糖尿病肾病大鼠肾组织血管紧张素原和转化生长因子β_1基因信使核糖核酸的表达

采用ＲＮＡ狭缝杂交及放射免疫技术，检测链脲佐菌素糖尿病肾病大鼠肾组织血管紧张素原基因及转化生长因子β１基因信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）表达水平和血管紧张素Ⅱ含量。结果示糖尿病肾病大鼠肾组织ＡＴⅡ含量、血管紧张素原ｍＲＮＡ表达及转化生长因子β１ｍＲＮＡ表达水平均高于同龄正常对照鼠，提示肾组织肾素血管紧张素系统及转化生长因子β１活性升高可能参与糖尿病肾病的发生、发展过程。     

丹参酮Ⅱ-A抑制血管合成醛固酮及醛固酮合酶基因CYP11B2信使核糖核酸表达

目的：说明丹参酮ⅡＡ对血管合成血管紧张素Ⅱ及醛固酮的作用。方法：用大鼠肠系膜动脉离体灌注、高效液相色谱法和放射免疫法检测肠系膜动脉中合成的血管紧张素Ⅱ及醛固酮。用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）及ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ法检测血管中醛固酮合酶基因ＣＹＰ１１Ｂ２信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）的表达情况。结果：丹参酮ⅡＡ抑制血管合成醛固酮，但不能抑制血管合成血管紧张素Ⅱ。丹参酮ⅡＡ抑制血管中醛固酮合酶基因ＣＹＰ１１Ｂ２ｍＲＮＡ的表达。结论：丹参酮ⅡＡ治疗心血管疾病的机制可能与其抑制血管合成醛固酮有关。     

肝星形细胞存在局部肾素-血管紧张素-醛固酮系统

目的 明确肝星形细胞和永生肝星形细胞株HSC-T6是否存在局部肾素-血管紧张素-醛固酮系统。方法 采用原位酶灌注法分离培养肝星形细胞。采用放射免疫法检测细胞中肾素活性，血管紧张素Ⅱ和醛固酮水平；采用紫外分光光度法测定血管紧张素转换酶活性，免疫组化法检测血管紧张素Ⅱ1型受体的表达；RT-PCR法检测肾素，血管紧张素原，血管紧张素转换酶，血管紧张素Ⅱ1型受体醛固酮合成关键酶CYPⅡB2mRNA的表达。结果 肝星形细胞和HSC-T6中可检测到肾素活性，血管紧张素转换酶活性，血管紧张素Ⅱ和醛固酮；免疫组化结果显示二者均表达血管紧张素Ⅱ的1型受体；两种细胞均可检测到上述除血管紧张素原以外的4种基因mRNA表达。结论 肝星形细胞和HSC-T6存在局部肾素-血管紧张素-醛固酮系统。     

糖尿病肾病大鼠肾组织血管紧张素原和转化生长因子β1基因信使…

采用ＲＮＡ狭缝杂交及放射免疫技术，检测链脲佐菌素糖尿病肾病大鼠肾组织血管紧张素原基因及转化生长因子β１基因信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）表达水平和血管紧张素Ⅱ含量。结果提示肾组织肾素血管紧张素系统及转化生长因子β１活性升高可能参与糖尿病肾病的发生、发展过程。     

碱性成纤维细胞生长因子对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞肾素-血管紧张素系统的作用

以培养的自发性高血压大鼠（SHR）和正常血压（WKY）大鼠主动脉平滑肌细胞（ASMC）为模型,采用Northern印迹和逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术分别检测ASMC中血管紧张素原（Ang N）和血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）的AT_1型受体的基因表达,并用紫外法和放射免疫法分别测定培养液中的血管紧张素Ⅰ转换酶（ACE）活性和AngⅡ的含量。结果表明,基础状态及给予外源性碱性成纤维细胞生长因子（bFGF,10 ng/ml）刺激后,SHR的ASMC中上述4种实验参数的水平均明显高于WKY大鼠。提示SHR ASMC中的肾素—血管紧张素系统（RAS）处于高功能状态;bFGF能促进Ang N基因表达、激活ACE,进而导致Ang Ⅱ生成增加,同时它对AT_1受体基因表达也有调节作用,bFGF的上述作用可能是高血压时血管RAS高功能状态发生和维持的一个重要机制。     

