PBDE-47对人神经母细胞瘤细胞凋亡和线粒体膜电位及细胞色素C蛋白表达的影响

目的探讨PBDE-47对人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞线粒体膜电位和细胞色素C(Cyt C)蛋白表达的影响及其与细胞凋亡的关系。方法将处于对数生长期的SH-SY5Y细胞分别加入终浓度为0(溶剂对照组)、1、5、10μmol/L的PBDE-47暴露24 h。采用流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位变化,采用Western blot技术检测胞浆与线粒体细胞色素C蛋白表达的水平。结果与溶剂对照组相比,10μmol/L PBDE-47染毒组SH-SY5Y细胞凋亡率和5、10μmol/L PBDE-47染毒组胞浆内细胞色素C蛋白表达水平均明显升高,10μmol/L PBDE-47染毒组线粒体膜电位和各浓度PBDE-47染毒组线粒体内细胞色素C蛋白表达水平均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。且随着PBDE-47染毒浓度的升高,SH-SY5Y细胞凋亡率和胞浆内细胞色素C蛋白表达水平呈升高趋势,线粒体内细胞色素C蛋白表达水平呈下降趋势。结论 PBDE-47可通过引起线粒体膜通透性转运孔开放和细胞色素C的释放介导SH-SY5Y细胞凋亡,从而对SH-SY5Y细胞产生损伤。     

多溴联苯醚对SH-SY5Y细胞氧化应激及凋亡的影响

目的观察2,2’,4,4’-四溴联苯醚(PBDE-47)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞株氧化应激和凋亡的影响及活性氧在细胞凋亡中的作用。方法实验共分4组,PDDE-47终浓度为0、2、4、8μg/ml,分别作为对照组,低、中、高剂量组。用2、4、8μg/ml PBDE-47对培养的SH-SY5Y细胞染毒,24 h后检测细胞存活率、活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量及凋亡率。结果与对照组比较,低剂量组细胞存活率略有上升,中、高剂量组细胞存活率明显降低,差异有统计学意义(P相似文献   

2,2’,4,4’-四溴联苯醚对人神经母细胞瘤细胞自噬水平的影响

目的探讨2,2’,4,4’-四溴联苯醚(2,2’,4,4’-tetrabromodiphenyl ethers,PBDE-47)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬水平的影响。方法取对数生长期的SH-SY5Y细胞,分别以终浓度为0(溶剂对照)、1、5、10μmol/L的PBDE-47染毒处理24 h后,采用透射电子显微镜观察细胞内双层膜自噬体结构;以自噬囊泡示踪剂单丹黄酰尸胺(MDC)染色检测自噬囊泡生成情况;采用Western blotting技术检测自噬相关蛋白LC3、Beclin1、P62的表达水平。结果电镜超微结构观察结果显示,对照组细胞内未见异常变化,1μmol/L染毒组细胞内可见轻微的线粒体扩张但未见明显的双层膜自噬体结构,5μmol/L染毒组细胞内可见明显的线粒体空泡及双层膜自噬体结构,10μmol/L染毒组细胞内观察到的双层膜自噬体结构最多;与对照组相比,5、10μmol/L PBDE-47染毒组MDC荧光强度升高,MDC阳性细胞比例增加;此外,5、10μmol/L PBDE-47染毒组自噬相关蛋白LC3、Beclin1、P62的表达水平与对照组相比均明显升高,且差异具有统计学意义(P0.05)。结论 PBDE-47可诱导SH-SY5Y细胞自噬水平的增加。     

植物甾醇诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y 细胞凋亡机制初探

目的 初步探讨植物甾醇诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的可能作用机制。方法 用不同浓度(0,0.5,2.0,8.0 μmol/L)的植物甾醇与SH-SY5Y细胞共同培养,流式细胞术测定细胞周期,Western-blot检测凋亡相关蛋白Caspase-9、Caspase-3的前体及活化体(Pro-Caspase-9、Cleaved-Caspase-9、Pro-Caspase-3、Cleaved-Caspase-3)的表达。结果 不同浓度的植物甾醇可引起SH-SY5Y细胞不同程度的凋亡,并将细胞周期阻滞在G0/G1期,同时引起Caspase 相关蛋白的活化。当植物甾醇浓度为2.0μmol/L时,与空白对照组相比,G0/G1期细胞所占百分比从84.35%上升到88.14%,有显著统计学差异(F =25.790,P<0.001);Caspase-3,9 有活性剪切体明显增多,与空白对照组相比具有统计学差异(F=30.341,P<0.001,F=18.184,P=0.001)。结论 植物甾醇可引起SH-SY5Y细胞的凋亡,其机制可能与Caspase-9、Caspase-3的激活有关。     

