HPLC法测定人参三七颗粒中人参皂苷Rg1、Re、Rb1和三七皂苷R1的含量

摘 要 目的: 建立同时测定人参三七颗粒中人参皂苷Rg₁、Re、Rb₁和三七皂苷R₁含量的方法。方法: 采用HPLC法,色谱柱为Sunfire C₁₈（150 mm×4.6 mm,5 μm）分析柱,流动相以乙腈-水梯度洗脱;检测波长为203 nm;柱温30℃;流速1.0 ml·min^-1。结果:人参皂苷Rg₁,Re,Rb₁和三七皂苷R₁之间有较好的分离度,4种成分在线性范围内与峰面积之间线性关系良好,人参皂苷Rg₁、Re、Rb₁和三七皂苷R₁加样回收率分别为99.83%,97.84%,98.43%,97.34%,RSD分别为2.08%,1.66%,1.73%和1.42%（n=5）。结论:本方法可同时测定人参三七颗粒中的人参皂苷Rg₁,Re,Rb₁和三七皂苷R₁含量。     

UFLC法测定复方丹参片中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及Rb1

目的 探索建立超快速液相色谱（UFLC）法测定复方丹参片中三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁及Rb₁。方法 采用SHIMADZU Shim-pack XR-ODS Ⅲ（2.0 mm×75 mm, 1.6 μm）色谱柱;以乙腈-水作为流动相进行梯度洗脱;体积流量为0.4 mL/min;检测波长为203 nm;进样体积为3 μL。结果 三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁及Rb₁分别在0.025 7～0.257 0、0.101 2～1.012 0、0.104 4～1.044 0 μg与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为96.7%、98.1%、98.8%。结论 本方法在15min内可以将三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁及Rb₁有效分离,节省了大量人力和流动相的消耗,为中药的质量控制技术提供参考方法。     

三七皂苷中人参皂苷Rg1与Rb1口服吸收及其体内药代动力学的研究和比较

分别考察三七总皂苷(PNS)在大鼠灌胃和静脉给药后的人参皂苷Rg₁(Rg₁)、人参皂苷Rb₁(Rb₁)的胆汁排泄；采用平衡透析法测定药物的血浆蛋白结合率；并结合药代动力学的实验结果，研究和比较Rg₁与Rb₁的口服吸收及其体内药代动力学性质。结果表明，静脉给药后10 h，Rg₁及Rb₁胆汁排泄累积量分别为给药剂量的(61.48±18.30)%和(3.94±1.49)%；灌胃给药后12 h，Rg₁及Rb₁胆汁排泄累积量分别为给药剂量的(0.91±0.51)%和(0.055±0.02)%。Rg₁及Rb₁的血浆蛋白结合率分别为6.56%～12.74%和80.11%～89.69%。Rg₁的胃、肠和肝的通过率(F_S，F_I和F_H)分别为49.85%，13.05%和50.56%；Rb₁分别为25.82%，4.18%和65.77%。因此，肠壁吸收差是Rg₁和Rb₁生物利用度低的主要原因。Rg₁具有较高的胆汁排泄和较低的血浆蛋白结合率，Rb₁的胆汁排泄较低，而血浆蛋白结合率较高。Rb₁的肠黏膜透过性和体内消除速度都低于Rg₁，但前者的平均滞留时间(MRT)和血药浓度曲线下面积(AUC)均大于后者。     

HPLC-ELSD同时测定跌打丸中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量

目的 建立同时测定跌打丸中三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁和人参皂苷Rb1含量的HPLC-ELSD检测方法。方法 采用Phenomenex Kinetex C₁₈色谱柱(100 mm×4.6 mm,2.6 μm),柱温30 ℃,流速0.5 mL·min^-1,流动相为乙腈-水,梯度洗脱,ELSD检测器,漂移管温度110 ℃,载气(空气)体积流量3.0 L·min^-1。结果 三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb1分别在0.158~3.16 μg(r=0.999 8),0.407~8.14 μg(r=0.999 5),0.446~8.92 μg(r=0.999 9)内呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.55%(RSD=1.04%),98.09%(RSD=1.03%),97.34%(RSD=0.81%)。结论 该方法简便、快速、准确,可用于跌打丸的质量控制。     

