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1.
HBV adr亚型基因疫苗诱导小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:构建乙型肝炎病毒(HBV)adr亚型基因疫苗pCMV-S2.S(PS),观察其诱导小鼠所产生的特异性体液和细胞免疫应答。方法:将PS注射于C57BL/6小鼠胫骨前肌内,应用ELISA方法检测不同时间小鼠血清中抗HBs抗体以及采用^51Cr释放实验检测淋巴细胞杀伤功能。结果:注射基因疫苗1周后,血清中抗HBs抗体转阳,4周后抗体达到高峰,并以高水平维持至少8周;第12周时PS诱导小鼠产生了良好的HBV特异的细胞免疫应答(P<0.05)。结论;所构建的HBV adr亚型基因疫苗PS能够诱导小鼠产生较好的体液和细胞免疫应答。 相似文献
2.
目的:构建HBV表面抗原preS2-S基因表达质粒,并探讨其在小鼠体内的表达及诱导体液免疫应答的能力.方法:采用PCR方法,以PBR322-HBV2.0(adr亚型)质粒DNA为模板获得HBV preS2-S基因,并将其重组进入pcDNA3.0表达载体中,转染7721细胞系进行稳定表达;以此重组质粒免疫小鼠,ELISA方法检测免疫小鼠抗HBs抗体浓度.结果:构建了HBV preS2-S基因的表达质粒pcDNAS2-S,该表达质粒可在7721细胞中稳定高效表达;免疫接种小鼠2周后抗HBs抗体浓度明显升高,接种后第4周布比卡因处理组小鼠抗HBs抗体的浓度达到峰值161.4 mIU/ml,布比卡因非处理组第5周抗HBs抗体的浓度可达133.7 mIU/ml.结论:所构建的pcDNAS2-S表达质粒能有效表达并诱导小鼠体液免疫应答. 相似文献
3.
HBVpreS2-S基因诱发的体液免疫引起乙肝转基因小鼠肝组织损伤 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)preS2-S基因诱发的体液免疫在乙型肝炎发病机制中的作用。方法:用含HBVpreS2-S基因的质粒pcDNA3-S2-S经胫骨前肌肌肉注射免疫正常BALB/c小鼠获得抗血清,将抗血清经尾静脉注射到转基因小鼠BALB/c-TgN(preS2-S/ayw)体内,不同时间点静脉采血检测小鼠血清HBsAg、抗HBs抗体、前S2抗原、前S2抗体、转氨酶、尿素氮和肌酐的变化,并处死动物检查肝、脾、肾、肠、肺和肌肉组织的病理学改变。结果:DNA免疫正常小鼠后8-14周,抗HBs抗体的浓度维持在130-140mIU/ml;免疫后小鼠抗血清转移到转基因小鼠BALB/c-TgN(preS2-S/ayw)后2、4、7和14d,小鼠血清中未检测到HBsAg和前S2抗原,抗HBs抗体持续阳性,前S2抗体14d时转阴;ALT2、4d升高,7d恢复到正常;AST14d内始终高于正常值,4d时达高峰;尿素氮异常,γ-GT与肌酐正常。转基因小鼠肝脏出现急性乙型肝炎的改变,初期(2d、4d)血窦内和汇管区有淋巴细胞浸润,4d肝细胞开始肿胀;中期(7d)全小叶出现肝细胞气球样变,肝小叶内出现肝细胞点灶性坏死伴单个核细胞浸润,汇管区轻度单个核细胞的浸润;后期(14d)时肝细胞肿胀明显减轻,小叶内和汇管区的淋巴细胞浸润加重;脾脏(14d)淋巴细胞增生,肾脏有淋巴细胞的浸润,肺、肠和肌肉组织无明显的病理改变。结论:preS2-S基因免疫后抗血清转移到乙肝转基因小鼠体内,能使转基因鼠出现类似人急性乙型肝炎的表现,表现HBV preS2-S基因的表达产物所诱发的体液免疫在乙型肝炎的发病过程中起一定作用。 相似文献
4.
