鳞癌瘤体内注射脂质体包裹的人α-干扰素基因的抗肿瘤作用

目的：研究瘤体内直接注射脂质体包裹的人ＩＦＮα基因的抗肿瘤效果。方法：在鳞癌荷瘤裸鼠的瘤体内注射体外已制备好的用脂质体包裹的ＩＦＮα ＤＮＡ,观察肿瘤生长状况及小鼠存活情况。结果：瘤体内注射脂质体包裹的人ＩＦＮα基因后,荷瘤裸鼠肿瘤的生长明显受抑,其中部分荷瘤裸鼠的肿瘤消失;荷瘤裸鼠的存活期明显延长,部分荷瘤裸鼠可长期存活。病理结果显示,治疗后的肿瘤细胞形状不一,有多数细胞质崩解,破坏明显。结论：瘤体内注射脂质体包裹的ＩＦＮα基因后,可在瘤体内原位直接转染肿瘤细胞并破坏该肿瘤细胞,从而达到抑制肿瘤生长的效果。     

瘤体内注射肿瘤坏死因子重组腺病毒对大鼠乳腺癌的治疗作用

目的:观察腺病毒重组肿瘤坏死因子(TNF)基因转染对大鼠乳腺癌细胞Walker256体内致瘤性的影响及瘤体内注射TNF重组腺病毒对Walker256荷瘤大鼠的治疗作用.方法:Walker256乳癌细胞感染人TNF重组腺病毒后,观察其体外增殖能力、皮下致瘤性的变化及进行肿瘤局部病理学检查;瘤体局部注射TNF重组腺病毒(Ad.hTNF),观察荷瘤大鼠的肿瘤生长情况及生存期.结果:Walker256感染人TNF重组腺病毒后,培养上清中24 h TNF的分泌量达5.2 ng/106细胞,细胞形态学无明显变化,体外增殖能力和皮下致瘤性显著下降,瘤体周围有大量淋巴细胞及单核细胞浸润;肿瘤局部注射Ad.hTNF能显著抑制Walker256的生长,并延长荷瘤大鼠的生存期.结论:重组腺病毒能有效介导TNF基因转染Walker256细胞,瘤体内局部注射Ad.hTNF对Walker256荷瘤大鼠具有明显的治疗作用.     

反义IGF-1RNA基因治疗脑胶质瘤的实验研究

目的 构建反义胰岛素样生长因子-1（IGF-1）表达质粒（pcEP4-IGF-1A）治疗大鼠C6脑胶质瘤。方法 RT-PCR扩增300bpIGF-1 cDNA，测序，构建反义IGF-1表达质粒，体外转染C6细胞，观察其体外增殖速率及对C6胶质瘤的治疗作用。结果 反义IGF-1序列正确，反义IGF-1A转染的C6细胞生长明显受抑，体内成瘤性消失，荷瘤鼠肿瘤全部消失，6个月观察期内肿瘤无复发。结论 反义IGF-1表达质粒能抑制C6细胞体外生长，体内杀伤肿瘤效果明显。     

血管生成抑制素基因对人原发性肝细胞癌裸鼠移植瘤的治疗作用

目的：研究血管生成抑制素基因对人原发性肝癌裸小鼠皮下移植瘤的治疗作用。方法：建立人原发性肝癌裸小鼠皮下移植瘤模型。将荷瘤裸小鼠随机分为3组；肿瘤对照组，空载体组及angio基因治疗组分别瘤内直接注射裸露DNA质粒，不同时段观察皮下肿瘤生长情况，绘制计算皮下肿瘤生长曲线：病理学检查；原位末端标记（TUNEL）法检查细胞原位凋亡；放射免疫法检测裸小鼠血清甲胎蛋白变化；透射电镜观察细胞超微结构变化。结果：皮下肿瘤生长曲线及病理学检查结果显示，angio基因瘤内注射可部分抑制肿瘤生长。TUNEL法检测显示，angio组凋亡指数明显高于肿瘤对照组。扫描电镜观察细胞超微结构变化。发现angio基因治疗组内有明显的细胞凋亡发生。结论：angio基因直接瘤内注射能抑制人原发性肝癌裸小鼠移植瘤肿瘤生长。其作用机理可能为抑制肝癌的血供从而抑制肿瘤生长。     

