河蚬肉酶解产物解酒护肝功效

采用体外试验法测定河蚬肉酶解产物对乙醇脱氢酶(ADH)活性的影响,采用动物试验测定灌胃河蚬肉酶解产物后小鼠醉酒时间、醒酒时间、血液乙醇浓度的变化以及小鼠肝组织中丙二醛(MDA)、甘油三酯(TG)、谷胱甘肽(GSH)等相关生化指标评价其解酒护肝的功效。体外试验表明:河蚬肉酶解产物对ADH具有激活作用,激活率为52%。动物试验表明:河蚬肉酶解产物组与阴性组比较,可显著延长小鼠的醉酒时间和缩短醒酒时间,时间延长率为69.42%,缩短率为13.40%,且能显著降低小鼠血液乙醇浓度(P0.05)。此外,河蚬肉酶解产物能显著降低小鼠肝组织中的MDA、TG的含量(P0.05),减缓GSH的消耗(P0.05)。综上可知河蚬肉酶解产物具有解酒护肝的功效。     

麦胚蛋白双酶酶解物的制备及其体外醒酒活性的研究

为充分利用麦胚资源,制备具有醒酒作用的麦胚肽,本研究以Na_2CO_3预处理过的麦胚为原料,以肽得率(TCA-PSI)、水解度(DH)及乙醇脱氢酶(ADH)激活率为指标,研究了碱性蛋白酶(Alcalase)、中性蛋白酶(Neutral)双酶分步酶解工艺及酶解物的醒酒活性。结果表明,双酶分步酶解的最优工艺条件为麦胚蛋白质量分数为3.5%,Alcalase添加量4 000 U/g,Neutral添加量1000 U/g,所得酶解物的TCA-PSI、DH、ADH激活率分别为:75.49%、65.18%、68.37%。表明麦胚蛋白双酶酶解物可以显著提高ADH的活力,具有较好的体外醒酒活性。     

具有醒酒活性的玉米肽的制备、富集和鉴定

为制备具有高效醒酒活性的玉米肽,采用木瓜蛋白酶和胰酶复合酶酶解玉米黄粉。以蛋白质回收率和乙醇脱氢酶(ADH)激活率为指标,确定最佳的酶解工艺。结果:木瓜蛋白酶和胰酶复合酶的最佳酶解条件是:料液比1∶10,总加酶量2%,木瓜蛋白酶和胰酶质量比1∶1,酶解时间8 h。在此条件下蛋白质回收率为69.89%,ADH激活率为65.72%。为进一步分离富集具有高醒酒活性的成分,先用不同体积分数浓度的乙醇富集玉米肽中的醒酒成分,其中以80%乙醇的醇沉组分的ADH激活率最高(75.08%);再用葡聚糖凝胶G-15(Sephadex G-15)对80%乙醇的醇沉组分进行第2步分离,共获得4个组分,其中G4组分的ADH激活率高达90.12%。这2种分离方法高效富集了具有醒酒活性的玉米肽;最后用超高压液相色谱串联质谱(UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS)分离鉴定具有高效醒酒活性的肽段结构,共得6条肽段。这些肽段都含丙氨酸,其中3条肽段含有亮氨酸。由于这2种氨基酸有利于醒酒,所以这6条肽段具有醒酒活性。本研究结果为深入研发玉米醒酒肽提供了理论基础。     

玉米肽对小鼠酒后肝脏乙醇脱氢酶活力的影响及醒酒机理

为了研究玉米肽(CP)对大量摄入乙醇后小鼠的醒酒作用,采用气相色谱(GC)法测定小鼠血液中乙醇含量,NAD+法测定肝脏中乙醇脱氢酶(ADH)的活力,结合氨基酸分析,探讨其醒酒机理。结果显示：CP对肝脏中ADH有激活作用,且两者间存在明显剂量-效应关系,灌胃600mg/kg CP可极显著激活小鼠肝中ADH活性(P＜0.01),激活率达30.1%;并极显著抑制血清中乙醇含量的提高(P＜0.01),小鼠血清中乙醇含量的降低与CP间亦存在明显的剂量-效应关系。在小鼠灌胃乙醇后20～200min内,给CP组血醇清除率和ADH活力均明显高于乙醇模型组;在小鼠灌胃乙醇20～120min内,给CP组与模型组血醇清除率差异显著(P＜0.05或P＜0.01);在小鼠灌胃乙醇50～120min内,ADH活力差异显著(P＜0.05)。氨基酸分析表明,玉米肽具有较高的疏水性。用85%乙醇洗脱的疏水性最强的组分对羟自由基的抑制率最高,达83.05%。结论：玉米肽能激活ADH,且有良好的持续激活作用,其作用可能与玉米中疏水性短肽有关。     

