衰老心肌自噬减退的新机制-转录因子EB的关键作用

目的 探讨转录因子EB（TFEB）在衰老心肌自噬减退中的作用。方法 采用老年（22月龄）雄性C57BL/6小鼠为实验对象,以成年（4月龄）雄性C57BL/6小鼠为对照,分析心肌自噬水平、心肌TFEB表达水平。结果 与成年心肌相比,衰老心肌自噬水平显著降低（P<0.05）。衰老心肌中自噬体标志物Atg5、LC3和Beclin-1,溶酶体标志物LAMP1在蛋白和mRNA水平上均出现降低。与成年心肌相比,衰老心肌TFEB蛋白水平显著降低（P<0.05）,衰老心肌细胞核内的TFEB水平下降更为显著（P<0.05）,提示衰老心肌TFEB转录能力减退。给予小剂量雷帕霉素处理,可提高衰老心肌细胞核内TFEB水平,并且改善LC3及LAMP1的mRNA和蛋白水平,提高衰老心肌自噬水平。结论 本研究发现衰老导致的心肌TFEB水平降低严重影响心肌自噬能力,提示TFEB是心肌自噬增龄性减退机制中的关键调节因子。     

大鼠心脏自噬昼夜节律的老年化改变研究

目的探讨大鼠心脏自噬昼夜节律的老年化改变及可能机制。方法随机选取健康雄性SD大鼠48只,其中6月龄大鼠24只(青年组)和26月龄大鼠24只(老年组)。观察大鼠昼夜活动习性,分别在03:00,06:00,09:00,12:00,15:00,18:00,21:00,24:00各时间点收集心脏样本,运用冷冻切片免疫荧光染色结合激光扫描共聚焦成像技术、亚细胞结构细胞核-细胞质分离技术和免疫印迹技术检测心脏自噬规律及可能调控机制。结果青年组大鼠昼伏夜出,自噬昼夜节律曲线明显,其中18:00 LC3-Ⅰ转化LC3-Ⅱ明显高于12:00,而在15:00细胞核C/EBPβ表达明显高于18:00(P<0.05);而老年组大鼠夜间及昼间均嗜睡,LC3-Ⅰ转化LC3-Ⅱ和细胞核C/EBPβ昼夜无节律性变化。结论衰老改变心脏自噬的昼夜节律,核转录因子C/EBPβ参与其调控。     

蛋白激酶B/糖原合成酶激酶3β信号途径在左心室肥厚大鼠心肌组织中的变化

目的建立左心室肥厚大鼠模型,研究蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶3β在肥厚心肌组织中的变化。方法将Wistar大鼠随机分为主动脉结扎组和假手术组,结扎大鼠胸主动脉成功建立左心室肥厚模型。用WesternBlot方法检测左心室心肌蛋白激酶B、磷酸化蛋白激酶B、糖原合成酶激酶3β和磷酸化糖原合成酶激酶3β的表达。结果主动脉结扎组与假手术组比较,室间隔厚度(1.60±0.10 mm比0.90±0.10 mm)和左心室后壁厚度(1.60±0.07 mm比1.00±0.07 mm)升高(P<0.01);左心室短轴缩短率升高(56.9%±3.4%比47.8%±2.1%,P<0.05);左心室压力最大上升速率则显著降低(3 508±310 mmHg/s比4 675±322 mmHg/s,P<0.05);心肌组织蛋白激酶B磷酸化明显增加(1.2±0.3比0.9±0.3,P<0.05),而磷酸化糖原合成酶激酶3β降低(0.7±0.2比0.9±0.2,P<0.05)。结论蛋白激酶B/糖原合成酶激酶3β这一信号转导途径参与压力负荷所致心肌肥厚的病理生理过程,肥厚心肌糖原合成酶激酶3β表达下调,提示糖原合成酶激酶3β对心肌肥厚可能有抑制性作用。     

