不同产地柴胡的皂苷含量和ITS序列比较

目的 比较不同产地柴胡药材的皂苷含量和内转录间隔区（ITS）序列,从有效成分含量和遗传基础2个层面为柴胡药材生产和利用提供借鉴。方法 产地收集柴胡药材,采用高效液相色谱法（HPLC）测定样品中柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d含量;提取DNA,采用聚合酶链式反应（PCR）扩增ITS序列并比较分析序列差异。结果 各产地柴胡有效成分含量差异较大,柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d总质量分数最高可达4.165%,最低为0.118%。不同产地柴胡种质依据ITS序列可分为三大类,其中第Ⅱ类产于甘肃省,第Ⅲ类产于四川省、山西省和甘肃省。第Ⅲ类含有的柴胡样品较多,又可分a和b类,b类又可分为i、ii、iii类,含量较高的样品主要存在于iii小类,主要来源于甘肃、山西。结论 尽管柴胡自然分布广、生产适应性强,但从成分含量和遗传差异角度分析,有必要对柴胡的种植品种和产地进行规范。     

基于聚类分析和典型相关分析的北柴胡保肝作用谱效关系研究

目的 探讨北柴胡正丁醇萃取部位的保肝作用及与其HPLC指纹图谱间的谱效关系,以阐明其药效物质基础。方法 采用HPLC-ELSD法获取北柴胡正丁醇萃取部位的指纹图谱;检测CCl₄所致急性肝损伤小鼠血清中丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）水平、肝组织中丙二醛（MDA）的量和超氧化物歧化酶（SOD）的活性;利用聚类分析与典型相关分析法对色谱-药效数据进行相关分析。结果 从HPLC指纹图谱中共提取出12个能够标示药材特征的皂苷类成分的共有峰。不同产地北柴胡药材的保肝作用存在显著差异（P＜0.05）。聚类分析和典型相关分析明确了给予北柴胡正丁醇萃取部位的小鼠血清中ALT水平和肝组织中SOD活性与皂苷类化合物柴胡皂苷a和柴胡皂苷d之间存在线性关系。结论 北柴胡保肝作用的部分药效物质基础为柴胡皂苷a和柴胡皂苷d。     

北柴胡地上茎不同分枝对根中皂苷类成分量及根产量的影响

目的 研究北柴胡Bupleurum chinense地上茎不同分枝对根中皂苷类成分量及根产量的影响。方法 采用HPLC和紫外分光光度法测定北柴胡地上茎不同分枝植株根中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d及柴胡总皂苷的量,并统计分析其生长特征参数。结果 地上茎不分枝与2个分枝的北柴胡根中皂苷类成分量及根产量均最高;随着地上茎分枝数的增多,根中皂苷类成分量及根的产量均呈下降趋势。结论 地上茎不同分枝会对北柴胡根中皂苷类成分量及根产量产生影响。     

竹叶柴胡根中皂苷类成分的薄层鉴别及含量测定

目的：研究竹叶柴胡根中的皂苷类成分,为其入药提供科学依据。方法：采用薄层色谱法对皂苷类成分进行定性鉴别,并采用高效液相色谱法首次对竹叶柴胡根中皂苷类成分进行含量测定,用C₁₈（4.60 mm×150 mm,5 μm）柱,以乙腈-水为流动相梯度洗脱,检测波长210 nm,流速0.8 mL·min^-1,柱温35 ℃,进样量10 μL。结果：竹叶柴胡根中含有皂苷类成分。柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的线性范围分别为440~8 800 ng（r=0.999 7）,488~9 760 ng（r=0.999 2）线性关系良好,平均加样回收率（n=6）分别为99.88%（RSD 0.41%）,100.23%（RSD 0.46%）。样品中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的总量在0.48%~1.08%。结论：竹叶柴胡全草入药具有其科学性。     