乙肝病毒adr型基因疫苗诱导小鼠体液免疫应答 总被引:3,自引:3,他引:0
目的:构建乙肝病毒adr型基因疫苗pCMVS2-S,观察其免疫小鼠的特异性体液免疫应答。方法:将构建的乙肝病毒基因疫苗注射于C57BL/6小鼠胫骨前肌肉,运用ELISA检测不同时间小鼠血清中抗HBs抗体。结果:注射基因疫苗1周后,血清中抗HBs抗体转阳,1个月后抗体达到高峰,并以高水平维持至少2个月。结论:基因疫苗pCMVS2-S诱导C57BL/6小鼠产生较好的体液免疫应答。 相似文献
5.
目的 现察舍乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)preS2S基因的核酸疫苗免疫小鼠后的特异性免疫应答.方法 将BALB/c小鼠随机分为4组分别肌肉接种pCMV-S2S、乙肝表面抗原(HBsA8)、空载质粒(pCMV)及生理盐水(NS).免疫组织化学法检测接种局部组织preS2S抗原的表达,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测特异性CTL活性,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体Anti-HBs.结果 pCMV-S2S组小鼠肌肉细胞中有较多量的preS2S蛋白表达,其它小鼠肌肉细胞中均未检出preS2S蛋白表达.pCMV-S2S组小鼠CTL活性为(32.10±1.93)%,明显高于各对照组(P<0.05).pCMV-S2S组小鼠8周后Anti-HBs阳性率最高为42.9%.HBsAg组小鼠4周时Anti-HBs阳性率即达到100%.pCMV组及NS组小鼠血清中均未检测出Anti-HBs.结论 乙肝核酸疫苗pCMV-S2S能在小鼠体内表达preS2S蛋白,并能在小鼠体内诱生较强的特异性CTL活性,也能诱生一定程度的特异性体液免疫应答. 相似文献
6.
C3d增强基因免疫诱导的小鼠抗乙型肝炎病毒特异性免疫应答 总被引:1,自引:1,他引:0
目的探讨C3d对乙型肝炎病毒(HBV)基因免疫诱导的特异性免疫应答的调节作用,为增强HBV基因疫苗免疫效果寻求新途径。方法将HBVpreS2/S编码基因分别插入真核表达载体TR421和含有三拷贝C3d编码基因的TR421C3d3质粒,构建重组质粒TR421preS2/S和TR421preS2/SC3d3。采用肌肉注射法对BALB/c小鼠实施基因免疫,以空质粒TR421为对照,定期采集血清。ELISA法检测免疫小鼠血清特异性抗HBsIgG,3HTdR掺入法检测其特异性淋巴细胞增殖活性。结果TR421preS2/SC3d3重组质粒免疫组诱导的特异性抗HBsIgG水平明显高于TR421preS2/S重组质粒免疫组(P<005),而且TR421preS2/SC3d3重组质粒基因免疫诱导的特异性淋巴细胞增殖活性也显著高于TR421preS2/S重组质粒组(P<005)。结论C3d可增强基因免疫诱导的HBV特异性体液和细胞免疫应答,为提高HBV基因疫苗的免疫效果提供了新的途径。 相似文献
7.
目的:探讨人工合成硫代修饰的含CpG基序的寡脱氧核苷酸(ODN)作为佐剂对HBsAg诱导BALB/c和HBV转基因小鼠产生免疫应答的影响. 方法: 用人工合成CpG ODN与血源HBsAg联合免疫BALB/c和HBV转基因C57BL/6J小鼠,采用ELISA方法观察小鼠血清HBsAg及抗-HBs水平,用ELISPOT方法判断CpG ODN对HBsAg免疫小鼠脾T淋巴细胞分泌细胞因子的影响. 结果: CpG ODN联合HBsAg免疫BALB/c小鼠较HBsAg单独注射组同期抗-HBs滴度明显提高,尤其在首次免疫后6、8、12 wk,2组比较差异显著(P<0.05),联合免疫较CpG ODN单独免疫自首次免疫后4 ~16 wk差异显著(P<0.05).与HBsAg,CpG ODN 单独免疫比较,联合免疫能使HBsAg特异性分泌IFN- γ T细胞分别增加3或9倍;CpG ODN,HBsAg联合免疫可诱导转基因小鼠产生抗-HBs,随时间延长,抗体滴度逐渐升高,并能使更多小鼠产生抗体,而单用HBsAg组、CpG ODN组均不能诱导抗-HBs的产生,免疫后各组血清HBsAg浓度较免疫前明显下降(P <0.05),但组间无明显差别(P>0.05),与HBsAg,CpG ODN 单独免疫比较,联合免疫能使HBsAg特异性分泌IFN- γ T细胞分别增加3或11倍. 结论: CpG ODN作为佐剂可增强HBsAg诱导BALB/c小鼠产生体液及细胞免疫应答,CpG ODN ,HBsAg联合免疫可打破HBV转基因小鼠对HBsAg免疫耐受,可望成为慢性乙型肝炎的有效预防和治疗性疫苗. 相似文献
8.