心肌细胞核钙调素Ⅰ和CREB磷酸化在压力负荷大鼠心肌肥厚中的作用

目的探讨钙调素Ⅰ(CaM Ⅰ)及核转录因子CREB磷酸化在压力超负荷大鼠心肌肥厚中的作用.方法100只健康雄性SD大鼠随机分为对照组(n=50)和心肌肥厚组(n=50),制备腹主动脉缩窄大鼠心肌肥厚模型,模型复制成功后4周,以改良差速离心和密度梯度离心法提纯细胞核,以蛋白印迹法测定心肌细胞核CREB及磷酸化CREB(pCREB)表达,免疫组化法观察左室心肌组织CaMⅠ蛋白表达及分布,延续转录分析法观察阻断CaM后心肌细胞核c-fos mRNA的变化.结果与对照组比较,心肌肥厚组pCREB蛋白光密度明显增加(104.71 vs 75.29,P＜0.05),CREB蛋白光密度无明显变化(128.43vs 113.86,P＞0.05);CaMⅠ分布于细胞核及细胞浆,心肌肥厚组CaMⅠ蛋白表达较对照组明显增加(21.64 vs 17.24,P＜0.05);使用CaM抑制剂后心肌肥厚组心肌细胞核c-fos mRNA表达明显降低(144.6 vs 54.1,P＜0.05).结论压力超负荷时心肌细胞核内CaMⅠ蛋白表达增加,可能通过增加核转录因子CREB磷酸化,上调早期基因c-fos表达参与心肌肥厚的发生.     

小鼠主动脉缩窄术后心肌水肿与水通道蛋白表达的相关性

目的观察小鼠心肌组织水通道蛋白(AQP)1的表达对心肌水肿的影响。方法采用主动脉缩窄法(TAC)建立小鼠心肌肥厚和水肿模型。实验分为四组:(1)假手术组(Sham组);(2)Sham+氯化汞(HgCl_2)组,假手术后心肌注射0.3 mmol/L HgCl_2 50μl;(3)手术组(TAC组);(4)TAC+HgCl_2组,TAC术后心肌注射0.3 mmol/L HgCl_2 50μl。每组10只。术后2 w心脏超声检测各组小鼠心功能。计算各组小鼠心脏重量/体重比和心肌组织含水量。采用RT-PCR法检测各组小鼠心肌组织中AQP1 mRNA表达。采用Western印迹法检测各组小鼠心肌组织AQP1蛋白表达。结果 TAC术后2 w,小鼠心肌组织发生明显肥厚和水肿。同时,TAC小鼠心肌组织中AQP1 mRNA和蛋白的表达比Sham组显著升高。心肌注射AQP1功能阻滞剂HgCl_2可以降低TAC小鼠心脏重量/体重比和心肌组织含水量,改善TAC小鼠心功能。结论心肌组织中AQP1表达增加与TAC术后心肌水肿密切相关,阻滞AQP1功能可减轻心肌水肿,并改善心功能。     

过度自噬介导心肌肥厚心功能不全

目的研究自噬在心肌肥厚心功能不全中的作用。方法采用前期构建的心肌肥厚心功能失代偿的热休克蛋白27转基因鼠(heat shock protein transgenic mice,Hsp27 Tg)模型(4周龄、雌性),随机分为(1)自噬抑制(WM)组:自噬抑制剂渥曼青霉素(wortmannin,WM)溶于DMSO溶剂,以1 mg/kg腹腔注射;(2)溶剂组:等体积的DMSO溶剂腹腔注射,连续3~7周龄。选取年龄、性别匹配的野生型对照鼠(wild type,WT)作为WT组。于注射WM前、后,测定心脏质量/体质量比值(heart weight/body weight,HW/BW),以二维超声心动图测定心功能,以免疫印迹方法测定LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和p62水平以评价自噬水平。结果 (1)与WT组相比,4周龄Hsp27 Tg鼠HW/BW显著增加,而心脏射血分数(ejection fraction,EF%)和短轴缩短率(fraction shortening,FS%)均显著下降(P0.01);(2)与WT组相比,4周龄Hsp27 Tg鼠心肌组织中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高,而p62水平下降(P0.01);(3)与溶剂组比较,注射3周后的WM组Hsp27 Tg鼠心肌组织中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ水平下降,而p62水平升高(P0.01);(4)与溶剂组比较,WM注射3周Hsp27 Tg鼠的心脏EF%、FS%均显著增加(P0.01)。结论WM通过抑制自噬水平改善Hsp27高表达诱导的病理性心肌肥厚心功能不全,提示过度自噬介导了心肌肥厚心功能不全的进展,为进一步探究心肌肥厚失代偿阶段的发病机制提供理论基础。     