不同产地北柴胡中柴胡皂苷含量与土壤因子的关系

目的土壤是影响中药材活性成分形成和积累的重要生态因子,以11个省市自治区29个样地野生和栽培北柴胡Bupleurum chinense为研究材料,采用数学统计分析方法探讨柴胡皂苷积累与土壤因子的关系,为实施土壤生态调控提高北柴胡品质提供依据。方法采用高效液相色谱法(HPLC)分析不同产地北柴胡柴胡皂苷a、c、d、e、f的含量;采用常规方法测定土壤样品的pH、有机质、电导率、全氮、碱解氮、速效磷、速效钾、有效镁、有效铁、有效铜、有效锰;通过聚类分析研究不同产地北柴胡皂苷差异;通过主成分分析解释不同产地土壤因子差异;通过Pearson相关性分析研究土壤因子与北柴胡柴胡皂苷含量的关系。结果北柴胡的柴胡皂苷测定结果显示河南禹州的柴胡皂苷含量最高,其中柴胡皂苷a和d的含量分别为0.71%、0.80%。对不同产地进行聚类分析,根据柴胡皂苷差异29个样地分为3类。对柴胡皂苷含量与土壤因子进行Pearson相关性分析表明,土壤的有机质、有效铁与各柴胡皂苷之间呈极显著正相关(P0.01),有效铜、有效镁与各柴胡皂苷之间呈显著负相关(P0.05)。不同产地土壤主成分分析表明,得分较高的是样地9、10、11、14、19、28,这与不同产地北柴胡柴胡皂苷含量聚类分析的结果基本一致;通过对不同产地北柴胡主要土壤指标分析发现,在一定范围内土壤中有效铁含量与柴胡皂苷含量显著正相关,这与Pearson相关性分析结果基本一致。结论研究结果提示在北柴胡生产实践中可以通过提高土壤有机质含量,增施铁肥等农艺措施调控北柴胡柴胡皂苷含量。     

HPLC测定4种川产柴胡地上与地下部分柴胡皂苷a, c, d的含量

目的： 测定川产柴胡不同品种、不同药用部位中柴胡皂苷a,c,d的含量。 方法： 采用Agilent TC-C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相乙腈-水,梯度洗脱,流速1 mL·min^-1,检测波长210 nm,柱温30 ℃。 结果： 柴胡皂苷a,c,d分别在0.753~22.590,0.461~13.830,0.726~21.780 μg与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为100.83%,99.96%,101.12%。 结论： 不同品种、不同药用部位柴胡皂苷含量差异较大,建议川产柴胡地上部分与地下部分分别入药。     

柱前衍生化法评价不同品种和产地柴胡药材和饮片的质量

目的:通过对大量柴胡药材和柴胡饮片样品中柴胡总皂苷和柴胡皂苷a,d的含量进行测定评价不同产地、不同品种柴胡样品的质量优劣。方法:分光光度法测定柴胡总皂苷的含量;柱前衍生化HPLC-UV测定柴胡皂苷a,d的含量。结果:红柴胡、黑柴胡的皂苷类成分较北柴胡低,竹叶柴胡几乎检不出柴胡皂苷;北柴胡的柴胡皂苷a的质量分数主要在0.100%~0.330%,柴胡皂苷d 0.200%~0.400%,柴胡总皂苷1.00%~2.00%;粗根无分支柴胡皂苷成分明显低于细根或粗根多分支柴胡药材。结论:建议北柴胡的柴胡皂苷a的含量不得低于0.100%,柴胡皂苷d不得低于0.200%,柴胡总皂苷不得低于1.00%;北柴胡的适宜产区为山西中部的太谷,山西南部的芮城,平陆,万荣,山西东南部的长治,甘肃的陇西,礼县等地;选育北柴胡品种时优先选取根粗且多分支的品种。     

炮制对柴胡药材中 4 种柴胡皂苷的影响

 目的 建立生柴胡、醋柴胡和酒柴胡中柴胡皂苷 a 、 b₂ 、 b₁ 、 d 的 HPLC 含量测定方法，并比较炮制前后 4 种柴胡皂苷的含量的变化。 方法 采用 Hypersil C₁₈ 色谱柱（ 4.6 mm×250 mm ， 5 μm ）；流动相：乙腈 - 水，梯度洗脱（ 0 ～ 50 min ： 30∶70 → 50∶50 ）；流速： 1.0 mL·min^-1 ；柱温： 30 ℃ ；检测波长： 210 和 254 nm 。 结果 柴胡经不同的方法炮制后， 4 种柴胡皂苷的含量有不同程度的变化。 结论 本方法简便、可靠、重现性好，可用于柴胡及其炮制品中柴胡皂苷 a 、 b₂ 、 b₁ 、 d 的含量测定，并为全面控制其质量提供参考，为深入探讨柴胡炮制的意义，提供一定的实验依据。     