玉米肽的醒酒活性体外试验及其醒酒机理研究

为研究玉米肽的醒酒机理,找到筛选高醒酒活性玉米肽的便捷的体外试验方法,考察了在体外试验中,玉米肽对乙醇脱氢酶(ADH)活力的影响及对羟基自由基(·OH)的清除作用,并与动物试验比较,结果显示三种方法基本吻合.玉米肽在体外试验中可激活ADH,具有良好地抑制·OH的能力,玉米肽中含有较高比例的丙氨酸、亮氨酸,尤其是亮氨酸.结论:可以通过测定玉米肽对ADH的激活率及对·OH的抑制率这两个体外试验,从不同蛋白酶酶解玉米肽及不同水解度的玉米肽中筛选出高醒酒活性肽.玉米肽的醒酒作用机制与其能激活ADH、清除·OH及其较高比例的丙氨酸、亮氨酸组成有关.     

黑豆多肽的制备及其对乙醇脱氢酶活性的 影响研究

目的制备黑豆多肽,研究其对乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH)活性的影响。方法采用碱性蛋白酶与胰蛋白酶分步水解法制备黑豆多肽。用截留分子量分别为5000、3500、2000、1000 Da的透析袋将黑豆多肽分离成4个相对分子量的肽段,对不同相对分子量的黑豆多肽进行抗氧化能力以及体外醒酒活性实验。结果黑豆多肽在碱性蛋白酶与胰蛋白酶分步水解后的水解度达35.64%。不同分子量的黑豆多肽均具有对乙醇脱氢酶的激活作用和对羟自由基(·OH)的清除能力,且都随着黑豆多肽相对分子质量的减小而增强。相对分子质量在1000 Da以下的黑豆多肽对乙醇脱氢酶的激活率和羟自由基(·OH)的清除能力最强,分别达22.43%和24.39%。结论黑豆多肽具有较强的乙醇脱氢酶激活率,并且与黑豆蛋白质和其他来源的多肽相比,相对分子质量在500~2000 Da的黑豆多肽中亮氨酸和丙氨酸的含量较多,因此推测黑豆多肽具有较好的醒酒效果。     

黑豆醒酒饮料的研制

采用甲醛滴定法,对中性蛋白酶、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶进行筛选,确定最佳酶解黑豆蛋白的酶.结果发现碱性蛋白酶酶解较果最好,且确定了碱性蛋白酶的最适宜酶解条件:时间为5h,温度为50℃,酶的添加量为1200U/g,pH值为9.后采用正交试验的方法,确定了黑豆醒酒饮料调配的最适宜比例:黑豆蛋白肽混合液70％,蜂蜜4g/150mL,白砂糖11g/150mL.最后,根据瓦勒-霍赫法对黑豆醒酒饮料进行体外试验,得出酶解后的黑豆蛋白肽能够激活乙醇脱氢酶(ADH),而ADH能够增强乙醇的代谢,从而降低人体中乙醇的浓度,测得本实验产品对ADH的激活率达到了31.98％.     

一种高纯度小分子解酒护肝肽的制备

目前海洋生物活性肽在功能食品中的应用已成为研究热点。针对中西药类解酒产品不足的问题，该研究制备了一种高纯度、高活性的小分子解酒护肝肽产品。采用多酶中度水解鱿鱼蛋白，以蛋白质回收率和乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase, ADH)激活率为指标。确定了最佳酶解条件为胃蛋白酶∶碱性蛋白酶∶风味蛋白酶=1∶1∶1(质量比),酶添加量为0.2%(质量分数)、料液比为1∶10(g∶mL)、反应时间3 h。在最佳酶解条件下的酶解液，其蛋白回收率为80.34%,ADH激活率为83.37%。为进一步提纯小肽并提升其功能活性，对酶解液进行精制工艺研究，采用树脂吸附疏水性肽组分，用梯度乙醇洗脱，收集液浓缩、干燥，获得淡黄色产品肽粉末。其蛋白肽纯度为95.33%,其分子质量<3 000 Da的占99.96%,对ADH的酶活率为122.71%,对DPPH自由基的清除率可达92.01%。该研究制备的小肽产品在功能食品领域具有广阔的应用前景。     