心肌细胞核钙调素Ⅰ和CREB磷酸化在压力负荷大鼠心肌肥厚中的作用

目的探讨钙调素Ⅰ(Ca MⅠ)及核转录因子CREB磷酸化在压力超负荷大鼠心肌肥厚中的作用。方法100只健康雄性SD大鼠随机分为对照组(n=50)和心肌肥厚组(n=50),制备腹主动脉缩窄大鼠心肌肥厚模型,模型复制成功后4周,以改良差速离心和密度梯度离心法提纯细胞核,以蛋白印迹法测定心肌细胞核CREB及磷酸化CREB(pCREB)表达,免疫组化法观察左室心肌组织Ca MⅠ蛋白表达及分布,延续转录分析法观察阻断Ca M后心肌细胞核c-fos mRNA的变化。结果与对照组比较,心肌肥厚组pCREB蛋白光密度明显增加(104·71vs75·29,P<0·05),CREB蛋白光密度无明显变化(128·43vs113·86,P>0·05);Ca MⅠ分布于细胞核及细胞浆,心肌肥厚组Ca MⅠ蛋白表达较对照组明显增加(21·64vs17·24,P<0·05);使用Ca M抑制剂后心肌肥厚组心肌细胞核c-fos mRNA表达明显降低(144·6vs54·1,P<0·05)。结论压力超负荷时心肌细胞核内Ca MⅠ蛋白表达增加,可能通过增加核转录因子CREB磷酸化,上调早期基因c-fos表达参与心肌肥厚的发生。     

Wnt/β-catenin通路抑制剂Wnt-C59对病理性心肌肥大的治疗作用及其机制

目的观察Wnt/β-catenin通路抑制剂Wnt-C59对病理性心肌肥大的作用并探讨这一过程的分子机制。方法 (1)动物实验:对8~10周龄(18~22g)的雄性C57B/L小鼠施行主动脉缩窄术(TAC)以诱导病理性心肌肥大。实验分4组:1对照组;2Wnt-C59组;3TAC模型组;4TAC+Wnt-C59组。(2)细胞实验:使用0.1μmol/L血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激新生大鼠心肌细胞(NRVM)诱导病理性心肌细胞肥大。实验分4组:1对照组;2Wnt-C59组;3AngⅡ模型组;4AngⅡ+Wnt-C59组。观察的实验指标:TAC术后4周小鼠的心脏质量/体质量、心功能、心肌细胞横截面面积;NRVM表面积、β-catenin核转位、β-catenin下游肥大相关基因C-myc、Cyclin-D1的mRNA表达量。结果 Wnt-C59明显降低由TAC所致的心脏质量/体质量增加[TAC+Wnt-C59:(6.02±0.48)比TAC:(7.45±1.15)mg/g,P0.05],改善心功能[射血分数:TAC+Wnt-C59:(59.29±4.61)%比TAC:(48.60±2.72)%,P0.05]。并减轻TAC诱导的心肌细胞横截面积增加。Wnt-C59明显减轻AngⅡ诱导的心肌细胞表面积增大,β-catenin入核[AngⅡ+Wnt-C59:(15.90±4.11)%比AngⅡ(25.27±6.69)%,P0.05]以及肥大基因C-myc、Cyclin-D1的高表达。结论 Wnt/β-catenin通路抑制剂Wnt-C59对病理性心肌细胞肥大具有保护作用,其机制可能是抑制β-catenin入核进而抑制其下游肥大基因C-myc、Cyclin-D1的转录。     