血管紧张素Ⅱ对实验性糖尿病大鼠心肌病变的影响及卡托普利？…

目的 对实验性糖尿病大鼠（ＳＴＺ－Ｗｉｓｔａｒ大鼠）心肌组织血管紧张素Ⅱ（Ａｇ－Ⅱ）含量及Ａｇ－Ⅱ受体亚型１（ＡＴ１受体）基因ｍＲＮＡ表达和卡托普利（血管紧张素转换酶抑制剂，ＡＣＥＩ）应用对心脏病变可能的保护作用进行了观察。方法 应用分子生物学和放射免疫的方法。结果 未经胰岛素治疗的糖尿病大鼠（ＤＭ组）在４个月病程时，心重／体重（ＨＷ／ＢＷ）比值增加，心脏组织中Ａｇ－Ⅱ含量ＤＭ组高于正常对照组（Ｎ     

自发性高血压大鼠血管合成AngⅡ醛固酮及醛固酮合成酶mRNA表达

目的探讨血管合成血管紧张素Ⅱ及血管合成醛固酮在高血压大鼠中的变化。方法用肠系膜动脉离体灌注，在灌注液中测定血管紧张素Ⅱ及醛固酮。用ＲＴ－ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ法检测醛固酮合成酶基因表达的情况。结果ＳＨＲ血管合成的血管紧张素Ⅱ及醛固酮增多、主动脉组织内醛固酮合成酶基因ｍＲＮＡ表达增强。结论ＳＨＲ血管合成的血管紧张素Ⅱ及醛固酮增多，血醛固酮合成酶基因表达上调。     

大鼠肝星状细胞表达肾素-血管紧张素-醛固酮系统及其自反馈调节作用

目的明确大鼠肝星状细胞是否表达肾素血管紧张素醛固酮系统(RAAS)的全部成分及其在肝星状细胞激活过程中的变化;观察血管紧张素Ⅱ对肝星状细胞合成RAAS的反馈调节作用;探讨依那普利和氯沙坦对此系统的抑制作用。方法采用原位酶灌注法分离大鼠肝星状细胞,分别在培养第2、4、7天收集上清液,传代细胞用无血清培养,并用不同浓度依那普利和氯沙坦进行干预。采用放射免疫法检测上清液和细胞裂解液中肾素活性、血管紧张素Ⅱ和醛固酮浓度,紫外光法检测血管紧张素转换酶活性,免疫组织化学法检测血管紧张素Ⅱ受体表达,RTPCR法检测RAAS各成分mRNA表达。结果肝星状细胞表达RAAS所有成分mRNA。在肝星状细胞培养上清液中可检测到肾素活性(0.56±0.23)ng·h-1·106细胞-1。血管紧张素Ⅱ(48.79±14.54)pg105细胞和醛固酮(22.75±4.35)pg105细胞,并随肝星状细胞激活升高。依那普利可抑制肝星状细胞表达RAAS;血管紧张素Ⅱ能正反馈调节星状细胞表达RAAS,这种作用可被氯沙坦阻断。结论大鼠肝星状细胞能表达RAAS,并随其激活而升高。RAAS具有自身正反馈调节作用,可被依那普利和氯沙坦阻断。     

心肌局部肾素—血管紧张素系统在心肌缺血及再灌注损伤时的激活及Lo…

观察心肌局部肾素－血管紧张素系统在心肌缺血再灌注损伤时的激活情况及特异 非肽类血管紧张素Ⅰ、Ⅱ１型受体阻断剂Ｌｏｓａｒｔａｎ的保护效应。离体大鼠心脏灌流模型，心功能测定，放射免疫测定。心肌缺血４０ｍｉｎ后，心肌内ＡｎｇⅡ即明显增高，ＡｎｇⅠ增高尚不明显。     

血管紧张素Ⅱ对自发性高血压大鼠血红素氧合酶基因表达的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ对自发性高血压大鼠（SHR）动脉壁红素氧合酶－1（HO－1）基因表达的影响。方法 选取SHR及WKY各16只,分为药物组和对照组（各8只）,胃内分别注入培哚普利[2mg/(Kg.d)]或等量生理盐水14天,应用RT－PCR技术及放射免疫法分别检测主动脉平滑肌细胞HO－1基因表达和血浆血管紧张素Ⅱ（Ang－Ⅱ）的水平。结果 WKY两组的HO－1基因表达与Ang－Ⅱ无相关性,而SHR两组的HO－1表达与Ang－Ⅱ呈负相关。结论 自发性高血压大鼠体内Ang－Ⅱ增高可能抑制HO－1基因的表达。     

