基于UPLC-Q-TOF-MS和网络药理学的柴胡醋制前后抗抑郁质量标志物分析

目的 基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱法（UPLC-Q-TOF-MS）、多元统计分析和网络药理学方法确定生柴胡、醋柴胡抗抑郁作用的质量标志物（Q-Marker）及其作用机制。方法 通过UPLC-Q-TOF-MS获得生柴胡、醋柴胡饮片的化学物质基础，采用主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法-判别分析（OPLS-DA）筛选柴胡醋制前后发生显著变化的成分作为候选Q-Marker，运用网络药理学方法构建柴胡抗抑郁的“疾病-药物-成分-靶点”网络，确定生柴胡、醋柴胡抗抑郁Q-Marker。将大鼠随机分为空白组、模型组、氟西汀组（2.67 mg·kg^-1）和柴胡总皂苷组（0.72 mg·kg^-1），除空白组外，其余各组大鼠均采用慢性温和不可预知性应激法（CUMS）造模，造模开始3周后灌胃给药，各给药组给予相应剂量药物，1次/d，连续4周，空白组及模型组给予10 mL·kg^-1生理盐水，于造模前1天、造模21 d和给药28 d对各组大鼠进行体质量称量、糖水偏好实验和旷场实验；于给药28 d后，采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测各组大鼠海马组织磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）、叉头框转录因子O3a（FoxO3a）、β-连环蛋白（β-catenin）mRNA表达水平，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠海马组织PI3K、Akt、mTOR、FoxO3a蛋白表达水平。结果 共19种成分在柴胡醋制前后发生明显变化，通过S-plot差异标志物筛选确定柴胡皂苷A、柴胡皂苷B₁、柴胡皂苷B₂、柴胡皂苷C、柴胡皂苷D等9种成分为柴胡饮片的潜在Q-Marker，结合“疾病-药物-成分-靶点”网络，确定柴胡皂苷A、柴胡皂苷B₁、柴胡皂苷B₂、柴胡皂苷D作为生柴胡、醋柴胡抗抑郁的Q-Marker。药效结果显示，给药28 d后，与空白组比较，模型组、氟西汀组和柴胡总皂苷组大鼠的体质量、糖水偏好指数及旷场实验总分均显著降低（P<0.01）；与模型组比较，柴胡总皂苷组大鼠的体质量、糖水偏好指数及旷场实验总分均显著增加（P<0.01）。与空白组比较，模型组大鼠海马组织PI3K、Akt、mTOR、β-catenin mRNA表达水平明显减少，差异具有统计学意义（P<0.05），GSK-3β、FoxO3a mRNA表达水平明显增加，差异具有统计学意义（P<0.05）；与模型组比较，柴胡总皂苷组大鼠海马PI3K、Akt、mTOR、β-catenin mRNA表达水平明显增加，差异具有统计学意义（P<0.05），GSK-3β、FoxO3a mRNA表达水平明显减少，差异具有统计学意义（P<0.05）。与空白组比较，模型组大鼠海马组织Akt、mTOR蛋白表达水平显著减少（P<0.01），PI3K和FoxO3a的蛋白表达水平显著增加（P<0.01）；与模型组比较，柴胡总皂苷组大鼠海马组织Akt蛋白表达水平显著增加，差异具有统计学意义（P<0.01），mTOR表达水平增加，但差异无统计学意义，PI3K和FoxO3a的蛋白表达水平显著减少，差异具有统计学意义（P<0.01）。结论 柴胡醋制前后的化学成分发生较大变化，经物质基础、药效学、网络药理学及信号通路研究确定生柴胡、醋柴胡抗抑郁Q-Marker，为柴胡饮片质量控制、药效物质基础及炮制机制的进一步研究提供参考。

Analysis of Antidepressant Quality Markers of Bupleuri Radix Before and After Vinegar-processing Based on UPLC-Q-TOF-MS and Network Pharmacology