目的:探讨不同剂量HBsAg疫苗,不同次数免疫对HBV转基因小鼠细胞免疫应答和HBV表达的影响。方法:不同剂量,不同次数HBsAg疫苗免疫小鼠后,用^1H-TdR掺入法,ELISA方法,免疫组化法和PCR法分别测定免疫鼠T淋巴细胞增殖能力,细胞培养上清中IL-2,IFN-γ及血清中HBsAg和HBVDNA含量。结果:较大剂量HBsAg疫苗反复免疫后,IL-2、IFN-γ显著增高(P均〈0.01),T淋巴细胞增殖能力显著增强(P〈0.05),血清HBsAg含量显著降低(P〈0.01)。并能抑制血清HBV DNA表达.结论:较大剂量HBV疫苗反复免疫可增强HBV感染者特异性细胞免疫应答,抑制HBV复制、表达. 相似文献
9.
人白细胞介素-2与乙型肝炎病毒前S抗原融合蛋白基因疫苗诱导抗前S抗体产生 总被引:2,自引:0,他引:2
为了构建抗乙型肝炎病毒(HBV)持续性感染的特异性免疫治疗剂,我们曾构建了人白细胞介素-2(IL-2)与HBV前S(preS)抗原的融合蛋白(IL-2preS)的真核表达克隆,并证明IL-2preS融合蛋白能在哺乳动物细胞中分泌表达。本文以该克隆为基因疫苗,经正常肌肉组织内接种和再生性肌肉组织内接种进行基因免疫,实验结果证明接种IL-2preS基因疫苗能在动物体内诱导抗preS抗体产生,免疫后15天可检出抗体,45天时达高峰值,60天不见下降。再生性肌肉内的免疫效果比正常肌肉的好,所产生的抗体水平前者显著高于后者。结果表明IL-2pres融合蛋白能在机体内分泌表达。提示IL-2preS基因疫苗在人体内可能有多重生物功能,如诱导体液免疫与细胞免疫应答,双重导向作用和细胞膜受体交联效应等。 相似文献
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目的 探讨HBV preS基因免疫和hIL-2与preS融合基因免疫诱导BALB/c小鼠体液免疫反应的规律。方法 将preS基因及hIL2-preS融合基因分别克隆入真核表达载体pCMV4,转染COS-7细胞,明确有目的基因表达后,将重组质粒注射BALB/c小鼠臀部肌肉;ELISA方法检测小鼠血清抗体。结果 pCMV4-preS接种组,3/7小鼠产生抗preS2抗体。pCMV4-hIL2-preS接种组有3/7小鼠产生抗hIL-2抗体,而未检测到抗preS2抗体。结论 pCMV4-preS可有效诱导小鼠产生抗体反应。hIL2-preS融合基因接种BALB/c小鼠时,可诱导产生抗hIL-2抗体。 相似文献
11.