HPLC梯度法测定复方三七维康胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、Rg1的含量

摘 要 目的:建立HPLC梯度法同时测定复方三七维康胶囊中三七皂苷R₁、人参皂苷R_b1、R_g13种皂苷的含量。方法: 色谱柱：大连Spherisorb C¹⁸分析柱(200 mm×4.6 mm,5 μm);流动相：乙腈-水,梯度洗脱;流速:1.0 ml·min^-1;检测波长 203 nm。结果:三七皂苷R₁、人参皂苷R_g1和R_b1分别在1.06～18.55 μg（r=0.997 3）、2.02～35.35 μg（r=0.998 2）和2.02～35.35 μg（r=0.998 2）之间线性关系良好。平均回收率三七皂苷R₁为100.8%（RSD=1.53%,n=5）,人参皂苷 R_g1为98.9%（RSD=1.87%,n=5）,人参皂苷R_b1为99.7%（RSD=1.90%,n=5）。结论:HPLC梯度洗脱法能够将多种皂苷很好地分离检测,该方法准确可靠,重复性好,可用于控制其质量。     

HPLC法同时测定舒血灵胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷RG1及人参皂苷Rb1的含量

摘 要 目的： 建立舒血灵胶囊中三七皂苷R₁、人参皂苷RG₁及人参皂苷Rb₁的含量测定方法。方法: 采用Hypersil ODS-2 C₁₈（250 mm×4.6 mm, 5 μm）色谱柱;以乙腈(A)-水(B)为流动相进行梯度洗脱,流动相梯度为：0～8 min,20%A→20%A,8～40 min,20%A→30%A,40～60 min,30%A→45%A;流速：1.0 ml·min^-1;柱温：25℃;检测波长：203 nm;进样量：20 μl。结果: 三七皂苷R₁在浓度0.05～0.50 mg·ml^-1范围内,人参皂苷RG₁和Rb₁在浓度0.20～2.00 mg·ml^-1范围内,与峰面积呈较好的线性关系（r=0.999 9）;三种成分的平均加样回收率分别为98.79%、98.42%、98.89%,RSD分别为0.85%、0.97%、0.74%（n=6）;日内精密度分别为0.49%、0.20%和0.39%;日间精密度分别为0.75%、0.56%和0.51%;稳定性、重复性试验的RSD<1%。结论:本试验建立的测定方法简便、准确性高、重复性好,可用于该制剂的含量测定。     

HPLC-ELSD法测定胃康颗粒中人参皂苷Rb1和黄芪甲苷的含量

目的 优化胃康颗粒中人参皂苷Rb₁和黄芪甲苷的提取方法,并建立其含量测定方法。方法 以人参皂苷Rb₁和黄芪甲苷的含量作为指标,采用单因素考察法对提取工艺进行优化;采用高效液相色谱-蒸发光散射法（HPLC-ELSD）,XBridge^®Shield RP₁₈（4.6 mm×250 mm,5 μm）为色谱柱;乙腈-水（32：68）为流动相;柱温为30 ℃;漂移管温度为60 ℃,载气流量为1.7 SLM,建立测定胃康颗粒中人参皂苷Rb₁和黄芪甲苷含量的方法。结果 当采用甲醇回流提取1.5 h,正丁醇提取5次,氨水洗涤2次时,人参皂苷Rb₁和黄芪甲苷的提取含量较高;建立的HPLC-ELSD法测定人参皂苷Rb₁和黄芪甲苷含量,线性关系良好（r > 0.9997）,日内日间精密度均小于1%,加样回收率分别为95.65%和100.57%,稳定性和重复性的RSD均小于3%,含量分别为2.8630 mg/g和0.2576 mg/g,RSD分别为0.62%和1.51%。结论 优化了胃康颗粒中人参皂苷Rb₁和黄芪甲苷的提取方法,建立了可靠、准确、重现性好的测定胃康颗粒中人参皂苷Rb₁和黄芪甲苷含量的HPLC-ELSD方法。     

