应用逆转录聚合酶链反应检测原发性肝癌患者外周血肿瘤细胞

目的寻求检测循环血中肝癌细胞的灵敏方法。方法采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，对肝癌患者外周血有核细胞人甲胎蛋白ｍＲＮＡ（ＡＦＰｍＲＮＡ）进行检测。结果３１例原发性肝癌中有１５例检出ＡＦＰｍＲＮＡ，阳性率为４８．４％。良性肝病、肝转移癌患者和健康对照组均为阴性。外周血细胞ＡＦＰｍＲＮＡ的存在与肝内转移、门静脉癌栓和远处转移密切相关。结论外周血细胞ＡＦＰｍＲＮＡ是反映原发性肝癌患者有无血行播散的重要标志，ＲＴ－ＰＣＲ技术是检测循环血中原发性肝细胞癌的灵敏方法     

胃癌组织H-ras基因点突变与预后的关系

目的:胃癌发生发展的分子基础仍不甚明了,为了明确H—ras点突变在胃癌发生发展中的作用,本研究对胃癌组织H—ras点突变进行检测。方法:采用多聚酶链延伸反应—限制性片段长度多态性分析法(PCR—RFLP)对88例福尔马林液固定、石蜡包埋胃癌组织H—ras第12位和61位密码子点突变作了检测,并对点突变与肿瘤生物学行为及预后的关系进行分析。结果:H—ras总突变率为14.8％(13/88),点突变的发生与肿瘤将膜浸润,淋巴结转移、临床分期及术后生存期密切相关。结论:检测胃癌组织H—ras基因点突变有助于判断胃癌患者的预后。     

2.53 NO/cGMP信号转导系统在大鼠胃电节律失常模型中的作用

目的研究NO/cGMP信号转导系统在致大鼠胃电节律失常的作用.方法建立大鼠胃电节律失常模型,计算机采集并分析正常和模型大鼠胃电信号;肌间神经丛铺片,还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)组化法显示正常及模型组肌间神经丛氮能神经,并经图象分析定量;放免法测定正常及模型组胃平滑肌组织 cGMP含量.结果模型组肌间神经丛氮能神经分布面密度(15.02±4.46%)、cGMP含(17 .58±4.58FM/mg)及胃慢波异常节律指数(ARI,20.2468.73%)、频率变异系数(CV,34. 7266.30%)明显高于正常组(分别为9.08±2.52%,11.78±2.07FM/mg,5.10±1.77%, 20.99±4.17%,P＜0.01),且氮能神经及cGMP含量与ARI和CV呈显著正相关(r=0.86 ,P＜0.01).结论模型组大鼠胃电节律失常与NO,cGMP升高有关,NO通过NO/cGMP信号转导系统调控胃电节律.     

胃粘膜肠化生组织中p53、APC、K-ras基因突变的研究

目的：探讨ｐ５３,ＡＰＣ及Ｋ－ｒａｓ基因突变在不同类型肠化生癌变中的作用。方法;用ＰＣＲ－ＳＳＣ冢ＰＣＲ－ＲＦＬＰ技术检测了４７例肠化生组织中ｐ５３基因５－８外显子及ＡＰＣ基因１５－６外显子,Ｋ－ｒａｓ基因第１２位点估变。结果：４７例肠化生组织中ｐ５３突变１４例,占２９．８％,ＡＰＣ及Ｋ－ｒａｓ基因突变各３例,分别占６．８％。肠化生中Ⅰ,Ⅱ型肠化３３例,Ⅲ型肠化１４例,Ⅲ型肠化中ｐ５３突变率为５７     