酶膜耦合连续法制备玉米肽解酒及防醉研究

为了考察酶膜耦合连续法制备的玉米肽(CP)在动物体内的解酒及防醉效果,并与间歇法制备的CP进行比较,采用小鼠模型分别进行翻正反射实验、解酒和防醉实验,并以市售海王金樽为阳性对照,观察小鼠的醉酒只数和醉酒时间,测定小鼠血清中乙醇体积分数及肝脏乙醇脱氢酶(ADH)的活力。结果表明：酶膜耦合连续法制备的CP能极显著地缩短小鼠醉酒时间及降低酒后血清中乙醇体积分数(P＜0.01),极显著激活其肝脏ADH活力(P＜0.01);各项数据均显示CP具有良好的解酒、防醉效果,连续法制备的CP其醒酒效果优于间歇法制备的CP;CP的摄入时间与饮酒时间间隔短是有利的;摄入300mg/kg(以体质量计)连续法制备的CP其解酒效果与摄入450mg/kg海王金樽相当。酶膜耦合连续法制备的CP是良好的醒酒物。     

超声波-复合酶耦合法制备花生粕抗氧化肽研究

以花生粕为原材料,花生粕抗氧化肽含量、DPPH自由基清除率为指标,研究不同酶解时间、超声处理时间、超声波功率、酶解温度等处理条件对花生粕抗氧化肽提取效果的影响。研究花生粕抗氧化肽对3种自由基的清除效果。试验结果表明:最佳提取条件为:底物浓度8%,超声波功率为150 W、超声处理时间5 min、酶解温度为45℃、酶解时间为1.5 h,此条件下花生粕抗氧化肽含量7.01 mg/mL,DPPH自由基清除率达到89.22%。超声波-复合酶耦合法制备的花生粕抗氧化肽对3种自由基均有较强的清除能力,且清除醇溶性自由基能力最强。     

玉米蛋白酶解物的解酒作用

采用碱性蛋白酶Alcalase和复合蛋白酶Protamex分步对膨化的玉米蛋白粉进行酶解改性,应用动物实验的方法研究玉米蛋白酶解物的解酒作用。结果表明：玉米蛋白酶解物中分子质量小于1 000 u的组分占87.76%,含有较高比例的谷氨酸、亮氨酸和丙氨酸;与酒精模型组相比,双酶酶解得到的玉米蛋白酶解物可使小鼠血液中乙醇含量降低59.43%;在一定时间范围内,玉米蛋白酶解物可以提高小鼠胃中乙醇脱氢酶和肝脏中超氧化物歧化酶活性,降低肝脏中丙二醛含量,增加谷胱甘肽含量。     

红曲霉发酵高温豆粕高产可溶性多肽

通过利用红曲霉发酵高温豆粕产生可溶性多肽,确定菌株对变性蛋白质有一定的分解作用;并采用紫外诱变红曲霉,经初筛和复筛,最终筛选出能高产可溶性多肽的菌株。结果表明：红曲霉发酵可分解高温豆粕中的蛋白质,并且产生分子质量介于7.8～20.1 kD的可溶性多肽。发酵120 h可产生（13.41±0.20） mg/mL的可溶性多肽,是原豆粕的3.60 倍。15 W紫外线灯35 cm处,搅拌条件下照射50 s,红曲霉的致死率为（82.70±2.20）%。在此诱变条件下得到一株高产可溶性多肽的突变红曲霉0501100菌株。该菌株在发酵豆粕96 h时产生的可溶性多肽含量达到（17.20±0.18） mg/mL,是原菌株在同等发酵时间条件下产生可溶性多肽的1.47 倍,是原豆粕的4.61 倍,缩短了发酵时间并且有较好的遗传稳定性。     

低温花生粕蛋白制备及其饮料稳定性分析

以低温花生粕为原料,利用碱溶酸沉法提取花生分离蛋白,继而制备花生蛋白饮料,考察自制花生蛋白饮料的稳定性,并研究其氮溶指数、乳化活性及乳化稳定性等功能特性。结果表明,最佳工艺条件为pH 9.5、碱提温度55℃、料液比1∶11(g/mL)、提取时间2.5 h,此条件下花生分离蛋白提取率可达90.25%。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示,其中包含花生蛋白所有特征条带。花生蛋白饮料的平均粒径(D[4,3])为4.31μm,稳定性分析仪测出粒子动态变化斜率(Slope)值为26.66%/h。低温花生粕制备的花生蛋白饮料具有良好的稳定性,这为花生粕高值化利用提供了新方向。     