辛二酰苯胺异羟肟酸通过抑制组蛋白去乙酰化酶改善小鼠心肌肥厚的研究

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)改善小鼠心肌肥厚的作用,为防治心肌肥厚提供新思路。方法:选取60只昆明小鼠,随机分为正常组、假手术组、心肌肥厚组、心肌肥厚+SAHA组,通过部分结扎小鼠胸主动脉建立心肌肥厚模型,最终每组纳入6只。采用苏木素伊红(HE)染色观察小鼠心肌细胞,超声心动图检测小鼠心功能,比色法检测HDAC活性,小鼠心肌组织中HDAC亚型HDAC5和β-肌球蛋白重链(β-MHC)信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达水平分别运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测。结果:HE染色结果表明心肌肥厚组小鼠心肌细胞肥大、排列紊乱、细胞核深染。心肌肥厚组小鼠左心室舒张末期直径、左心室舒张末期容积均显著低于假手术组(P0.05),而室间隔明显较假手术组增厚(P0.05)。心肌肥厚组小鼠HDACs活性显著高于假手术组(P0.05);心肌肥厚组HDAC5和β-MHC的mRNA及蛋白表达水平均显著高于假手术组(P0.05)。SAHA能够显著降低HDAC5表达水平,显著下调心脏肥厚相关基因β-MHC的表达并改善小鼠心功能和心肌肥厚(P均0.05)。结论:HDAC参与了心肌肥厚的发生,HDAC抑制剂SAHA通过抑制HDAC5的表达从而改善小鼠心肌肥厚。     

微小RNA451a对心肌肥厚的影响

目的探讨微小RNA(miRNA)-451a在心肌肥厚的作用。方法腹主动脉缩窄术(abodminal aortic constriction,AAC)建立大鼠心肌肥厚模型,超声检测、心肌肥厚指数及组织病理学观察评估模型建立效果,蛋白印迹检测LC3II/I的比值,实时定量聚合酶链反应(quantiative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测心肌miRNA-451a及肥厚标志基因的表达。乳鼠心肌细胞分空白对照组及异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)组,qRT-PCR检测miRNA-451a及肥厚标志分子基因的表达,免疫荧光测定细胞表面积及测定LC3II/I的比值。乳鼠心肌细胞分4组,即miR-451a mimic组及其阴性对照组、miR-451a inhibitor组及其阴性对照组,分别转染乳鼠心肌细胞24 h再予ISO处理48 h,qRT-PCR检测肥厚标志基因的表达,测定细胞表面积及LC3II/I比值。结果 AAC组大鼠心肌肥厚模型建立成功,其肥厚标志基因表达上调,miRNA-451a表达下调,LC3II/I比值增大。ISO组心肌细胞比空白对照组肥厚标志基因表达上调,miRNA-451a表达下调,LC3II/I比值及细胞表面积增大。miRNA-451a mimic+ISO组心肌细胞比阴性对照组肥厚标志基因表达下调,细胞表面积及LC3II/I比值减小;而miRNA-451a inhibitor+ISO组心肌细胞则表现相反。结论 miRNA-451a可能在心肌肥厚过程中具有调控作用。     

压力超负荷对大鼠左室心肌CaMKⅡ和pCREB表达的影响

目的探讨钙调素激酶Ⅱ（CaMKⅡ）和磷酸化核转录因子CREB（pCREB）在压力超负荷大鼠左室心肌中表达的变化。方法100只健康雄性SD大鼠随机分为对照组（n=50）和心肌肥厚组（n=50）,制备腹主动脉缩窄大鼠心肌肥厚模型,手术后4周以免疫组化法观察左室心肌CaMKⅡ及pCREB蛋白表达及分布,RT-PCR法检测左室心肌组织bcl2-mRNA含量。结果CaMKⅡ分布于细胞核和细胞浆,pCREB主要分布于细胞核,心肌肥厚组CaMKⅡ和pCREB吸光值显著高于对照组（CaMKⅡ:21.0±0.6vs15.5±0.9;pCREB:16.4±0.7vs11±0.7;P<0.05）;心肌肥厚组bcl-2的mRNA表达显著低于对照组（0.52±0.07vs0.68±0.09,P<0.05）。结论压力超负荷时CaMKⅡ激活,核转录因子CREB磷酸化增加,可能通过下调抗凋亡基因bcl-2表达参与心肌肥厚的发生。     