食管癌APC/MCC、DCC基因杂合丢失的研究

目的研究ＡＰＣ（ａｄｅｎｏｍａｔｏｕｓｐｏｌｙｐｏｓｉｓｃｏｌｉ）、ＭＣＣ（ｍｕｔａｔｉｏｎｉｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒ）和ＤＣＣ（ｄｅｌｅｔｅｄｉｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｒ）基因在人食管癌组织中的变化。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）及限制性片段长度多态现象（ＲＦＬＰ）法检测了４６例食管癌组织中ＡＰＣ、ＭＣＣ和ＤＣＣ基因的杂合缺失。结果ＡＰＣ、ＭＣＣ和ＤＣＣ位点的杂合性丢失的发生频率分别为２９．０％（９／３１）、３３．３％（８／２４）和３２．４％（１２／３７）。然而,这些基因位点的杂合性丢失与肿瘤病理学类型、肿瘤的大小、浸润性及转移性无统计学的显著相关性（Ｐ＞０．０５）。结论ＡＰＣ、ＭＣＣ和ＤＣＣ基因位点的杂合性丢失在一定程度上是食管癌基因改变的普遍现象,并可能在肿瘤的发生中起作用。     

反义hTR基因瘤内注射对荷瘤鼠肿瘤治疗作用的初步观察

目的 观察反义人端粒酶RNA（hTR)基因瘤内注射对荷瘤鼠肿瘤的治疗作用。方法 人胃癌细胞株SGC－7901裸鼠背部皮下接种,成瘤后于瘤内多点注射FuGENETM6/反义hTR表达质粒复合物,设FuGENETM6稀释液为对照,观察肿瘤生长情况和肿瘤组织学结构变化。 结果 治疗组肿瘤生长速度明显减慢,治疗1个月瘤体较对照组小23％,瘤组织中的瘤细胞排列较稀疏并形成较多的腺样结构,显示有分化倾向。结论 反义hTR基因瘤内注射对荷瘤鼠肿瘤有一定的治疗作用,值得进一步研究。     

32P标记寡聚核苷酸探针检测胃癌组织中MUC5AC mRNA表达

揭示正常胃粘膜、癌前病变和胃癌组织中ＭＵＣ５ＡＣ基因转录水平的表达及其临床病理意义。方法：应用＾３２Ｐ标记寡聚核苷酸探针和原位杂交方法检测组织切片中的ＭＵＣ５ＡＣｍＲＮＡ的表达。结果人正常胃粘膜中的浅表１／３范围内广泛分布ＭＵＣ５ＡＣ基因的ｍＲＮＡ,肠上皮化生和胃癌组织中的表达阳性率分别是１５．４％和２５％。胃癌组织中ＭＵＣ５ＡＣｍＲＮＡ的表达与胃癌患者的性别、肿瘤的部分和大小、淋巴结转移、肿瘤的     

胃癌组织中幽门螺杆菌感染与某些抑癌基因杂合缺失相关性研究

流行病学研究提示,胃粘膜幽门螺杆菌(Hp)感染与胃癌的发生有关。动物实验与体外实验发现Hp慢性感染易引起胃粘膜细胞恶性转化[1],分子生物学方面的研究亦证实Hp感染与某些癌相关基因的改变存在相关关系[2]。为从分子水平揭示Hp感染在胃癌发生中的作用,本文采用PCR技术对胃癌组织Hp进行检测,并对Hp感染与APC、MCC、DCC基因和YNZ22位点杂合缺失(LOH)之间的关系进行分析。 材料与方法 1．标本收集和DNA提取：51例胃癌组织均为我院1995年1月至1997年1月手术切除标本。手术切下肿瘤后立即收集癌组织和手术切缘处的正常粘膜组织,剔除出血、坏死部分后,-80℃冻存。采用酚／氯仿方法提取DNA,冰冻切片染色证实所检测癌组织肿瘤细胞数均在50％以上。 2．引物：参照文献合成ras、APC、MCC、DCC、YNZ22位点、幽门螺杆菌尿素酶A(HPA)和B(HPA)基因的引物[3-6]。引物序列见表1。     

HCV核心基因cDNA真核表达载体的构建及其表达

丙型肝炎病毒(HCV)感染具有明显的慢性化倾向,与肝细胞癌(HCC)发生关系密切,是肝癌的病因之一[1-21].近年来HCV核心蛋白的作用受到重视,被认为具有基因调节功能[22-24].我们采用基因重组技术构建HCV核心基因cDNA真核表达质粒,导入HepG2细胞株,以期获得永久性表达HCV核心蛋白的细胞,为进一步探讨HCV核心蛋白的致癌机制提供实验模型.