实时荧光PCR技术定量检测转基因豆粉的研究

本实验以美国、阿根廷、巴西豆粉、中国豆粉和转基因大豆粉标准品为材料,利用设计的特异性引物和探针,建立了实时荧光定量PCR 技术检测抗草甘膦转基因豆粉的方法,成功检测出美国、阿根廷、巴西抗草甘膦转基因豆粉和中国豆粉的转基因含量分别为5.37%、3.96%、2.26% 和0,确定了荧光PCR 技术检测抗草甘膦转基因豆粉的灵敏度为0.001%,稳定性良好。     

抗草甘膦转基因豆粕PCR检测研究

以美国、阿根廷、印度和中国豆粕为材料,利用设计的特异性引物,建立了PCR技术定性检测抗草甘膦转基因豆粕的方法,成功检测出美国和阿根廷抗草甘膦转基因豆粕的内源参照基因Lectin、Ca MV35S/CTP ofEPSPS边界序列和NOS终止子;从印度豆粕、中国豆粕中仅检出内源参照基因Lectin,确定了PCR技术检测抗草甘膦转基因豆粕的灵敏度为0·5%,稳定性良好。     

ELISA方法定量检测转基因大豆及其产品的研究

以美国、阿根廷、巴西转基因大豆等为材料,建立了ELISA法定量检测抗草甘膦转基因大豆CP4 EP- SPS蛋白的方法,成功检测出美国转基因大豆含量为3.768%、阿根廷转基因大豆含量为2.820%、巴西转基因大含量为1.920%,转基因豆粉、转基因豆粕和中国大豆未检测到CP4 EPSPS蛋白。此方法具有简便、快速、稳定等优点,其检测灵敏度可达到0.0075%,并且稳定性良好,为抗草甘膦转基因大豆中CP4 EPSPS蛋白的定量检测提供了有效的手段。     

抗草甘膦转基因大豆加工品的PCR检测研究

以进口抗草甘膦转基因豆粕、豆粉和中国脱脂大豆为材料,利用设计的特殊引物,建立了PCR技术定性检测抗草甘膦转基因大豆加工品的方法,成功检测出进口抗草甘膦转基因豆粕和豆粉的内源参照基因Lectin、CaMV35S/CTP of EPSPS边界序列和NOS终止子,国产脱脂大豆仅检出内源参照基因Lectin,确定了此PCR技术检测抗草甘膦转基因大豆的灵敏度为0.1%,稳定性良好.     

发酵豆制品中转基因成分的荧光定量PCR研究

以FAM和BHQ1两种荧光素分别标记为报告染料和淬灭染料,建立了转基因发酵豆制品中抗草甘膦转基因EPSPS、大豆凝集素Lectin基因的Taqman荧光PCR定量检测体系,检测灵敏度为0.1%,重现性良好,特异性强,可作为发酵豆制品转基因成分定量检测的供选方法。在霉千张和臭腐乳(青方乳)等发酵豆制品中检出抗草甘膦转基因成分。     

北极苹果结构特异性实时荧光聚合酶链式反应检测方法建立

目的为实现转基因北极苹果(Arctic~(TM) apple)目的标识管理,建立特异性实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。方法针对转基因北极苹果特异性序列设计引物和TaqMan探针,建立转基因北极苹果实时荧光PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行检测。结果建立的转基因北极苹果实时荧光PCR特异性强,定量检测限为20拷贝,扩增效率为96%,检测重复性良好。结论建立的特异性实时荧光PCR法可应用于转基因北极苹果的鉴定。     

饲料中的转基因成分在家禽体内代谢残留的研究

用含20%抗草甘膦转基因豆粕的饲料喂养蛋鸡、番鸭,通过检测其内脏、肌肉、血液、粪便及肠道微生物的豆粕转基因成分,探讨饲料中转基因成分在家禽体内的代谢残留状况。以定性PCR检测含20%转基因豆粕的饲料及蛋鸡、番鸭的八种内脏样品(肠、胰腺、食道、肝、腺胃、肾、心脏、肌胃)、肌肉、血液、蛋品、粪便、肠道微生物的转基因豆粕的工具基因CaMV35S启动子与NOS终止子以及目的基因CP4-EPSPS等外源基因成分。PCR检测结果表明:除了含20%转基因豆粕的饲料外,蛋鸡、番鸭的八种内脏器官、肌肉、血液、蛋品、粪便及肠道微生物中均未检出转基因豆粕的CaMV35S、NOS、CP4-EPSPS等外源基因成分。检测结果表明:长期喂养含20%转基因豆粕饲料的蛋鸡、番鸭的八种内脏器官、肌肉、血液、蛋品、粪便及肠道微生物中均未发现有转基因成分残留,说明饲料中的转基因成分,通过肠胃消化后充分降解,不会在鸡、鸭体内残留,也不会通过粪便排泄而扩散到土壤环境中。     