黑柴胡质量标准

目的：修订和提高黑柴胡药材的质量标准。方法：采用生药学研究考察不同黑柴胡药材的横切面显微特征和粉末特征,依据2010年版《中国药典》附录药品标准研究方法对10批黑柴胡药材的水分、总灰分、酸不溶性灰分和浸出物进行检查,并测定活性成分含量。结果：修订了黑柴胡药材的性状特征和显微特征;建立了TLC鉴别黑柴胡的方法;黑柴胡的水分限度≤10.0%,总灰分≤9.0%,酸不溶性灰分≤3.1%,浸出物的含量≥15%,柴胡皂苷a和d的总质量分数≥0.2%。结论：完善了黑柴胡药材的质量标准,可作为该药材的修订内容。     

多指标正交试验优选鳖血柴胡的炮制工艺

目的: 优选鳖血柴胡的炮制工艺。 方法: 以柴胡皂苷a,c,d及醇溶性浸出物含量的综合评分为指标,通过正交试验考察炮制时间、鳖血用量、炮制温度对鳖血柴胡炮制工艺的影响。采用HPLC测定柴胡皂苷a,c,d的含量,流动相乙腈(A)-水(B)梯度洗脱(0~50 min,25%~90%A;50~55 min,90%A),检测波长210 nm。 结果: 炒制时间对炮制工艺具有显著性影响。最佳炮制工艺为150 ℃炮制10 min,加鳖血量0.05 mL ·g^-1。醇溶性浸出物及柴胡皂苷a,c,d质量分数分别为12.42%,0.85%,0.23%,0.90%。 结论: 优选的炮制工艺合理可靠、重复性好,为规范鳖血柴胡饮片的炮制加工提供参考。     

北柴胡不同炮制品柴胡皂苷a含量及急性毒性实验比较研究

目的 :对北柴胡不同炮制品中柴胡皂苷a的含量和急性毒性大小进行比较研究,探讨炮制对北柴胡柴胡皂苷a含量与毒性的影响。 方法 :运用HPLC法、经典急性毒性实验法,进行北柴胡不同炮制品中柴胡皂苷a的含量测定及急性毒性比较研究。 结果 :北柴胡生品,清炒品,醋炙品,酒炙品和蜜炙品不同炮制品中柴胡皂苷a的百分含量依次为0.60%,0.23%,0.56%,0.39%,0.35%。北柴胡生品,清炒品,醋炙品,酒炙品和蜜炙品没有出现死亡,测得最大给药量(MLD)值按含生药量计算分别为26.4,31.2,27.6,28.8,32.4 g ·kg^-1,分别相当于临床70 kg人每公斤体重日用量的205,242,214,224,252倍,连续观察14 d,小鼠一般状况良好,无一死亡。 结论 :北柴胡不同炮制品中柴胡皂苷a含量和毒性各不相同,且各样品均未出现死亡,其最大给药量显示北柴胡的各炮制品基本安全低毒,提示炮制对北柴胡药材柴胡皂苷a含量和安全剂量范围大小有一定影响。     

不同炮制方法对北柴胡中柴胡皂苷含量的影响

目的测定北柴胡不同炮制品(蜜炙北柴胡和麸炒北柴胡)中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量。方法采用高效液相色谱法;Ultimate XB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,0.45μm);流动相:乙腈-水;流速:1.0ml/min;检测波长:210nm;柱温:30℃;采用梯度洗脱法测定北柴胡不同炮制品中柴胡皂苷a和皂苷d的含量。结果生柴胡和麸炒北柴胡中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量均高于蜜制北柴胡中的柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量。结论不同炮制方法对北柴胡中柴胡皂苷a、d含量影响不同。     

藏柴胡与北柴胡急性毒性、解热、抗炎作用的对比研究＊

目的 比较不同产地（甘肃、万荣）的藏柴胡与北柴胡（万荣）栽培品的急性毒性、解热、抗炎作用的差异。方法 采用经典急性毒性实验法进行藏柴胡与北柴胡不同提取物的急性毒性比较研究；采用2,4—二硝基苯酚致热大鼠模型比较藏柴胡与北柴胡水煎液的解热作用；采用二甲苯制备耳廓肿胀模型，比较藏柴胡与北柴胡水煎液的抗炎作用。结果 甘肃产地藏柴胡与北柴胡比较毒性、解热、抗炎作用较强；万荣产地藏柴胡与北柴胡比较毒性、解热、抗炎作用差异不大。结论 万荣产地藏柴胡作为柴胡使用的可能性较大，甘肃产地藏柴胡能否作为柴胡使用仍有待研究。     