乙肝病毒DNA和前S1抗原及其标记物三者相关性分析 总被引:2,自引:0,他引:2
目的探讨乙肝病毒前S1抗原(PreS1)与乙肝病毒DNA(HBV DNA)、乙肝病毒标志物(HBVM)之间的相关性,为拉米夫定(Lamivudine)治疗提供新的监测指标。方法收集慢性乙型病毒性肝炎患者500例,其中HBV DNA阳性400例(拷贝数>500/ml),按HBV-DNA含量由低到高分8组;其余为HBVDNA阴性对照100例。同步以酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测PreS1;以电化学免疫发光法检测乙肝病毒e抗原(HBeAg)、乙肝病毒e抗体(HBeAb)、乙肝病毒表面抗原(HBsAg);以荧光定量PCR法检测HBV DNA(以HBV DNA拷贝数>500/ml为阳性)。结果(1)在HBVDNA拷贝数500~1×106/ml之间,PreS1的阳性率比HBeAg高(P<0.05);在HBV DNA拷贝数1×106/ml以上,二者阳性率无显著性差异(P>0.05);(2)PreS1的灵敏度为90%(360/400),高于HBeAg的68.5%(274/400)(P<0.05);PreS1的阴性预示值为55.6%(50/90),高于HBeAg的43.2%(96/222)(P<0.05);PreS1的检测有效率为82.0%(410/500),高于HBeAg的64.8%(324/500)(P<0.05)。(3)在HBVDNA拷贝数500~1×104/ml之间,HBsAg的阳性率比PreS1高(P<0.05),在HBVDNA拷贝数1×104/ml以上,HBsAg的阳性率与PreS1的阳性率无显著性差异(P>0.05)。在HBVDNA拷贝数500~1×106/ml之间,HBeAb有较高的阳性率。结论PreS1与HBVDNA具有较好的相关性,其检测灵敏度和阴性预示值、检测有效率都优于HBeAg检测。PreS1可作为拉米夫定等抗病毒药物疗效观察指标之一。HBeAg阴性、HBeAb阳性不是传染性消失的可靠指标。 相似文献
12.
目的:研究乙肝病毒血清学标志物(HBV M)与乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA)之间的关系。方法:对497例患者同时检测HBV M和HBV DNA,HBV M检测用ELISA法,HBV DAN检测用PCR法。结果:HBV M的检测结果分为6组,每组HBV M组合都有一定的HBV DNA检出率。结论:说明HBV M只能作为乙肝病毒有无感染的一般性检测,而HBV DNA能检出复制病毒,但难以表达非复制状态的感染,所以两者关系值得进一步探讨。 相似文献
13.
氧化苦参碱对乙型肝炎病毒转基因小鼠乙肝抗原表达的影响 总被引:66,自引:0,他引:66
目的:研究氧化苦参碱抗乙型肝炎病毒的作用,并初步探讨其作用机制。方法:以乙型肝炎病毒全基因组转基因小鼠ICR-TgN(HBVadr1.2)SMMU 为动物模型,运用ELISA和免疫组化的方法检测小鼠肝脏内乙肝抗原含量。结果:分别予氧化苦参碱100, 200, 300 m g/kg 腹腔注射,1次/d,30 d 后,乙型肝炎病毒转基因小鼠肝脏内HBsAg 和HBcAg 的含量较空白对照组(予等体积生理盐水腹腔注射)均有明显的下降,且对两者作用一致;进一步的研究表明氧化苦参碱200 m g/kg 作用10 d,20 d 时小鼠肝脏内HBsAg 和HBcAg 的含量较治疗前有明显的下降。结论:氧化苦参碱能降低乙型肝炎病毒转基因小鼠肝脏内HBsAg 和HBcAg 的含量,有抗乙型肝炎病毒作用。 相似文献
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乙肝病毒不同血清标志物ALT中与HBVDNA载量临床意义 总被引:1,自引:0,他引:1
目的分析乙肝病毒(HBV)不同血清标志物(HBVM)中丙酸氨基转移酶(ALT)异常率与乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBVDNA)载量的关系,探讨乙肝病毒感染时肝损伤的主要原因及检测HBVM与HBVDNA载量及ALT的临床意义。方法对345份乙肝患者的血清标本分别用ELISA、荧光定量PCR、速率法检测HBVM、HBVDNA载量及ALT。结果①HBeAg(+)与HBeAg(-)两组HBVDNA阳性率、HBVDNA载量〉10^5的百分率比较均有显著差异(P〈0.01)。②ALT异常率在HBeAg(+)组的不同HBVDNA载量级中无差异(P〉0.05),在HBeAg(-)组中随HB—VDNA载量级增大而增大(P〈0.01)。结论在HBeAg(+)时,肝损伤与HBVDNA载量无关;HBeAg(-)时,大多病毒复制减弱,但有少数HBVDNA载量为高拷贝,其肝损伤程度与HBVDNA载量呈正相关。 相似文献
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HBV病毒滴度与血清标志物关系的研究 总被引:6,自引:2,他引:4