活骨丸质量标准研究

目的 对活骨丸进行质量标准研究。方法 采用薄层色谱法,对制剂中丹参、地黄、当归、川芎、三七、土鳖虫、制草乌进行专属性鉴别;采用高效液相色谱（HPLC）法对处方三七有效成分人参皂苷Rg₁、Rb₁和三七皂苷R₁进行含量测定。以乙腈和水按不同比例混合后进行梯度洗脱,流速每为1.0 ml/min;柱温30℃;检测波长为203 nm;进样量为10 μl。结果 丹参、地黄、当归、川芎、三七、土鳖虫、制草乌等的薄层图谱特征斑点清晰,分离度好,阴性对照无干扰。三七皂苷R₁、人参皂苷Rb₁和Rg₁分别在39.92~399.2、84.28~842.8 μg/ml和135.86~1 358.6 μg/ml范围内有良好的线性关系;三七皂苷R₁、人参皂苷Rb₁和人参皂苷Rg₁的平均回收率分别为102.35%、103.84%、102.97%,RSD均小于2.0%。结论 所建立的质量标准准确、重复性良好,可用于活骨丸的质量控制。     

人参皂苷Rg1对H2O2诱导的HaCaT细胞氧化损伤保护作用研究

目的 观察人参皂苷Rg₁对H₂O₂诱导的HaCaT细胞氧化损伤保护作用,并探讨其机制。方法 体外培养HaCaT细胞, H₂O₂诱导细胞建立氧化应激损伤模型,分为空白组、H₂O₂损伤组、人参皂苷Rg₁保护组。细胞增殖与毒性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率,Hochest染色法检测细胞凋亡情况,活性氧检测试剂盒测定细胞活性氧(ROS)水平,Western blot检测细胞中caspase-3、caspase-6、caspase-8、GAPDH蛋白表达。结果 H₂O₂诱导HaCaT细胞半数抑制浓度为100 μg?mL^-1;与H₂O₂损伤组比较,5、10和15mg?L^-1人参皂苷Rg₁预处理后,HaCaT细胞存活率明显升高(P<0.05),细胞核皱缩损伤状态明显改善,细胞凋亡数量显著减少。同时,人参皂苷Rg₁预处理可显著降低HaCaT细胞ROS水平,下调凋亡相关标志蛋白-活化型caspase-3、caspase-6、caspase-8蛋白表达水平。结论 人参皂苷Rg₁对H₂O₂诱导的HaCaT细胞氧化应激损伤具有一定的保护作用,其机制可能与增强细胞清除自由基能力及抑制凋亡相关。     

基于近红外光谱分析技术的注射用益气复脉(冻干)红参醇提过程在线监测

目的 利用近红外光谱分析技术建立注射用益气复脉（冻干）主要原料红参醇提过程中3种单体皂苷——人参皂苷Rg₁、Re和Rb₁的定量模型,实现提取过程中关键指标的快速检测。方法 在线采集红参醇提过程的近红外光谱,以超高效液相色谱（UPLC）法测定提取过程药液中人参皂苷Rg₁、Re和Rb₁的量为参考值,采用偏最小二乘法建立光谱与测定值之间的定量校正模型,进而对提取过程进行在线分析。结果 人参皂苷Rg₁和Re的建模波段均为9 403.7～7 498.3 cm^-1和6 102～5 446.3 cm^-1组合波段;人参皂苷Rb₁的建模波段为5 774.1～5 446.3 cm^-1。人参皂苷Rg₁、Re、Rb₁定量模型的交叉验证决定系数（R²）分别为99.40、99.44、99.41,交叉验证均方根误差分别为5.18、2.77、11.00。结论 所建立的3种单体皂苷定量模型预测性能良好,能够有效测定红参醇提过程中人参皂苷Rg₁、Re和Rb₁的量。     