五个产地北柴胡中皂苷含量的比较

目的:建立柴胡药材中柴胡皂苷的含量测定方法,并比较不同产地北柴胡总皂苷及皂苷a,d的含量。方法:紫外分光光度法测定柴胡总皂苷的含量,检测波长546 nm。高效液相色谱法测定柴胡皂苷a,d的含量,色谱柱为Agilent Eclipse XDB C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-水(B)梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,柱温为35℃,检测波长210 nm。结果:柴胡总皂苷在0.0462⁰.462 mg·mL-1范围内线性关系良好,平均回收率为97.12%,RSD为2.29%;柴胡皂苷a,d分别在0.06900.462 mg·mL-1范围内线性关系良好,平均回收率为97.12%,RSD为2.29%;柴胡皂苷a,d分别在0.0690⁰.690、0.07360.690、0.0736⁰.736 mg·mL-1范围内呈良好的线性关系,平均回收率分别为97.85%、101.07%,RSD分别为1.68%、1.88%。不同产地北柴胡药材中柴胡皂苷含量差异较大,其中陕西,河北的北柴胡药材中柴胡皂苷含量相对高于其它产地。结论:本方法简单准确,重复性好,适用于柴胡总皂苷及皂苷a,d的含量测定,柴胡皂苷在各产地北柴胡间差异较大。     

河北省涉县不同采样点柴胡药材中柴胡皂苷的含量比较

目的考察河北省涉县境内不同采样点的柴胡药材中柴胡皂苷a,d的含量,为柴胡的质量标准提供一定依据。方法采用《中国药典》中柴胡项下柴胡皂苷的含量测定方法,用HPLC法测定不同产地柴胡中柴胡皂苷a,d的含量。结果柴胡皂苷a含量在1.8847~4.6681 mg·g~(-1)范围内,柴胡皂苷d含量在1.8600~6.4988 mg·g-1范围内,二者之和含量在3.8323~10.7973 mg·g~(-1)范围内。结论不同产地的柴胡药材中柴胡皂苷a,d的含量差异较大,二者之和含量均高于《中国药典》规定含量,与河北省涉县是柴胡主产区的历史地位相一致。     

柴胡不同醋制品皂苷类成分比较研究

目的：研究柴胡不同醋制品皂苷类成分的含量变化。方法：采用RP-HPLC法测定柴胡不同醋制品中柴胡皂苷a和d的含量。结果：柴胡醋制后柴胡皂苷a的含量在0.1428%～0.2550%之间,柴胡皂苷d的含量在0.9509%～1.4301%之间。结论：柴胡醋制可使柴胡皂苷a和d的含量明显降低。     

藏柴胡以及种植北柴胡和竹叶柴胡的皂苷含量研究

目的及方法:分别采用紫外分光光度法和HPLC法测定了藏柴胡(来源于窄竹叶柴胡Bupleurum marginatum var.stenophyllum)及种植北柴胡(B.chinese)和竹叶柴胡(B.marginatum)中柴胡总皂苷、柴胡皂苷a和柴胡皂苷d的含量。结果:总皂苷含量藏柴胡为2.93%~5.86%,北柴胡为1.56%~2.25%,竹叶柴胡为1.83%~2.50%;柴胡皂苷a+d含量藏柴胡为2.03%~3.95%,北柴胡为0.46%~1.28%,竹叶柴胡为0.88%~1.90%。结论:藏柴胡种植量正以甘肃为中心不断扩大,其中柴胡皂苷含量显著高于其他柴胡,将产生不同的临床效果,应引起充分重视。     

SPME-GC-MS法研究竹叶柴胡和北柴胡挥发性成分差异

目的： 对竹叶柴胡和北柴胡进行挥发性成分的比较和分析,指出竹叶柴胡和北柴胡的差异性和共同性。 方法： 利用固相微萃取技术（SPME）提取,采用气质联用（GC-MS）进行分离和鉴定。 结果： 共鉴定出竹叶柴胡48个成分,北柴胡21个成分,其中有10个化合物为共有峰,相对质量分数最高的均为n-十六烷酸。 结论： SPME-GC-MS能全面快速分析柴胡挥发油成分,并作为柴胡药材质量评估和基源鉴定的科学手段。     