自发性高血压大鼠主动脉平滑肌细胞异常增殖和自身肾素-血管紧张素系统的关系

为探讨自发性高血压大鼠主动平滑肌细胞异常增殖和肾素－血管紧张素系统的关系，用氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入量和倍增时间来反映主动脉平肌细胞的增殖能力，放射免疫法测定血管紧张素Ⅱ浓度，紫外分光光度法测定血管紧张素转化酶活性。结果发现自发性高血压大鼠主动脉平滑肌细胞分裂增殖能力比血压正常鼠强，自发性高血压大鼠主劝脉平滑肌细胞肾素－血管紧张素系统处于高功能状态，卡托普利和Ｓａｒ长期干预可显著抑制自发性高血压大     

降钙素基因相关肽抑制血管平滑肌细胞能量代谢的AMP激活蛋白激酶信号通路

目的观察降钙素基因相关肽对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖过程中能量代谢的影响及机制,探索细胞外信号调节激酶和AMP激活蛋白激酶相关信号蛋白在该作用中的地位。方法组织贴块法体外培养SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,取第3～10代用于实验。分别用降钙素基因相关肽或/和血管紧张素Ⅱ处理细胞。MTT法及细胞计数法观察降钙素基因相关肽对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响;詹纳斯绿B染色观察细胞线粒体形态及体积;ATP检测试剂盒检测细胞内ATP水平;Western Blotting检测细胞磷酸化AMP激活蛋白激酶的表达。结果降钙素基因相关肽预处理能降低血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠血管平滑肌细胞的增殖(P<0.05),同时拮抗血管紧张素Ⅱ引起细胞内线粒体肿胀、ATP水平升高,在此过程中伴随细胞内磷酸化AMP激活蛋白激酶表达下调(P<0.05);降钙素基因相关肽受体拮抗剂CGRP8-37能拮抗降钙素基因相关肽对血管紧张素Ⅱ促增殖和促代谢的抑制作用(P<0.05);细胞外信号调节激酶抑制剂PD98059能部分拮抗降钙素基因相关肽对磷酸化AMP激活蛋白激酶的抑制作用(P<0.05)。结论降钙素基因相关肽能显著抑制血管紧张素Ⅱ诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖过程中的能量代谢,其细胞内信号通路可能涉及到降钙素基因相关肽/降钙素基因相关肽1型受体-丝裂原细胞外激酶/细胞外信号调节激酶-磷酸化AMP激活蛋白激酶信息传递链。     

两肾一夹型高血压大鼠重塑血管对血管紧张素II反应变化及其机制

为了探讨两肾一夹型高血压大鼠重塑血管对血管紧张素Ⅱ的反应变化及其机制，在制作两肾一夹型高血压大鼠模型血管基础上，观察了两肾一夹型高血压大鼠大、小动脉的形态学改变；用肠系膜微血管口径显微电视测量法和离体血管环灌流实验分别观察了两肾一夹型高血压大鼠肠系膜动脉和胸主动脉对血管紧张素Ⅱ的反应以及洛沙坦对该反应的作用；并用逆转录-聚合酶链反应检测两组动物胸主动脉血管紧张素Ⅱ1型受体nRNA和2型受体mRNA的表达。结果发现两肾一夹型高血压大鼠胸主动脉和肠系膜动脉中膜厚度增加，细胞层数增加，胶原纤维及弹力纤维含量增加；随着血管紧张素Ⅱ的浓度升高，肠系膜动脉、离体胸主动脉环收缩反应增加，而且在每一个血管紧张素Ⅱ浓度，两肾一夹型高血压大鼠肠系膜动脉和离体胸主动脉环对血管紧张素Ⅱ的收缩反应都比对照组增强；洛沙坦完全阻断离体胸主动脉环对血管紧张素Ⅱ的反应；两肾一夹型高血压大鼠胸主动脉血管紧张素Ⅱ1型受体nRNA表达增多，血管紧张素Ⅱ2型受体mRNA也有表达，而正常大鼠未见血管紧张素Ⅱ2型受体mRNA表达。此结果提示：(1)两肾一夹型高血压大鼠重塑血管对血管紧张素Ⅱ的反应增强，洛沙坦完全阻断血管对血管紧张素Ⅱ的反应；(2)血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA表达增多可能是两肾一夹型高血压大鼠重塑血管对血管紧张素Ⅱ的反应增强的机制之一。     