目的探讨乙肝患者血清中乙型肝炎病毒的滴度与血清标志物及肝功能的关系。方法1584份患者血清分别用荧光定量聚合酶链反应法(FQ-PCR)、ELISA法测定HBVDNA和血清标志物(HBV-M),肝功能三项(TB、AST、ALT)用全自动生化分析仪测定。结果感染期模式组共有1525例,HBVDNA检出有1215例,阳性率为79.67%,最高拷贝数为9.61×109/ml,最低拷贝数为9.16×103/ml,HBV-M主要模式大三阳、小三阳的HBVDNA阳性率分别为97.49%和51.17%,平均拷贝数分别为2.56×108/ml和1.61×107/ml;恢复期模式组有42例,但仍可检出HBVDNA4例,阳性率为9.52%;HBV-M全阴的有17例,1例为HBVDNA阳性,阳性率为5.88%。相关分析显示血清HBVDNA含量与肝功能状态无明显的相关性(相关系数γDNA-ALT=0.3204,γDNA-AST=0.2751,γDNA-TB=0.2007)。结论FQ-PCR方法检测HBVDNA具有高检出率,能准确反映乙肝病毒感染和复制情况;血清标志物阴性患者仍可有HBVDNA阳性;HBVDNA水平不能反映肝功能状态。HBVDNA与HBV-M、肝功能同时检测,对乙肝的临床诊断、治疗方案的选择以及疗效的判断有一定的指导意义。 相似文献
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WANG Dan Dan YI Lin Zhu WU Li Na YANG Zhi Qing HAO Hai Yun SHI Xiao Hong WANG Bo FENG Shu Ying FENG Yong Liang WANG Su Ping 《Biomedical and environmental sciences : BES》2019,32(5):315-323
Objective To investigate the relationship between maternal peripheral blood mononuclear cells (PBMC) hepatitis B virus(HBV) covalenty closed circular deoxyribonucleic acid(cccDNA) and other HBV serological markers and its effects on HBV intrauterine transmission. Methods We enrolled 290 newborns and their hepatitis B surface antigen(HBsAg) positive mothers. HBV cccDNA in PBMC and HBV DNA in serum were detected by a real‐time PCR‐TaqM an probe while HBV serological markers were detected with an electrochemiluminescence immunoassay. Results There was a positive correlation between the levels of PBMC HBV cccD NA and serum HBV DNA and HBeA g(r = 0.436 and 0.403, P 0.001). The detection rate of pattern A [‘HBsA g(+), HBeA g(+), and anti‐HBc(+)'] was significantly higher in the PBMC HBV cccD NA positive group than in the control group(χ2 = 48.48, P 0.001). There was a significant association between HBV intrauterine transmission and PBMC HBV cccD NA(χ2 = 9.28, P = 0.002). In the presence of serum HBV DNA, HBeA g, and PBMC HBV cccD NA, the risk of HBV intrauterine transmission was three times higher(OR = 3.69, 95% CI: 1.30‐10.42) than that observed in their absence. The risk of HBV intrauterine transmission was the greatest(OR = 5.89, 95% CI: 2.35‐14.72) when both PBMC HBV cccD NA and pattern A were present. A Bayesian network model showed that maternal PBMC HBV cccD NA was directly related to HBV intrauterine transmission. Conclusion PBMC HBV cccDNA may be a direct risk factor for HBV intrauterine transmission. Our study suggests that serological markers could be combined with PBMC‐related markers in prenatal testing. 相似文献