瘤内注射β干扰素基因转染的人骨髓间充质干细胞对前列腺癌皮下移植瘤的治疗作用

目的 观察人β干扰素(IFN-β)基因修饰的人骨髓间充质干细胞(hMSCs)治疗人前列腺癌皮下移植瘤的作用.方法 构建人IFN-β基因腺病毒表达载体Ad-IFN-β,体外转染hMSCs,使用4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)标记表达IFN-β的hMSCs(IFN-β -hMSCs).应用人前列腺癌细胞株PC-3异种皮下种植建立前列腺癌动物模型,IFN-β-hMSCs瘤内注射入小鼠模型体内,收集肿瘤和肝、肺、脾、肾等脏器作冰冻切片和石蜡切片,荧光显微镜下观察肿瘤及各脏器中]FN-β -hMSCs的分布情况,记录IFN-β -hMSCs瘤内注射后荷瘤小鼠肿瘤大小及生存期.结果 瘤内注射IFN-β -hMSCs后14 d,前列腺癌组织冰冻切片和石蜡切片中均可见DAPI标记的IFN-β -hMSCs,而肝、肺、脾、肾等脏器的切片中均未见IFN-β -hMSCs的存在.瘤内注射IFN-β -hMSCs可延长荷瘤鼠的生存期,抑制肿瘤的生长,实验组与对照组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 IFN-β -hMSCs在体内能够抑制前列腺癌移植瘤的生长,延长荷瘤鼠的生存期.     

针对HBV X基因区三个关键位点的反义寡核苷酸体内抑瘤研究

目的：研究HBV X基因区关键区段的反义寡核苷酸（asON)对人肝癌裸小鼠模型的抑瘤生长及体内抗HBV作用。方法：PCR法分别合成了互补于HBV X基因的翻译起始区Xp、DR2、ENⅡ区的反义寡核苷酸及无关对照序列，进行硫代化修饰，以HBV DNA转染的H G2.2.15细胞接种裸小鼠，24h内同部位一次性用药100μg，观察并比较3种反义硫代寡核苷酸的体内抑瘤作用。ELISA法检测反义核酸作用裸小鼠血清中HBsAg和HBeAg含量的变化。结果：3种药物作用裸小鼠组均表现为出瘤潜伏期延长，出瘤率明显低于未用药瘤细胞对照组（P＜0．05），且瘤体生长缓慢。互补于Xp、DR2、ENⅡ区的反义寡核苷酸一次性给药方式对荷瘤鼠HBsAg和HBeAg的表达无明显抑制作用；无关序列不影响荷瘤鼠瘤体生长及HBV抗原表达。结论：针对HBV X基因区关键部位的反义寡核苷酸可抑制荷瘤裸小鼠人肝癌的生长，为HBV相关肝细胞癌的基因治疗提供实验依据。     

鼠抗人hMIC-l单克隆抗体抑制裸鼠移植人胰腺癌体内研究

目的初步研究鼠抗人hMIC-l单克隆抗体对胰腺癌体内给药的抗肿瘤活性,为hMIC-l抗体应用于肿瘤治疗提供实验依据。方法 2种人胰腺癌细胞株PANC-1和SW1990各腋窝皮下接种24只Balb/c裸鼠,共计48只皮下接种荷瘤裸鼠分别随机共分为8组,每组6只荷瘤鼠。模型对照组荷瘤裸鼠腹腔注射0.9%氯化钠注射液(10 mL/kg,NS,Biw,ip×8),阳性对照组荷瘤裸鼠腹腔注射键择(50 mg/kg,qw,ip×4),鼠抗人hMIC-l单克隆抗体组分别荷瘤鼠尾静脉内注射鼠抗人hMIC-l单克隆抗体(10 mg/kg,Biw,ip×8)共4周或(2 mg/kg,Biw,ip×8)共4周。观察荷瘤裸鼠日常表现、肿瘤生长、实验后肿瘤组织切片HE染色后光镜下的组织形态学改变。结果荷瘤裸鼠尾静脉内注射鼠抗人hMIC-l单克隆抗体组裸鼠(10 mg/kg,Biw,iv×8)肿瘤生长缓慢,瘤体明显小于模型对照组,并呈现量效关系。镜下观察鼠抗人hMIC-l单克隆抗体组实验后肿瘤组织切片胰腺结构破坏,有大量淋巴细胞浸润,肿瘤细胞明显坏死,细胞溶解。结论尾静脉内注射鼠抗人hMIC-l单克隆抗体(10 mg/kg,Biw,iv×8)能有效抑制裸鼠移植人胰腺癌PANC-1肿瘤生长,使瘤组织坏死、结构破坏。     