健胃消食片原材料浸膏中多糖的理化性质及其胃排空功能

目的：研究健胃消食片原材料浸膏中多糖的理化性质及其胃排空功能。方法：采用水提醇沉法从健胃消食片浸膏中提取多糖JXP（得率5.44%）,通过比色法测定多糖化学成分,高效凝胶渗透色谱检测多糖纯度和相对分子质量,离子交换色谱分析单糖组成,以及利用红外光谱表征多糖红外特征,并进一步通过体内动物实验研究多糖对小鼠胃排空功能的影响。结果：健胃消食片原材料浸膏中多糖的中性糖含量为46.6%,糖醛酸含量为45.7%,蛋白质含量为1.3%。高效凝胶渗透色谱结果显示健胃消食片原材料浸膏中多糖相对分子质量集中在380 000左右。JXP主要由葡萄糖和半乳糖醛酸组成,两者物质的量比为1.2∶1,另含少量阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖和木糖。红外光谱图显示JXP含有羧基基团,为吡喃糖构型酸性多糖。胃排空实验发现健胃消食片原材料浸膏中多糖能显著促进小鼠胃排空,特别是当多糖作用剂量为100 mg/kg（以小鼠体质量计）时,效果最为明显。结论：健胃消食片原材料浸膏中多糖为酸性混合杂多糖,其对小鼠胃排空功能具有促进作用。     

醋蛋液的醒酒功效及其潜在醒酒功能因子研究

本研究利用小鼠醉酒模型,通过测定小鼠血液中乙醇含量、乙醇脱氢酶（ADH）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）的活力探究在不同灌胃剂量及不同灌胃时间下,醋蛋液的醒酒活性,并对醋蛋液进行结构鉴定,厘清醋蛋液发挥醒酒功能的活性因子。结果表明:酒后15 min灌胃54 mL/kg醋蛋液时,其醒酒效果最佳,血醇清除率为21.33%。同剂量下（54 mL/kg）与苹果醋、酸奶、“海王金樽”相比,发现灌胃醋蛋液的小鼠其血醇清除率高于其他对照组。灌胃醋蛋液小鼠的血清乙醇脱氢酶ADH活力显著高于模型组、酸奶组与“海王金樽”组（P<0.05）,而其肝脏中ALT、AST活力显著高于“海王金樽”组（P<0.05）。结构鉴定结果表明,醋蛋液的结构序列中含有较多的疏水性氨基酸如Leu、Phe、Ala等,且含有如Leu簇（Leu-Leu）等结构单元。醋蛋液能激活ADH发挥良好的醒酒活性,其作用可能与醋蛋液中含有较多的疏水性短肽和Leu簇短肽有关。     

正交试验优化哈蟆油蛋白双酶法水解工艺

目的：考察双酶法制备哈蟆油蛋白的最佳工艺。方法：以哈蟆油为原料,采用柠檬酸浸提和水煎煮的方法提取哈蟆油蛋白,先后加入胃蛋白酶和碱性蛋白酶进行酶解,根据酶解后哈蟆油蛋白相对分子质量分布,应用单因素和正交试验确定哈蟆油蛋白酶解的最佳条件。结果：最佳酶解条件为胃蛋白酶与底物比（m/m）1∶2 000、酶解时间2 h、碱性蛋白酶与底物比（m/m）1∶100、酶解时间6 h,酶解后哈蟆油蛋白相对分子质量小于5 000所占的比例为94.85%,哈蟆油蛋白中蛋白质含量为49.85%。结论：胃蛋白酶与碱性蛋白酶结合使用可以有效地降低哈蟆油蛋白的相对分子质量,利于人体吸收。     