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目的探讨不同乙肝病毒(HBV)载量与其血清标志物模式及ALT的关系。方法采用荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和速率法分别检测患者血清HBV-DNA载量、血清学标志及谷氨酸丙氨酸转移酶(ALT)活性。结果在605例患者样本中共检测出9种血清模式,HBeAg阳性模式,即HBsAg(+),HBeAg(+),抗HBc(+)模式与HBsAg(+),HBeAg(+)模式,其HBV-DNA阳性率分别为96.2%和100.0%,病毒平均含量106.53copies/mL,明显高于HBeAg阴性模式(P〈0.01)。HBV-DNA水平与ALT异常存在相关。结论 HBeAg阳性模式HBV载量显著高于HBeAg阴性模式,HBV载量越高,ALT异常的比例越大。 相似文献
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目的:研究乙肝母婴阻断中婴幼儿隐匿性感染情况和影响因素。方法通过深圳市疫苗监测和接种网络,收集223对乙肝母婴阻断人群的血清样本,进行HBV血清学和分子生物学检测,分析隐匿性感染对传统HBV母婴阻断效果评价标准的影响;并分析母婴阻断中婴幼儿隐匿性感染的因素。结果血清学结果显示223例婴幼儿接受乙肝母婴阻断后,212例HBbAg (+),传统血清学结果计算HBV母婴阻断成功率为95.1%(212/223);分子生物学筛查显示,183例HBV-DNA(-),40例HBV-DNA(+),该方法计算HBV母婴阻断成功率为82.1%(183/223),两者差异有统计学意义(P<0.05)。孕产妇血清HBV-DNA水平与所产婴幼儿隐匿性感染相关性分析显示,孕产妇血清HBV-DNA水平与婴幼儿隐匿性感染呈正相关;31例隐匿性感染的婴幼儿中有12例病毒S区“a”抗原决定簇出现点突变;而6例血清型HBsAg(+)的病例S区“a”抗原决定簇没有发生突变,病毒突变对血清学漏检差异有统计学意义(礸2=7.025,P=0.020)。结论隐匿性感染在HBV母婴阻断婴幼儿群体中存在一定的流行趋势,并对HBV母婴阻断成功构成了威胁;病毒突变和孕产妇血清HBV-DNA水平与婴幼儿隐匿性感染呈正相关。 相似文献
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目的探讨乙型肝炎病毒的滴度与血清标志物及肝功能的关系。方法采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和ELISA法同时检测420份血清的HBV-DNA和血清标志物(HBV-M),并用全自动生化分析仪测定其肝功能ALT,对结果进行分析。结果105例HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+组的血清HBV-DNA平均拷贝数为3.16×1010/m l,检出率为95.23%,显著高于其他组(P<0.01);HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+组ALT异常率为64.76%(68/105),显著高于HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+组ALT异常率36.96%(34/92)(P<0.01)。45例HBsAb+组血清HBV-DNA检出率为0,38例HBV-M全阴性组血清HBV-DNA检出率为7.89%。HBV-DNA阳性组ALT异常率为57.84%(107/185),显著高于HBV-DNA阴性组ALT异常率31.06%(73/235)(P<0.01)。结论定量PCR方法可以作为确认乙肝病毒感染不同状态的一种有效手段,血清标志物HBV-M阴性患者仍可有HBV-DNA阳性,HBV-DNA与HBV-M、肝功能同时检测,对乙肝的临床诊断、治疗方案的选择以及疗效判断有一定的指导意义。 相似文献
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PCR检测HBV DNA对乙肝疫苗应答反应的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
儿童全程接种乙肝疫苗后的应答反应率高(为96%)[1];而成人接种乙肝疫苗后免疫应答比较低(为65.12%)。本文对成人组接种乙肝疫苗无应答反应15例(34.88%),进一步探索了乙肝疫苗接种后不产生抗-HBs的原因,采用聚合酶链反应(PCR)技术检测了15例正常成人经乙肝疫苗接种后无应答反应者和3例乙型肝炎患者的血清,结果发现15例不产生抗-HBs者,经PCR扩增HBVDNA均为阴性;仅3例为阳性。本文作者在PCR检测指导下,对15例成人采用乙型肝炎免疫球蛋白(HBIG)和30微克乙肝疫苗联合应用105天后,有12例产生抗-HBs。提示对于接种乙肝疫苗的正常人群,凡经PCR扩增HBVDNA阴性者,经过重复大剂量注射乙肝疫苗后可使绝大多数得到可靠的保护。 相似文献