hTR-siRNA腺病毒对裸鼠人宫颈癌移植瘤的治疗作用

目的 探讨人端粒酶RNA(hTR)-siRNA腺病毒对裸鼠人宫颈癌移植瘤的治疗作用及其机制.方法 将HeLa细胞注射到裸鼠的右腋皮下建立肿瘤模型,27 d后将荷瘤裸鼠随机分为4组,采用瘤体内多点注射方式,分别向各组荷瘤鼠注射0.1 mL的DMEM、Ad-NT-siRNA(1013 pfu/L)、Ad-hTR-siRNA (1013 pfu/L)或顺铂(1.20 g/L), 以后每隔3 d注射1次, 连续15 d.观察注射腺病毒后移植瘤的体积变化、毒副作用.治疗结束后间隔7 d处死动物,剥离出肿瘤组织称重.切取瘤组织做TUNEL染色测定组织的凋亡指数.结果 将HeLa细胞移植到裸鼠皮下,成瘤率为100%.与Ad-NT-siRNA处理组相比,Ad-hTR-siRNA处理组的裸鼠移植瘤的体积和质量分别降低45.48%和34.68%,TUNEL分析显示凋亡细胞量约11.8%;但是Ad-hTR-siRNA的抗肿瘤作用不及顺铂.结论 hTR-siRNA腺病毒能够明显抑制裸鼠人宫颈癌移植瘤的生长,其抗肿瘤机制与诱导肿瘤细胞凋亡、坏死有关.     

C-myc反义寡核苷酸联合5-FU对胃癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用的研究

目的探讨C-myc反义寡核苷酸（ASODN）联合5-FU对胃癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用。方法将30只裸鼠建立人胃癌MKN-45细胞移植瘤动物模型。成瘤后动物随机平均分为6组，分别由皮下瘤体内注射脂质体（lipofectin，Lip）、正义寡核苷酸（SODN/Lip）、反义寡核苷酸（ASODN/Lip）、5-FU、5-FU＋SODN/Lip和5-FU＋ASODN/Lip，每周1次，共3次。观察肿瘤抑制率、肿瘤体积和动物存活情况。RT-PCR及免疫组化法检测各组肿瘤的c-myc蛋白表达情况。结果ASODN/Lip组和5-FU组肿瘤体积明显减少，肿瘤生长抑制，抑瘤率达41.5%和36.8%，5-FU＋C-mycASOND/Lip组抑制作用更为显著，抑瘤率达46.7%；ASODN/Lip组裸鼠生存期较SODN/Lip组和Lip对照组延长明显（P〈0.05）；RT-PCR及免疫组化显示ASODN和5-FU均使C-myc mRNA和蛋白表达下降。结论C-myc基因反义寡核苷酸联合5-FU可以有效抑制人胃癌裸鼠皮下肿瘤的生长，延长动物生存期，下调C-myc基因表达，为胃癌的治疗提供新的思路。     

RMB5A反义寡脱氧核苷酸对不同转移潜能大肠癌细胞系裸鼠移植癌体内影响研究

目的 观察RMB5A反义寡脱氧核苷酸对人大肠癌高、低转移潜能细胞系的裸鼠移植瘤的抑制作用及抑制肿瘤转移效果.方法 建立人大肠癌高转移和低转移的裸鼠模型,分组给予RAB5A反义寡核苷酸治疗,观察荷瘤鼠的肿瘤体积、肿瘤大小以计算抑瘤率;RT-PCR和免疫组化法检测治疗组RAB5A的表达.结果 在大肠癌裸鼠移植瘤高转移和低转移组中RAB5A反义寡核苷酸均具有抑瘤效果(P＜0.05).反义寡核苷酸组的肿瘤组织中RAB5A基因和蛋白质表达均减少,远隔脏器无转移发生.而正义寡核苷酸组以上指标均与模型组无差别(P＞0.05).结论 体内抑制RAB5A可抑制裸鼠移植癌生长及推迟转移.     