柴胡提取物中柴胡皂苷d及总皂苷的含量测定

目的：建立柴胡提取物中柴胡皂苷d及总皂苷含量的测定方法。方法：采用HPLC法测定柴胡皂苷d的含量,色谱条件：YMC-Pack ODS-A（5μm,250mm×4.6mm）HPLC色谱柱,以乙腈-水（45：55）为流动相,检测波长203nm;采用紫外可见分光光度法,以柴胡皂苷d为对照品,在波长536nm处对样品中的总皂苷进行含量测定。结果：液相法测定柴胡皂苷d在进样量0.32~1.60μg（r=0.9993）范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率为100.16%,RSD为2.57%;紫外法测定柴胡皂苷d在浓度205~2050mg/L（r=0.9997）范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率为98.99%,RSD为1.78%;结论：柴胡提取物中柴胡皂苷d的含量均大于10%,总皂苷的含量均大于60%。     

基于UPLC-Q-TOF-MS和网络药理学的柴胡醋制前后抗抑郁质量标志物分析

目的 基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱法（UPLC-Q-TOF-MS）、多元统计分析和网络药理学方法确定生柴胡、醋柴胡抗抑郁作用的质量标志物（Q-Marker）及其作用机制。方法 通过UPLC-Q-TOF-MS获得生柴胡、醋柴胡饮片的化学物质基础，采用主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法-判别分析（OPLS-DA）筛选柴胡醋制前后发生显著变化的成分作为候选Q-Marker，运用网络药理学方法构建柴胡抗抑郁的“疾病-药物-成分-靶点”网络，确定生柴胡、醋柴胡抗抑郁Q-Marker。将大鼠随机分为空白组、模型组、氟西汀组（2.67 mg·kg^-1）和柴胡总皂苷组（0.72 mg·kg^-1），除空白组外，其余各组大鼠均采用慢性温和不可预知性应激法（CUMS）造模，造模开始3周后灌胃给药，各给药组给予相应剂量药物，1次/d，连续4周，空白组及模型组给予10 mL·kg^-1生理盐水，于造模前1天、造模21 d和给药28 d对各组大鼠进行体质量称量、糖水偏好实验和旷场实验；于给药28 d后，采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测各组大鼠海马组织磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）、叉头框转录因子O3a（FoxO3a）、β-连环蛋白（β-catenin）mRNA表达水平，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠海马组织PI3K、Akt、mTOR、FoxO3a蛋白表达水平。结果 共19种成分在柴胡醋制前后发生明显变化，通过S-plot差异标志物筛选确定柴胡皂苷A、柴胡皂苷B₁、柴胡皂苷B₂、柴胡皂苷C、柴胡皂苷D等9种成分为柴胡饮片的潜在Q-Marker，结合“疾病-药物-成分-靶点”网络，确定柴胡皂苷A、柴胡皂苷B₁、柴胡皂苷B₂、柴胡皂苷D作为生柴胡、醋柴胡抗抑郁的Q-Marker。药效结果显示，给药28 d后，与空白组比较，模型组、氟西汀组和柴胡总皂苷组大鼠的体质量、糖水偏好指数及旷场实验总分均显著降低（P<0.01）；与模型组比较，柴胡总皂苷组大鼠的体质量、糖水偏好指数及旷场实验总分均显著增加（P<0.01）。与空白组比较，模型组大鼠海马组织PI3K、Akt、mTOR、β-catenin mRNA表达水平明显减少，差异具有统计学意义（P<0.05），GSK-3β、FoxO3a mRNA表达水平明显增加，差异具有统计学意义（P<0.05）；与模型组比较，柴胡总皂苷组大鼠海马PI3K、Akt、mTOR、β-catenin mRNA表达水平明显增加，差异具有统计学意义（P<0.05），GSK-3β、FoxO3a mRNA表达水平明显减少，差异具有统计学意义（P<0.05）。与空白组比较，模型组大鼠海马组织Akt、mTOR蛋白表达水平显著减少（P<0.01），PI3K和FoxO3a的蛋白表达水平显著增加（P<0.01）；与模型组比较，柴胡总皂苷组大鼠海马组织Akt蛋白表达水平显著增加，差异具有统计学意义（P<0.01），mTOR表达水平增加，但差异无统计学意义，PI3K和FoxO3a的蛋白表达水平显著减少，差异具有统计学意义（P<0.01）。结论 柴胡醋制前后的化学成分发生较大变化，经物质基础、药效学、网络药理学及信号通路研究确定生柴胡、醋柴胡抗抑郁Q-Marker，为柴胡饮片质量控制、药效物质基础及炮制机制的进一步研究提供参考。