鸡枞菌多糖对急性酒精肝损伤小鼠超微病理结构及ADH2、ALDH2 mRNA表达的影响

目的：从小鼠肝脏超微病理结构及酒精代谢相关酶乙醇脱氢酶2（alcohol dehydrogenase 2,ADH2）、乙醛脱氢酶2（aldehyde dehydrogenase 2,ALDH2）的mRNA表达方面研究鸡枞菌多糖（refined polysaccharidesfrom Termitomyces albuminosus,RPTA）对酒精所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法：小鼠被随机分为空白对照组、模型对照组、药物对照组（联苯双酯组,150 mg/（kg·d））、RPTA各剂量组（100、200、400 mg/（kg·d））,连续灌胃30 d,空白对照组灌胃等量生理盐水。第31天,给予50%乙醇（12 mL/kg）建立动物急性肝损伤模型。12 h后处死,取小鼠肝脏分别观察肝组织超微结构变化,并采用荧光实时定量聚合酶链式反应（real time polymerase chain reaction,real time-PCR）法检测肝脏ADH2和ALDH2的mRNA表达。结果：超微结构观察结果表明,模型对照组小鼠肝脏细胞内可见大量脂滴,细胞核呈不规则形态,局部核膜凹陷严重,线粒体严重变形,线粒体嵴模糊,内质网严重肿胀,核糖体脱落;而RPTA小鼠肝细胞内上述病变有所改善,尤以高剂量组最佳。Real time-PCR结果表明,与空白对照组相比,模型对照组ADH2和ALDH2的mRNA表达量降低,而RPTA组随着剂量的增加ADH2和ALDH2 mRNA的表达逐渐升高。结论：RPTA可以上调ADH2和ALDH2 mRNA的表达,具有改善小鼠酒精性肝损伤状况的作用。     

霍山石斛不同提取物抗小鼠亚急性酒精性肝损伤活性的比较研究

目的：比较霍山石斛不同提取物抗小鼠亚急性酒精性肝损伤的活性。方法：制备霍山石斛冷冻干燥物、水提物、水提醇溶物、水提醇沉物、水提粗多糖5 种提取物;以连续灌胃30%乙醇的小鼠为亚急性酒精性肝损伤模型,以霍山石斛不同提取物连续灌胃30 d后,称量小鼠体质量及肝质量,测定血清中谷丙转氨酶（alanineaminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性,以及总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（triglyceride,TG）、高密度脂蛋白胆固醇（highdensity lipoprotein cholesterol,HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）含量,同时测定肝脏中乙醇脱氢酶（alcohol dehydrogenase,ADH）、乙醛脱氢酶（acetaldehyde dehydrogenase,ALDH）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性,丙二醛（malondialdehyde,MDA）、谷胱甘肽（glutathione,GSH）水平,并检查肝组织损伤病理变化。结果：霍山石斛水提醇溶物抗亚急性酒精性肝损伤的活性最差,醇沉物、水提物、冷冻干燥物具有一定的肝损伤保护活性,水提粗多糖各个剂量组均可显著改善肝脏组织损伤和脂肪变性（P＜0.05）,降低血清ALT、AST、ALP活性和LDL-C、TC、TG水平,提高血清HDL-C含量,增强肝组织ADH、ALDH、SOD、GSH-Px活性,减少肝组织GSH损耗并抑制肝组织MDA含量增加。结论：多糖是霍山石斛抗小鼠亚急性酒精性肝损伤的功能因子。     

不同蛋白酶对小麦蛋白酶解物抗氧化活性的影响

小麦蛋白是小麦淀粉加工的副产物,酶解是提高小麦蛋白溶解性和功能性的有效方式,而酶解用酶种类可能对酶解产物的功能性如抗氧化活性有一定影响。采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶6种常用的蛋白酶分别对小麦蛋白进行酶解,并对酶解4 h后酶解物的多肽得率、分子质量分布、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率、超氧阴离子自由基(O_2~-·)清除率、羟自由基(·OH)清除率等反映水解程度和抗氧化能力的主要指标进行评价。结果表明,风味蛋白酶酶解物中多肽得率最高,达91.44%,且分子质量小于3 000 D的多肽含量达76.9%;酶解物质量浓度为3 mg/m L时,木瓜蛋白酶酶解物对DPPH自由基清除作用最好,清除率为65.12%(P0.01),其次是风味蛋白酶(58.43%)和碱性蛋白酶(55.29%);碱性蛋白酶酶解物对O_2~-·清除率效果最好,清除率为58.68%(P0.01),其次是风味蛋白酶(49.25%);碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解物对·OH清除效果最佳,清除率分别为59.23%和58.16%。结果说明,蛋白酶种类对小麦蛋白酶解物抗氧化活性影响显著,风味蛋白酶对提高蛋白水解程度和生成小分子质量多肽的作用明显,而碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶对提高酶解产物抗氧化活性效果较好。