PCBP2在压力负荷诱导的小鼠心肌肥厚发生中的作用

目的 探讨PCBP2在压力负荷诱导的小鼠心肌肥厚发生过程中的作用。方法 选取8～10周龄的雄性C57BL/6小鼠20只,体重23～28 g;随机分为2组,每组各10只,分别施以主动脉缩窄术（TAC组）和假手术（Sham组）。术后4周应用超声心动图评价小鼠的心脏功能,应用心脏重量与体重之比（HW/BW）定量评价心肌肥厚程度。Real-time PCR检测心肌肥厚标志物Nppa、β-MHC（Myh7）的mRNA水平,同时检测PCBP2 mRNA水平。Western blot方法检测Nppa、β-MHC及PCBP2的蛋白水平。比较分析两组之间的差异。结果 与Sham组相比,TAC组小鼠的心肌肥厚程度明显增加（TAC组 vs Sham组=8.23±1.88 mg/g vs 4.89±0.68 mg/g）,左心室射血分数（TAC组 vs Sham组=59.15±3.58% vs 41.38±2.22%）及短轴收缩率（TAC组 vs Sham组=43.87±1.37% vs 33.61±0.92%）明显降低（P<0.05）。TAC组的心肌肥厚标志物Nppa、β-MHC 的mRNA水平及蛋白水平均明显高于Sham组（P<0.05）。然而,TAC组PCBP2 mRNA水平及蛋白水平却明显低于Sham组（P<0.05）,与心肌标志物Nppa、β-MHC的变化趋势相反。结论 PCBP2在压力负荷诱导的小鼠心肌肥厚发生过程中起着负性调节作用,上调PCBP2表达可能会抑制心肌肥厚的发展。     

芪苈强心胶囊通过抑制血管紧张素Ⅱ改善压力超负荷致小鼠心肌肥厚

目的探讨探讨芪苈强心胶囊是否通过抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)表达改善压力超负荷下小鼠心肌肥厚。方法小鼠行升主动脉缩窄手术(TAC)建立心肌肥厚模型,8-10周龄野生型雄性小鼠(WT)和雄性血管紧张素原基因敲除小鼠(ATG-/-)随机分为假手术组、生理盐水组、芪苈强心胶囊三组,TAC组小鼠给予生理盐水或1.0mg/(kg.d)药物灌胃处理。术后2周行心超及血流动力学检查,同时分析心肌组织学指标以及肥厚相关基因表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆和心肌组织AngⅡ浓度,,蛋白印迹法检测磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)及血管紧张素Ⅱ-1型(AT1)受体表达。结果 WT和ATG-/-小鼠TAC后2周,主动脉血压及左室收缩末期压显著升高,芪苈强心胶囊对其均无影响。WT小鼠中,此药显著抑制TAC介导AngⅡ的升高(P<0.05),抑制TAC介导的左室前壁,左室后壁增厚以及心肌细胞横截面积(CSA)和纤维化面积增大,同时抑制肥厚相关基因、AT1受体和p-ERK表达上调(P<0.05),;ATG-/-小鼠中,在AngⅡ缺失的情况下,TAC两组间左室前后壁、CSA、纤维化面积以及肥厚相关基因、AT1受体和p-ERK...     