血管紧张素Ⅱ2型受体基因可调控体外培养的血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶2的表达

目的利用强力霉素—开放可调控哺乳动物表达系统,对体外培养血管平滑肌细胞的血管紧张素Ⅱ2型受体表达进行有效调控,在此基础上对基质金属蛋白酶2的表达受血管紧张素Ⅱ及其受体拮抗剂的影响进行研究。方法建立强力霉素可调控表达血管紧张素Ⅱ2型受体基因的双重稳定大鼠血管平滑肌细胞。观察该血管平滑肌细胞中血管紧张素Ⅱ2型受体受调控表达情况,以及血管紧张素Ⅱ及其1型、2型其受体拮抗剂干预上述细胞后基质金属蛋白酶2的表达情况变化。结果强力霉素—开放可调控哺乳动物表达系统可成功介导血管紧张素Ⅱ2型受体基因在原代培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞的表达,该表达受到强力霉素给予/去除的紧密调控;强力霉素干预可在48h内迅速诱导该血管平滑肌细胞表达血管紧张素Ⅱ2型受体,该表达在强力霉素干预后72h进一步增强(P<0.01)。血管紧张素Ⅱ2型受体基因的可调控表达抑制由于血管紧张素Ⅱ干预后引起的基质金属蛋白酶2表达的增强(P<0.01)。这一作用被血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂进一步增强(P<0.01);而被加入2型受体拮抗剂干预取消;同时给予上述两种拮抗剂时基质金属蛋白酶2的表达与基础状态时的情况一致。结论血管紧张素Ⅱ干预增强基质金属蛋白酶2的表达,该作用是通过血管紧张素Ⅱ1型受体介导的;经强力霉素诱导表达血管紧张素Ⅱ2型受体基因可以明显抑制这一生物学作用,说明血管紧张素Ⅱ2型受体基因经诱导后表达可以有效调控血管平滑肌细胞细胞外基质合成和降解。     

肾内血管紧张素系统在NO缺乏性高血压肾损害的作用

目的　探讨血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )及血管紧张素Ⅱ受体 (AT1R)在缺血性肾损害时肾脏局部的作用。方法　采用放射免疫法及Westerblooting法分别检测NO缺乏性高血压肾损害大鼠血浆和肾脏的AngⅡ含量和AT1R蛋白的表达。结果　缺血性肾损害时大鼠肾组织的AngⅡ水平明显高于对照组 ,P <0 0 1,肾组织的AT1R蛋白的表达也明显高于对照组 ,P <0 0 5 ,但血浆中的AngⅡ水平与对照组比无显著差异。结论　在NO缺乏性缺血性肾损害时存在AngⅡ及其AT1R蛋白的表达明显上调 ,它们可参与肾脏损害的过程。     

局灶性缺血再灌注大鼠脑血管紧张素Ⅱ1型受体基因的表达

目的　研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后血管紧张素Ⅱ 1型受体 (AT1 R)基因的表达及氯沙坦对其的影响。方法　 32只Wistar大鼠随机分为氯沙坦用药组、缺血再灌注组、假手术组和正常对照组 ,氯沙坦用药组给予氯沙坦(10mg·kg- 1 ·d- 1 )灌胃 ,2周后制作大鼠大脑中动脉栓塞再通模型 ,运用逆转录 聚合酶链反应法检测大脑中动脉供血区皮质AT1 RmRNA的表达 ;用放射免疫法测定血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )的水平。结果　缺血再灌注组缺血区皮质AT1 RmRNA的表达和AngⅡ的水平均高于正常对照组 ,氯沙坦用药组缺血区皮质AT1 RmRNA的表达较缺血再灌注组降低。结论　局灶性脑缺血再灌注诱导AngⅡ水平和AT1 R基因的表达增加 ,氯沙坦可降低AT1 R基因的表达。     