反义端粒酶RNA对肺癌细胞A549抑制作用研究

目的 探讨反义人端粒酶RNA(human telomeric,RNA,hTR)对肺癌细胞A549端粒酶活性和细胞增殖的抑制作用，研究以端粒酶为靶的肺癌基因治疗的可能性。方法 将端粒酶hTR的cDNA反向插入到逆转录病毒载体pLXRN中，转染包装细胞PT67后获得反义hTR重组病毒，感染肺癌细胞A549。处理前后采用TRAP法检测端粒酶活性，光镜观察细胞形态，DNA电泳观察凋亡情况。结果 作用后端粒酶活性和细胞增殖受到明显抑制，并出现明显的细胞凋亡。结论 反义hTR 对肺癌细胞A549端粒酶活性具有明显的抑制作用，使肺癌细胞A549生长抑制，促进细胞凋亡。     

IFN-γ转基因治疗与肿瘤内注射重组IFN-γ对荷瘤小鼠疗效的比较

目的;评价IFN-γ转基因方法与肿瘤内注射重组IFN-γ对荷瘤小鼠的治疗作用。方法:用小鼠结肠癌细胞CT26接种于Balb/c小鼠皮下,建立小鼠皮下种植模型;小鼠成瘤后分成5组(每组9只),分别进行不同的干预。①组1 以阳离子脂质体为载体将真核表达质粒pcDNA3-IFN-γ导入结肠癌肿块细胞;②组2 肿瘤内注射重组IFN-γ,每日1次,连续4周;③组3 肿瘤内注射重组IFN-γ,每周3次,连续4周;④组4 为生理盐水对照组;⑤组5 为空载质粒对照组。结果:与生理盐水对照组比较,转基因治疗组和外源IEN-γ给药组抑瘤效应明显;组1、2、3荷瘤小鼠平均生存期分别为(67.3±4.7)天、(65.8±4.3)天及(57.5±4.4)天,明显长于组4(42.3±2.4)天与组5(41.0±2.1)天。结论:IFN-γ转基因治疗对荷瘤小鼠的肿瘤生长有抑制效应,转基因治疗组与重组IFN-γ每日给药组抑瘤效果相当,而优于重组IFN-γ间断给药组。     

Activation of systemic immune effectors and induction of cytokine production by direct intratumoral injection of IL-2 DNA liposome

ourpreviousstudiesreportedaprotocolwhichreliedonthedirecttransmissionoflL-2geneintoB16F1Otumorsinvivotogeneticallymodifythetumorsastheygrewinsitu.WhenIL-2DNAliposomewasdirectlyinjectedintothetumormassintratumorallyinthemurinemodels,adra-maticinhibitionoftumorgrowthwasobserved-Thesurvivaltimeofthetumor-bearingmicewereprolongedsignificantly.Byanalyzingthefunctionofthetumorcellsand'tumorinfiltratinglympho-cytes(TIL),G418-resistanttumorcellscouldbeseparatedfromthetumormassandhighlevelofIL-2c…     

反义hTR对人胃癌细胞株SGC-7901恶性表型的逆转作用

目的 探讨反义ｈＴＲ基因转染对胃癌细胞系ＳＧＣ－７００１恶性有型的逆转作用及其在肿瘤基因治疗中的价值。方法 构建包含端粒重复序列模板区的反义ｈＴＲ基因真核表达载体用脂质体法将其转染率胃癌细胞系ＳＧＣ－７９０１,比较观察反义ｈＴＲ基因转染后７９０１细胞的ｈＴＲＲＮＡ表达、端粒酶活性、体外生长增殖降低,体外生长增殖能力降低,接触抑制恢复、细胞凋亡率增加、软琼脂集落形成能力和裸鼠体内致瘤能力完全消失。结     

Stable expression of antisense hTR inhibits in vitro pancreatic cancer cell growth

目的：为探讨抑制人端粒酶的模板RNA成分（hTR）能否抑制人胰腺癌细胞的端粒酶活性及细胞生长能力。方法：用分子克隆方法将593bp的hTR全长cDNA反向亚克隆到哺乳细胞表达载体pcDNA3.1（-）的多克隆位点上,以构建hTR反义表达质粒。酶切及序列分析证实此质粒为hTR反义表达质粒。此重组表达质粒与空质粒一起,通过脂质体法转导到人胰腺癌panc1细胞,并用G418筛选抗性克隆,所产生的稳定生长克隆用位于pcDNA3.1多克隆位点两侧的T7及GBH引物进行PCR扩增以证实外源hTR的存在。最后,对这些细胞的生长曲线、内源性hTR的表达、端粒酶活性及锚着非依赖性生长特性进行了分析。结果：转导有反义hTR重组质粒的人胰腺癌细胞与转导空载体及未转导任何质粒的对照细胞相比,Northern Blot及RT-PCR方法证实其内源性hTR的表达明显下调,TRAP方法证实其端粒酶活性明显下降。而且,其细胞增殖速度和软琼脂集落形成能力亦较对照组细胞明显减慢。但没有观察到明显的细胞衰老或凋亡现象。结论：上述结果表明hTR是人端粒酶复合物的关键组成部分,提示抑制端粒酶的hTR组分可能是抗肿瘤治疗的有效靶点。     

