、（0.24±0.02） h、（0.51±0.06） h；其浓度-时间曲线下的面积AUC_（0-t）分别为（150.60±21.69）μg·h·L^-1、（883.07±135.68）μg·h·L^-1、（3 311.59±418.15）μg·h·L^-1。结论：该检测方法简单、快速、灵敏、准确，适用于抗肿瘤化合物WJD-A-1在大鼠血浆内的浓度测定及其药动学研究。药动学参数表明大鼠静脉注射该化合物后体内消除较快，且该化合物在大鼠体内的暴露量与给药剂量成正比。     

替加氟温敏凝胶含量测定方法的建立

目的:建立以高效液相色谱法测定替加氟温敏凝胶含量的最佳方法。方法:通过对中国药典和参考文献中测定替加氟温敏凝胶含量的HPLC方法进行比较,并根据凝胶剂特点考察检测条件、样品处理方法,测定替加氟温敏凝胶含量,对各方法回收率进行考察,做出综合评价。 结果:在流动相为:0.02 mol·L^-1磷酸二氢钾溶液-甲醇(60:40)的条件下,替加氟在2~15 μg·ml^-1范围内线性关系良好(r=0.999 8),平均加样回收率为99.71%,精密度RSD低于2%,符合要求。3批样品中替加氟的平均含量为标示量的(99.90±0.78)%。结论:本检测方法简便、快速、结果准确、重复性好,可为替加氟温敏凝胶的质量控制提供分析依据。     

前处理方法和外源性物质对含β-HgS药物中甲基汞检测假阳性结果的影响研究

目的:探索前处理方法和外源性物质对药物中β-硫化汞(β-Hg S)转化为甲基汞带来的影浓度、物理浸萃前处理手段和外源性物质对β-Hg S转化为甲基汞的影响,采用高效液相色谱与冷蒸气-原子荧光光谱法(HPLC-CV-AFS)在线耦合测定甲基汞。色谱柱为Agilent Eclipse Plus C₁₈柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以甲醇-0.06 mol·L^-1乙酸铵溶液(含0.1%L-半胱氨酸)(5∶95)为流动相,流速1 mL·L^-1,进样体积100μL,检测波长254 nm。结果:15 mgβ-Hg S经超纯水前处理后,测得甲基汞浓度低于检测下限;经5 mol·L^-1盐酸或25%氢氧化钾-甲醇溶液分别前处理后,发现有β-Hg S转化为甲基汞,甲基汞质量浓度为(0.63±0.01)μg·L^-1和(2.32±0.07)μg·L^-1,占可溶性汞的比值分别为0.067%和1.162%;β-Hg S经加热法前处理后,转化甲基汞质量浓度为(0.71±0.03)μg·L^-1,显著高于振荡法[(0.52±0.02)μg·L^-1]和超声法[(0.61±0.01)μg·L^-1],3种物理浸萃方法的甲基汞占可溶出汞比值无显著性差异,分别为0.059%、0.061%和0.062%;盐酸浓度为0.5~5.0 mol·L^-1时,测得甲基汞质量浓度为(0.52±0.02)~(0.63±0.04)μg·L^-1(占可溶性汞的比值为0.454%~0.069%),8 mol·L^-1盐酸浓度下甲基汞的浓度显著升高为(1.50±0.08)μg·L^-1(占可溶性汞的比值为0.018%);与β-Hg S对照组[甲基汞浓度(0.64±0.02)μg·L^-1,占可溶性汞的比值为0.069%]相比,加入纤维素和植物混合组分后甲基汞浓度为(0.76±0.03)μg·L^-1和(1.44±0.07)μg·L^-1,占可溶性汞的比值分别为0.070%和0.114%。结论:本研究表明,当样品中存在较高含量β-Hg S(≥15 mg)时,在5 mol·L^-1盐酸或25%氢氧化钾-甲醇溶液做前处理溶剂的条件下,β-Hg S经前处理后会转化为甲基汞,转化的甲基汞浓度与酸浓度呈正相关,加热能够促进甲基化的发生,某些外源性物质如纤维素等可促进高含量β-Hg S样品转化为甲基汞。     

超高效液相色谱串联质谱法快速测定尼扎替丁在人体血浆中的含量

目的: 建立超高效液相色谱串联质谱法测定人体血浆中尼扎替丁的含量。方法: 血浆以甲醇直接沉淀蛋白, 上清液用于目标物的检测;色谱柱为Waters ACQUITY UPLC BEH C₁₈;流动相为5 mmol·L^-1醋酸铵水溶液-甲醇 (65:35, V/V);流速:0.20 mL·min^-1;进样量:3 μL;柱温:35 ℃;样品室温度:6 ℃;采用电喷雾正离子模式电离, 尼扎替丁和内标雷尼替丁的监测离子分别为(m/z)332.2→155.0, (m/z)315.2→130.0。结果: 尼扎替丁的线性范围为10~3 000 ng·mL^-1, 平均回收率为93.2%~101.1%, 批内、批间RSD均小于15%。结论: 本研究建立的分析方法快速、准确、灵敏、简便, 适用于尼扎替丁人体药动学方面的研究。     

蓼大青叶醇提物体内外抗氧化活性的研究

目的采用体内外试验方法研究蓼大青叶抗氧化活性。方法通过考察蓼大青叶体积分数95%甲醇提取液清除二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)活性以及对H2O2诱导小鼠红细胞氧化溶血的影响,评价其体外抗氧化活性;通过研究蓼大青叶体积分数95%甲醇提取液对CCl4所致急性肝损伤小鼠血浆中总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力、丙二醛(MDA)水平及肝匀浆液中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力的影响,探讨蓼大青叶的体内抗氧化活性。结果蓼大青叶体积分数95%甲醇提取液质量浓度在25¹ 000 mg·L-1内可有效清除DPPH·,IC50为103.4 mg·L-1;蓼大青叶体积分数95%甲醇提取液质量浓度在251 000 mg·L-1内可有效清除DPPH·,IC50为103.4 mg·L-1;蓼大青叶体积分数95%甲醇提取液质量浓度在25¹00 mg·L-1内具有H2O2诱导红细胞氧化溶血抑制作用;剂量范围在3100 mg·L-1内具有H2O2诱导红细胞氧化溶血抑制作用;剂量范围在3¹2 g·kg-1内能减少小鼠血浆中MDA水平,增加T-SOD活性,提高肝匀浆液GSH-Px活性。结论蓼大青叶体积分数95%甲醇提取物具有一定的体内外抗氧化活性。