两肾一夹型高血压大鼠重塑血管对血管紧张素II反应变化及其机制

为了探讨两肾一夹型高血压大鼠重塑血管对血管紧张素Ⅱ的反应变化及其机制,在制作两肾一夹型高血压大鼠模型血管基础上,观察了两肾一夹型高血压大鼠大、小动脉的形态学改变; 用肠系膜微血管口径显微电视测量法和离体血管环灌流实验分别观察了两肾一夹型高血压大鼠肠系膜动脉和胸主动脉对血管紧张素Ⅱ的反应以及洛沙坦对该反应的作用;并用逆转录-聚合酶链反应检测两组动物胸主动脉血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA和2型受体mRNA的表达.结果发现两肾一夹型高血压大鼠胸主动脉和肠系膜动脉中膜厚度增加,细胞层数增加,胶原纤维及弹力纤维含量增加;随着血管紧张素Ⅱ的浓度升高,肠系膜动脉、离体胸主动脉环收缩反应增加,而且在每一个血管紧张素Ⅱ浓度,两肾一夹型高血压大鼠肠系膜动脉和离体胸主动脉环对血管紧张素Ⅱ的收缩反应都比对照组增强;洛沙坦完全阻断离体胸主动脉环对血管紧张素Ⅱ的反应;两肾一夹型高血压大鼠胸主动脉血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA表达增多,血管紧张素Ⅱ2型受体mRNA也有表达,而正常大鼠未见血管紧张素Ⅱ2型受体mRNA表达.此结果提示:(1)两肾一夹型高血压大鼠重塑血管对血管紧张素Ⅱ的反应增强,洛沙坦完全阻断血管对血管紧张素Ⅱ的反应;(2)血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA表达增多可能是两肾一夹型高血压大鼠重塑血管对血管紧张素Ⅱ的反应增强的机制之一.     

孕期脂多糖刺激对子代大鼠血管肾素血管紧张素系统的影响

目的 探讨孕期炎症刺激对子代大鼠血管局部肾素血管紧张素系统的影响。方法 Sprague Dawley(SD)孕鼠6只随机分为对照组和脂多糖(LPS)组,于孕期第8、10、12天分别给予生理盐水和LPS 0.79 mg/kg(腹腔注射),子代大鼠出生后采用无创伤尾动脉方法测定血压,免疫组织化学方法测定胸主动脉血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)蛋白的表达水平,Western blot方法测定血管局部血管紧张素Ⅱ1型受体( AT1 R)、血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)的蛋白含量。结果 LPS组子代大鼠出生后第12周血压明显高于对照组子代大鼠(P＜0.01),15周龄胸主动脉血管组织的AngⅡ表达明显高于对照组子代大鼠(P＜0.01),AT1R蛋白表达明显高于对照组子代大鼠(P＜0.05),AT2R蛋白表达低于对照组子代大鼠,但差异无统计学意义,AT1R/AT2R比值明显高于对照组子代大鼠(P＜0.01)。结论 孕期炎症刺激导致子代大鼠血管局部肾素血管紧张素系统异常,可能是子代大鼠高血压发生发展的重要原因。     

罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ受体表达的影响

目的探讨罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ受体表达的影响及抗动脉粥样硬化可能的分子机制。方法体外培养SD大鼠血管平滑肌细胞，应用半定量逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学技术，测定罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ1型受体和2型受体mRNA和蛋白表达的剂量、时间依赖的影响。结果基础状态下，血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ1型受体和2型受体均有少量的表达。血管紧张素Ⅱ显著上调血管紧张素Ⅱ1型受体（P〈0.01）和下调2型受体的表达（P〈0．05）。浓度依赖实验表明，不同浓度罗格列酮（20、30和50μmol／L）干预12h均显著下调血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA和蛋白的表达（P〈0．01），上调2型受体mRNA和蛋白的表达（P〈0．01和0．05）。时间依赖实验表明，30μmol／L的罗格列酮干预后，6h即出现明显的干预效应，24h时下调血管紧张素Ⅱ1型受体和上调2型受体mRNA和蛋白的作用最大，与血管紧张素Ⅱ组比差异有显著性（P〈0．01）。结论罗格列酮可呈浓度依赖和时间依赖性地下调血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA和蛋白的表达，上调血管紧张素Ⅱ2型受体mRNA和蛋白的表达，这可能是过氧化体增殖物激活型受体7激动剂罗格列酮发挥抗炎、抗动脉粥样硬化作用的重要机制。     

纤溶酶原激活物抑制物—1在糖尿病大鼠肾皮质的表达和牛磺酸的 …

目的 研究纤溶酶原激活物抑制物－１（ＰＡＩ－１）在糖尿病大鼠肾皮质的表达和牛磺酸对它的调节作用。方法 链脲佐菌素诱发的糖尿病大接受牛磺酸治疗１４周后,测定肾皮质血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）活性,血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）含量、组织型纤溶酶原活的（ｔ－ＡＰ）和ＰＡＩ－１生物活性。用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测肾皮质ＰＡＩ－ ＭＲＡＮ表达。结果 与对照组大鼠相比,糖尿病组大鼠肾皮质ＡＣＥ、ＰＡＩ－１活性和Ａｎ