高血压大鼠心肌内质网应激时GRP78和CHOP的表达及其与心肌细胞凋亡的关系

目的:探讨心肌组织内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein78,GRP78)和C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)在高血压大鼠心肌中的表达及其与心肌细胞凋亡的关系。方法:将48只SD大鼠随机等分为两个组,一组采用腹主动脉缩窄术(TAC)建立高血压模型,称为TAC组;另一组只进行相应的假手术,称为Sham组。按术后饲养时间(3 d、7 d、14 d和28 d)的不同,TAC组又分为4个组,即TAC3d组、TAC7d组、TAC14d组和TAC28d组,每组6只(n=6);Sham组也又分为4个组,即Sham3d组、Sham7d组、Sham14d组和Sham28d组,每组6例(n=6)。用颈动脉插管法测定各组大鼠的平均动脉压(MAP);用Western blot法检测GRP78蛋白和CHOP蛋白表达的水平;用TUNNEL法检测心肌细胞的凋亡。结果:①TAC3d组、TAC7d组、TAC14d组和TAC28d组的MAP均显著高于相应的各Sham组(P0.05),且TAC各组的MAP随着术后时间的延长,血压值呈逐渐递增的趋势。②GRP78蛋白在TAC术后3 d即发现表达(0.20±0.02),明显高于Sham3d组(0.10±0.02)(P0.05);但明显低于其他各TAC组(P0.05)。随着术后时间的延长,TAC7d组GRP78蛋白的表达达到最高(0.94±0.03),其后各组呈递减趋势;但TAC7d组、TAC14d组和TAC28d组GRP78蛋白表达的水平均明显高于相应的各Sham组(P0.05)。③随着TAC术后时间的延长,心肌组织中CHOP蛋白的表达呈递増趋势;TAC7d组、TAC14d组和TAC28d组CHOP蛋白表达的水平,分别为(0.17±0.01)、(0.36±0.03)和(0.61±0.02),均明显高于相应的各Sham组(P0.05)。TAC3d组CHOP蛋白的表达与Sham3d组比较,无明显差异。④Sham3d组和TAC3d组中仅有极少数凋亡细胞;Sham7d组和TAC7d组可见较多的凋亡细胞,且随着时间的延长细胞凋亡率逐渐增加,TAC28d组的凋亡率达最高(30.23±0.17)%;TAC7d组、TAC14d组和TAC28d组细胞凋亡率显著高于相应的各Sham组(P0.05)。⑤相关性分析显示,从TAC7d组、14d组及28d组的MAP与心肌组织中GRP78蛋白的表达呈显著的负相关(r=-0.882,P0.01),与CHOP蛋白的表达呈显著正相关(r=0.933,P0.01);CHOP蛋白的表达与GRP78蛋白的表达呈显著负相关(r=-0.980,P0.01),与心肌细胞的凋亡率呈显著的正相关(r=0.997,P0.01)。结论:高血压诱导心肌组织内质网应激反应在血压升高早期以GRP78的表达占优势,随着血压持续性升高可导致CHOP在心肌中超表达,参与心肌细胞凋亡的病理过程,并使心肌内质网应激稳态调节发生失衡。     

TRPM7抑制剂对压力超负荷大鼠心肌肥厚的影响

目的研究瞬时受体电位通道M7(Transient receptor potential melastatin 7 channels,TRPM7)抑制剂对压力超负荷所致心肌肥厚及炎症反应的影响。方法雄性SD大鼠20只,随机分为三组:假手术组(n=6)、主动脉缩窄组(TAC组)(n=7)、TAC+2-Aminoethoxydiphenyl Borate(2-APB)组(TRPM7抑制剂组)(n=7)。通过在右侧无名动脉和左侧颈总动脉之间缩窄胸主动脉而诱导大鼠心肌肥厚模型。抑制剂组造模前一天开始给药,腹腔注射,每3天一次,2.5mg/kg。造模2周后取各组大鼠左心室,将心肌样本切片,苏木素-伊红染色观察心肌形态学改变;Masson染色检测心肌组织胶原沉积,免疫荧光检测TRPM7、巨噬细胞标记分子CD68和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达。结果 TAC组与假手术组相比,心肌细胞直径增大,胶原沉积增多,TRPM7、CD68、MCP-1表达均增加;TRPM7抑制剂处理后,上述情况均有改善。结论 TRPM7的表达在压力超负荷诱导的心肌肥厚模型中显著增加,抑制TRPM7改善心肌肥厚,减少心肌组织胶原沉积及巨噬细胞浸润。     