PCB153对PBDE-47致SH-SY5Y细胞氧化应激和8-羟基脱氧鸟苷含量的影响

目的探讨PCB153和PBDE-47单独及联合染毒对SH-SY5Y细胞氧化应激及8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量的影响。方法设DMSO溶剂对照组,1、5、10μmol/LPBDE-47(低、中、高)单独染毒组和与5μmol/LPCB153联合染毒组及相应的抗氧化剂组(N-乙酰-L-半胱氨酸NAC100μmol/L),分别对SH-SY5Y细胞染毒24h。用荧光染料DCFH-DA标记法和高效液相色谱-电化学技术(HPLC-ECD)分别检测细胞内活性氧(ROS)水平和8-OHdG的含量。结果随着染毒剂量的增加,PBDE-47单独染毒组ROS水平有逐渐增高的趋势,但与对照组及其相应的PCB153联合组相比,ROS水平无明显差异(P>0.05)。中、高联合染毒组ROS水平与对照组相比显著增加(P<0.05),并显著高于相应的单独剂量染毒组(P<0.05),加入抗氧化剂后细胞内ROS水平明显下降(P<0.05),细胞内ROS水平与PBDE-47染毒剂量呈现剂量-效应关系;高剂量PBDE-47单独染毒组和中、高剂量联合染毒组8-OHdG的含量与对照组相比均有明显的增加(P<0.05),高剂量联合染毒组8-OHdG含量明显高于相应的单独染毒组(P<0.05),加入抗氧化剂后其细胞内8-OHdG含量明显下降(P<0.05)。细胞内ROS水平与8-OHdG含量呈正相关关系(r=0.895)。结论一定剂量的PBDE-47可致DNA氧化损伤,PCB153可增加PBDE-47对SH-SY5Y细胞DNA的氧化损伤作用,提示活性氧在PBDE-47致DNA损伤方面发挥了重要作用。     

重组腺病毒介导人野生型p53基因转染神经母细胞瘤细胞系的实验研究

目的 观察人野生型p53基因(wt-p53)转染对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响.结果 以携带绿色荧光蛋白的腺病毒质粒(Ad-GFP)转染SH-SY5Y细胞,通过流式细胞仪(FCM)判断转染效率.确定合适的感染倍数(MOI).分别以空病毒质粒(Ad)及携带wt-p53的腺病毒质粒(Ad-p53)转染SH-SY5Y细胞,即对照组和p53组;并以未转染的肿瘤细胞为空白对照(空白组).采用Western blot免疫印迹法检测p53蛋白的表达.观察转染前后细胞生长情况,绘制生长曲线,通过FCM分析细胞周期分布及细胞凋亡情况.结果 检测结果 表明腺病毒对SH-SY5Y细胞有较高的转染率,100MOI为合适的转染倍数.Ad-p53转染SH-SY5Y细胞后,wt-p53基因得到了高效表达.与空白组和对照组相比,p53组细胞生长曲线上升减缓,生长速度减慢,细胞凋亡增加,G1期细胞比例增加(P<0.01).结论 wt-p53基因转染可以有效抑制SH-SY5Y细胞的生长,这为p53基因修饰的肿瘤疫苗用于神经母细胞瘤的临床治疗提供了体外实验依据.     

LBH589对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y增殖和凋亡影响的研究

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂LBH589对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y增殖和凋亡的作用。方法将25、50、100nmol/L不同浓度的LBH589处理SH-SY5Y细胞24h后,通过WesternBlot法检测组蛋白H4乙酰化水平,进一步用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测SH-SY5Y细胞增殖能力;用流式细胞仪(FCM)分析细胞周期和凋亡。结果 LBH589处理SH-SY5Y细胞后,组蛋白H4的乙酰化水平增强;LBH589呈浓度依赖性抑制SH-SY5Y细胞增殖,增加G0/G1期细胞比例,降低S期细胞比例,增加AnnexinV阳性细胞百分数。结论 LBH589可增强组蛋白H4乙酰化水平,对SH-SY5Y细胞具有抑制增殖、G1期阻滞以及促凋亡作用,对人神经母细胞瘤有潜在治疗价值。     