红参中总皂苷及人参皂苷Rg1、Re、Rb1

目的测定不同产地的26批红参药材中总皂苷及人参皂苷Rg₁、Re、Rb₁的含量。方法采用紫外可见分光光度法测定红参中总皂苷的含量,高效液相色谱法测定红参中人参皂苷Rg 1、Re、Rb 1的含量。结果26批红参药材中总皂苷含量为1.2%~3.0%,人参皂苷Rg₁、Re含量之和为0.17%~0.61%,人参皂苷Rb₁含量为0.21%~0.81%。结论不同产地的红参药材总皂苷及人参皂苷Rg₁、Re、Rb₁的含量存在差异,提示应进一步规范红参药材的种植、加工炮制及标准的建立。     

三七茎基总皂苷的提取及人参皂苷Rg1和Rb1的含量测定

目的利用LC-MS/MS,建立同时测定三七茎基总皂苷中人参皂苷Rg1和Rb1含量的分析方法。方法色谱柱：BDS HYPERSUL C18柱（150 mm×2.1 mm,5μm）;流动相：乙腈-水（梯度洗脱）;柱温：30℃;质谱条件：采用负离子多反应监测方法（MRM）测试,用于定量分析的对照品离子对分别为：人参皂苷Rg1 m/z 799.6→475.5;人参皂苷Rb1 m/z1 107.9→783.7;内标物紫杉醇m/z 852.5→525.3。结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的线性范围分别为0.173～17.3μg.mL-1和0.159～16.0μg.mL-1,精密度和准确度等均符合样品分析的要求。结论该法准确、灵敏、特异性强,适用于三七茎基总皂苷及其制剂中人参皂苷Rg1、Rb1浓度的同时测定。     

高效液相色谱-光化学衍生法测定湖南产莲子中黄曲霉毒素G1、G2、B1、B2

目的对不同来源的湖南产莲子中黄曲霉毒素G_1、G_2、B_2、B_1进行高效液相色谱-光化学衍生法测定。方法采用高效液相色谱–光化学衍生法,采用岛津GL Inertsil ODS-3色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇–乙腈–水(35∶13∶52),柱温35℃;光化学衍生器(254 nm)激发波长λ_(ex)=360 nm,发射波长λ_(ex)=450 nm。结果黄曲霉毒素G_1、G_2、B_2、B_1分别在6.7～33.3、11.4～56.8、10.3～51.5、4.1～20.3 pg线性关系良好;平均回收率分别为98.07%、97.72%、96.11%、99.52%,RSD值分别为1.69%、1.40%、2.72%、1.34%(n=6)。9批莲子样品中,有6批未检出黄曲霉毒素,来自于农贸市场农户自存的2批次检出黄曲霉毒素B_1,实验室塑料袋包装储存1年的1批检出黄曲霉毒素B_1、B_2,但质量分数均低于法定标准限量。结论不同来源湖南产莲子中黄曲霉毒素质量分数均低于《中国药典》2020年版规定限量。该法测定结果准确、重复性良好,可为完善莲子安全性控制和质量标准提升提供实验依据。     

高效液相色谱-荧光检测法测定沉香中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2

目的建立高效液相色谱–光化学衍生–荧光检测法测定沉香药材中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2。方法采用高效液相色谱法,通过免疫亲和柱提取和净化,荧光检测器检测。Agilent Zorbax Ecilpse Plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇–水(45∶55);体积流量:0.8 m L/min;柱温:30℃;进样盘温度:4℃;荧光激发波长为360 nm,发射波长为450 nm。结果黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2分别在9.3~74.4、3.0~24.0、9.3~74.4、3.5~28.0 pg线性关系良好,r均大于0.998 0;检测限分别为1.86、0.60、1.86、0.70 pg,定量限分别为7.44、2.40、7.44、2.80 pg。平均回收率分别为78%、92%、82%、99%,RSD值分别为4.4%、3.0%、4.3%、2.8%。结论所建立的方法结果准确、重复性、稳定性均良好,可用于沉香药材中黄曲霉毒素的质量控制。     