人端粒酶RNA反义寡核苷酸对顺铂诱导K562细胞凋亡的影响

目的研究人端粒酶RNA(hTR)反义寡核苷酸(ASODN)可否增强K562细胞对顺铂的敏感性。方法采用与hTR模板区互补的硫代ASODN处理K562细胞,用端粒酶重复扩增分析-PCR-ELISA检测法观察端粒酶活性的变化;琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡的DNA断裂;Annexin V PI双染后流式细胞仪检测凋亡细胞百分率。结果经ASODN作用后,K562细胞端粒酶活性明显下降。ASODN作用K562细胞24 h,再加入顺铂作用72 h,琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯形条带,而正义寡核苷酸(SODN)与顺铂联合作用组及单用顺铂组均未见到明显的DNA梯形条带。ASODN作用K562细胞24 h,再加入5 μmol/L 顺铂作用48、72 h的凋亡细胞百分率(18.3%和31.6%)分别与SODN联合顺铂作用组(9.6%和10.5%)、单用顺铂组(7.1%和9.4%)比较,差异有显著性(P<0.01)。结论以hTR模板区为靶点,ASODN能抑制端粒酶活性并促进顺铂诱导K562细胞的凋亡。     

腺病毒载体介导凋亡素基因联合阿霉素与顺铂对种植性肝癌的治疗研究

目的探讨腺病毒介导凋亡素基因联合阿霉素(ADM)与顺铂(CDDP)对种植性肝癌的治疗。方法建立c57BL/6小鼠皮下荷肝细胞癌模型(n=64),计算成瘤率,观察肿瘤内注射含凋亡素基因的重组腺病毒、ADM及CDDP后种植瘤的体积变化、毒副作用和组织学变化,同时计算抑瘤率。结果在治疗7d后腺病毒AdAFPvp3联合ADM与CDDP治疗组的种植瘤体积、重量均显著低于对照组,比较差异均具有统计学意义,在治疗期间没有观察到毒副作用。结论携带凋亡素基因的重组腺病毒联合ADM与CDDP对肝细胞癌具有治疗作用。     

携带人内皮抑素基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒对卵巢癌的体内治疗作用

目的:探讨携带人内皮抑素基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒CX-hE对卵巢癌裸鼠瘤株OV-90的抑制作用.方法:BALB/c裸鼠右背部皮下接种OV-90细胞成瘤.(1)18只荷瘤裸鼠随机分为PBS对照组、CX-hE治疗组和Ad-hE治疗组,皮下种植瘤内直接注射.各药物隔日注射1次,共注射5次.取肝脏组织行常规病理检查.(2)另15只荷瘤裸鼠随机分3组,分别瘤内单次注射CX-hE、Ad-hE和ONYX-015病毒纯化液.注射后第1、3、7天球后静脉取血ELISA检测人内皮抑素浓度,肿瘤组织行Hexon单克隆抗体免疫组化染色及微血管免疫组化染色.结果:(1)CX-hE组肿瘤生长速度较缓慢,开始治疗后2周肿瘤体积已明显小于Ad-hE组(P＜0.05)和PBS组(P＜0.01).常规H-E染色显示CX-hE组肿瘤组织内见散在坏死灶;肝脏无明显病理变化.(2)瘤内单次注射各药物后,裸鼠血清中均可检测到内皮抑素蛋白表达,随时间延长表达量逐渐升高.CX-hE组人内皮抑素浓度始终高于Ad-hE组(P＜0.01),增长速度较快.CX-hE单次瘤内注射2周,肿瘤Hexon免疫组化染色可见大量密集分布的阳性肿瘤细胞.CX-hE组肿瘤微血管免疫组化可见残余的癌巢内尚有散在分布的阳性血管内皮细胞.结论:瘤内直接注射的治疗方法可使瘤生长速度减慢,CX-hE治疗效果优于Ad-hE,未观察到各治疗组肿瘤生长停止或完全消退的理想治疗效果.