沥青烟致肺损伤细胞凋亡及突变的实验研究

目的探讨沥青烟对肺组织的损伤机制,早期发现沥青烟致肺癌的预警指标。方法建立染毒小鼠模型,进行不同剂量（55、165mg／m^3）和不同时间（30d、60d）染毒,光镜下观察肺组织形态改变;采用免疫组化S-P法,进行p53、p21、eyelin D1染色,观察053、p21^WAF/CIPI和cyclin D1基因蛋白表达;采用流式细胞仪进行小鼠肺组织细胞DNA含量的检测和细胞周期分析。结果随着沥青烟染毒时间和剂量增加,小鼠肺组织表现为不同程度的不典型增生;小鼠肺组织p53基因蛋白在低剂量染毒30d组未见阳性表达,高剂量60d组呈强阳性表达（P〈0．01）。p21^WAF/CIPI基因蛋白表达在低剂量染毒30d组呈阳性表达,高剂量染毒60d组表达明显下调（P〈0．01）。eyclin D1基因蛋白表达同p53基因蛋白表达;小鼠肺组织细胞各周期指数均发生变化,G1期细胞数下降,S期阻滞,进入G2/M期的细胞减少,细胞增殖指数（PI）增加（P〈0．05）,异倍体指数（DI）升高（P〈0．05）,与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。相同染毒时间55mg/m^3剂量组和165mg／m^3剂量组的PI均高于对照组,相同染毒剂量下60d组D1随时间的增加而升高（P〈0．05）。结论沥青烟损伤肺组织影响细胞周期、S期DNA含量增加,细胞增殖能力增强,突变几率提高,可能与p53和cyelin D1基因蛋白表达增高及p21^WAF／CIPI基因蛋白的转录抑制相关。     

2,2'',4,4''-四溴联苯醚和2,2'',4,4'',5-五氯联苯联合作用的细胞遗传毒性

目的 研究2,2',4,4'-四溴联苯醚(2,2',4,4'-tetrabromodiphenyl ethers,PBDE-47)和2,2',4,4',5-五氯联苯(2,2',4,4',5-hexachlorobiphenyl,PCB153)联合作用的细胞遗传毒性.方法 体外培养的SH-SY5Y细胞暴露于2、4、8mol/LPBDE-47或(和)5mol/LPCB153 24 h后,采用噻唑盐(MTT)、单细胞凝胶电泳、胞质分裂阻滞以及SDS-KCl沉淀法分别检测细胞活力、DNA损伤、微核和DNA-蛋白交联(DPC)形成情况.结果 与单独PBDE-47染毒组比较,各联合染毒组核分裂指数(NDI)明显下降,微核率、微核细胞率和DPC明显增加,Olive尾矩增大,尾部DNA百分率升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).≥4 mol/L PBDE-47+5 mol/L PCB153联合染毒细胞存活率明显低于相应剂量的PBDE-47和PCB153单独染毒组,差异有统计学意义(P＜0.05).≥2mol/LPBDE-47+5mol/L PCB153联合染毒组微核率、微核细胞率、DPC均明显高于PCB153单独染毒组;≥4 mol/L PBDE-47+5 mol/L PCB153联合染毒组细胞NDI低于PCB153单独染毒组;Olive尾矩和尾部DNA百分率仅8 μmol/L PBDE-47+5μmol/LPCB153联合染毒组高于PCB153单独染毒组,差异均有统计学意义(P＜0.05).析因分析显示,两者在抑制细胞存活、诱导DNA损伤、微核和DPC形成等方面存在交互作用,差异有统计学意义(P＜0.01),表现为协同作用方式.结论 一定剂量的PBDE-47与PCB153联合可抑制细胞存活,诱导DNA损伤、微核和DPC形成,呈现细胞遗传毒性,两者联合作用类型为协同作用.     

甲基丙烯酸环氧丙酯对人支气管上皮细胞周期及凋亡影响的研究

目的探讨甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)对人支气管上皮细胞周期及凋亡的影响。方法人支气管上皮细胞(16HBE)经1~16μg/ml剂量的GMA染毒不同次数后,应用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期及凋亡率的改变,同时测定细胞分裂指数(MI)。结果经1次染毒处理后,随着染毒剂量的增加,G0/G1期细胞显著减少(P<0.01),S期和G2/M期细胞显著增加,凋亡细胞数增多,细胞分裂指数下降;随着染毒次数的增加,各剂量组细胞周期均明显阻滞于G0/G1期,但高剂量组细胞仍表现出S期和G2/M期增多现象;经3次染毒后,高剂量组细胞出现凋亡率下降、分裂指数升高现象。结论经GMA染毒处理后,16HBE细胞周期由G0/G1期向S期和G2/M期移动而呈现增殖性改变。