HPLC法测定复方吡拉西坦脑蛋白水解物片中维生素B1、B2和B6含量

摘 要 目的:建立HPLC法测定复方吡拉西坦脑蛋白水解物片中维生素B₁、维生素B₂和维生素B₆含量的方法。方法: 采用Insteril ODS-3色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相：0.01 mol·L^-1庚烷磺酸钠（含0.25%三乙胺,用冰醋酸调节pH至3.8)-甲醇（75∶25）,柱温30℃,检测波长为280 nm,流速：1.0 ml·min^-1。结果: 维生素B₁、维生素B₂、维生素B₆分别在3.98～99.40 μg·ml^-1（r=0.999 7）、4.08～101.91μg·ml^-1（r=0.999 9）、2.08～52.00 μg·ml^-1（r=0.999 9）范围内线性关系良好,平均回收率分别为99.18%、99.53%、99.27%,RSD分别为0.60%、0.67%、0.71%(n=9)。结论:本法简便、快速、准确,可用于复方吡拉西坦脑蛋白水解物片中维生素B₁、维生素B₂和维生素B₆的含量测定     

Aflatoxin B1 and fumonisin B1 affect the oxidative status of bovine peripheral blood mononuclear cells

Mycotoxins are secondary metabolites having a high cytotoxic potential. They are produced by molds and released in food and feed. To date, the mechanisms underlying the mycotoxin-induced cytotoxicity have not been fully clarified. The induction of oxidative stress, as a possible mechanism, has been postulated. This in vitro study was focused on the effect of two widely occurring mycotoxins, aflatoxin B₁ (AFB₁) and fumonisin B₁ (FB₁), on the oxidative status of bovine peripheral blood mononuclear cells (PBMC) incubated for 2 and 7 days at different levels of AFB₁ (0, 5 and 20 μg/ml) and FB₁ (0, 35 and 70 μg/ml). Reactive oxygen metabolites (ROM), intracellular thiols (SH), malondialdehyde (MDA) and gene expression of cytoplasmic superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GSHPX-1) were measured on PBMC after incubation. The highest concentration of AFB₁ and all concentrations of FB₁ caused an increase (p < 0.05) of intracellular ROM without any time dependent effect. Intracellular SH decreased with 20 μgAFB₁/ml (p < 0.05) and the effect was particularly marked after 7 days of exposure. Intracellular SH were not affected by FB₁ even though a lower (p < 0.05) SH level after 2 days exposure than after 7 days was observed. MDA increased (p < 0.05) in AFB₁ or FB₁ treated PBMC. The exposure to FB₁ for 7 days increased MDA (p < 0.05) only in cells treated with 70 μg/ml. Exposure of PBMC to AFB₁ reduced SOD mRNA while FB₁ decreased both SOD and GSHPX-1 mRNA abundance. These results demonstrate that, even though by different mechanisms, AFB₁ and FB₁ may induce cytotoxicity through an impairment of the oxidative status of PBMC.     

HPLC法测定四维钙片中维生素C、B1、B2的含量

目的：建立高效液相色谱法测定四维钙片中维生素C、维生素B1和维生素B2含量的方法.方法：采用SHISEIDOC18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,以0.05％磷酸溶液（含0.005 mol·L-1己烷磺酸钠）-乙腈（88：12）为流动相,流速：1.0ml· min-1,检测波长：244 nm,柱温：30℃,进样量：20μm.结果：维生素C、维生素B1和维生素B2的线性范围分别为7.52～90.24 μg· ml-1（r=1.000 0）,1.32 ～15.82 μg·ml-1（r=1.000 0）和1.27～15.24μg·ml-1 （r=1.000 0）;平均回收率分别为101.63％、99.77％和100.25％,RSD分别为1.51％、1.48％和1.84％（n=9）.结论：本法操作简便,结果准确、可靠,可用于四维钙片中维生素C、B1、B2的含量测定.     

人参皂甙Rb1和Rg1对小鼠中枢神经递质受体和脑内蛋白质合成的影响

应用放射配基结合法测定了人参皂甙Rb₁和Rg₁对α₁,α₂,β肾上腺素能受体、M胆碱能受体、5-羟色胺、多巴胺及GABA等七种受体的作用。结果均不能证明它们对这七种受体有亲和力。但给动物ip药物连续5天,Rb₁和Rg₁均能使中枢M胆碱受体密度显著增高。Rb₁及Rg₁还能显著增加脑内蛋白质的含量。上述实验结果对解释人参的中枢作用提供了重要证据。