细胞自噬在激素性股骨头缺血坏死大鼠发病中的作用

目的 探索细胞自噬在激素性股骨头缺血坏死(SANFH)大鼠发病机制中的作用。方法 24只无特定病原体(SPF级)SD大鼠(雄鼠各半),随机抽样分为：正常(C)组、模型(T1)组、自噬阻断(T2)组、自噬激动(T3)组,每组雌、雄各3只。C组给予生理盐水,T1、T2、T3组分别给予甲泼尼龙、甲泼尼龙+3-甲基腺嘌呤(MA)、甲泼尼龙+雷帕霉素。8 w后处死,取后肢股骨头并测量坏死面积,采用免疫组化、Western印迹检测坏死股骨头组织中微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ/Ⅰ、自噬效应蛋白(Beclin)1及p62蛋白的表达情况。结果 T1、T2、T3组经甲泼尼龙干预8 w后,至少一侧股骨头坏死率分别为83.33%、16.67%、100.00%,T1、T2、T3组与C组比较均具有统计学差异(均P<0.05),且T1组、T3组股骨头坏死面积均显著大于C组和T2组(均P<0.05)。免疫组化染色和Western印迹检测LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin 1、p62蛋白结果显示,T1、T3组股骨头组织中LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin 1的表达量显著高于C组、T2组(均P<0.05),但p62...     

大鼠心肌肥厚过程中亲环素A表达时程变化

目的探讨大鼠压力负荷性心肌肥厚过程中左心室心肌组织中亲环素A表达的时程变化。方法采用腹主动脉缩窄法建立压力负荷性大鼠心肌肥厚模型。术后4周和8周,检测左心室重量和体质量比值观察心肌肥大程度。然后用蛋白免疫印迹检测左心组织中亲环素A表达变化。结果在术后4周和8周,腹主动脉缩窄组左心/体质量比值比假手术对照组分别增加38.10%和37.70%。蛋白免疫印迹结果显示,两组亲环素A的表达均随鼠龄的增长而增加,但在术后4周和8周,腹主动脉缩窄组左心室心肌组织中亲环素A表达明显高于假手术对照组,亲环素A表达分别增加26.06%和31.95%。结论大鼠心肌肥厚的同时伴随亲环素A表达增多,提示心肌肥厚发病机制可能涉及亲环素A。     

大鼠左心室后负荷增加对心肌肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的:分析腹主动脉缩窄诱导高血压大鼠心肌中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的合成,并探讨其调控机制.方法:选雄性SD大鼠,无菌条件下在腹主动脉放置银夹构建腹主动脉缩窄模型(腹主动脉缩窄组).分别在术后1、3个月利用伊红-苏木精染色和磷钨酸苏木精染色评价左心室肥厚,免疫组化检测心肌中TNF-α含量,凝胶滞留实验筛选TNF-α可能的调控序列.结果:手术后3个月与假手术组大鼠相比,左心室出现显著肥厚,细胞面积分别为(429.4±57.6)μm2、(948.4±94.3)μm2,P＜0.01.假手术组大鼠心肌TNF-α免疫组化染色为阴性,腹主动脉缩窄组手术后1、3个月大鼠心肌均显示强阳性.所有后负荷增加的心肌核蛋白与TNF-α上游序列的核转录因子(NF)-κB结合位点(-619～-591和-508～-481)的结合均高于后负荷正常的心肌.结论:左心室后负荷增加引起心肌TNF-α增高伴NF-κB核转移,TNF-α在心脏重构过程中起促进作用.     

大鼠心肌组织中5-HT和AngⅡ含量在心肌肥厚前后的变化

目的 :探讨心肌组织中 5 -羟色胺 （ 5 - HT）及血管紧张素 （ Ang ）含量与心肌肥厚发生的关系。方法 :采用腹主动脉缩窄法建立压力超负荷心肌肥厚模型 ;腹腔注射甲状腺素法建立体液性心肌肥厚模型 ;荧光分光光度法和放射免疫分析法测定 5 - HT及 Ang 含量。结果 :压力超负荷和甲状腺素致心肌肥厚大鼠心肌组织中 5 - HT含量较对照组显著增加 （ 2 98± 5 7vs4 2 8± 5 8ng· g- 1 ,P<0 .0 1;2 77± 4 7vs3 62± 76ng· g- 1 ,P<0 .0 5 ） ;同样 ,在两种心肌肥厚大鼠心肌组织中 Ang 含量也有不同程度的增加 （ 190± 75 vs3 2 3± 63 pg· g- 1 ,P<0 .0 1;167± 5 5 vs2 78± 4 6pg· g- 1 ,P<0 .0 1）。结论 :提示 5 - HT及 Ang 与压力超负荷和体液性因素致心肌肥厚的形成有关。