转基因鲑鱼AquAdvantage品系特异性实时荧光聚合酶链式反应检测方法的建立

目的实现转基因鲑鱼AquAdvantage的标识管理,建立其品系特异性实时荧光聚合酶链式反应(PCR)检测方法。方法针对转基因鲑鱼的品系特异性序列设计引物和TaqMan探针,建立转基因鲑鱼实时荧光PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行检测。结果建立的转基因鲑鱼实时荧光PCR方法特异性强,在600 000~60拷贝范围内呈良好的线性关系,其线性回归方程为y=-3.2194x+40.805,R~2=0.997,检测限为60拷贝,检测重复性良好。结论建立的品系特异性实时荧光PCR方法可应用于转基因鲑鱼AquAdvantage的鉴定。     

荧光PCR和数字PCR法检测转基因DAS-44406-6品系大豆

目的：建立实时荧光聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）检测转基因DAS-44406-6品系大豆的定性检测方法和使用数字PCR检测转基因DAS-44406-6品系大豆的定量检测方法。方法：针对转基因DAS-44406-6大豆品系,进行5’-RACE,测定该品系转基因大豆外源片段与大豆染色体重组的边界序列,并根据该边界序列设计引物和探针。使用23 种非DAS-44406-6品系转基因植物作为阴性对照测试实时荧光PCR引物和探针的特异性,以DAS-44406-6品系样品制备6 个含量梯度的样品进行检测低限实验。使用数字PCR技术进行定量检测,并确定定量检测的低限。结果：建立的转基因DAS-44406-6大豆品系的实时荧光PCR特异性检测方法品系鉴定特异性较强,实时荧光PCR检测方法的检测低限在模板DNA浓度为100 ng/反应时,为0.01%的转基因大豆含量,约为16.6 个拷贝的DAS-44406-6基因组DNA;数字PCR检测方法的检测低限在模板DNA浓度为0.5 ng/反应、转基因大豆含量为1%时,相对标准偏差为0.7%。因此,建立的转基因DAS-44406-6大豆品系实时荧光PCR和数字PCR特异性检测方法符合转基因检测的要求。     

转基因大豆MON89788实时荧光PCR检测方法的建立

为实现转基因大豆MON89788的标识管理,针对转基因大豆MON89788的品系特异性序列设计引物和TaqMan探针,建立转基因大豆MON89788实时荧光聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行检测。结果显示：建立的转基因大豆MON89788实时荧光PCR检测方法能扩增出127 bp的产物,特异性强,灵敏度达到0.1%,约为40 个单倍体基因组拷贝,检测重复性好,可成功应用于实际样品检测。因此,建立的转基因大豆MON89788实时荧光PCR检测方法可以应用于转基因大豆MON89788大豆及其制品的检测。     

转基因番茄DNA检测芯片的研究

自19世纪70年代世界上第一例转基因植物问世以来，它对人类健康及环境的安全性问题，受到了全世界广泛的关注：本研究根据转基因番茄（Zeneea）中所转入的外源基因，选择CaMV35S启动子、NOS终止子、PG／NOS基因和内源PG基因设计特异性引物，采用多重PCR法对待测样品进行扩增，通过缺口平移法合成DIG—dUTP标记杂交探针，并制备基因芯片。在对PCR反应和扩增产物与芯片杂交条件进行优化的同时，比较了芯片检测的特异性和重复性，并对检测的灵敏度进行测试。结果表明，该方法具有较好的特异性和重复性，检测灵敏度可达0．5％，由于采用了多重PCR技术一次可同时检测多个基因，提高了检测的；隹确性和效率。     

大豆加工食品中转基因成分多重PCR检测体系的建立

以大豆内源基因 (Lectin)、筛选基因 3 5S启动子 (Cauliflowermosaicvirus 3 5S ,CaMV3 5S)、Nos终止子 (Nopalinesynthase,Nos)和外源基因 (5 enolpyruvylshikimate 3 phosphatesynthase ,Ep sps)为检测对象 ,通过对PCR扩增体系中各引物终浓度及PCR扩增过程中退火温度的探讨 ,研究了不同引物终浓度配比及退火温度对转基因大豆多重PCR检测的影响 ,建立了大豆加工食品中转基因成分多重PCR检测体系。结果表明 ,当各组引物的终浓度分别为 1 0、2 0、2 0、3 0 μmol/L即引物终浓度配比为 1∶2∶2∶3 ,退火温度为 5 5 4℃时 ,所建立的多重PCR检测方法能够有效地检测出大豆中的转基因成分 ,具有特异性好 ,简便 ,快速 ,准确等优点。     

PCR技术检测GMO酿造原料和啤酒的试验

利用PCR技术检测经遗传修饰的GMO啤酒原料、辅料和生产的啤酒，作为控制采购大麦、玉米、糖浆质量的手段，以监控啤酒生产的生物安全性。     

Effect of Ionizing Radiation on the Quantification of Genetically Modified Foods

The rapid spread of Genetically Modified (GM) crops globally and the mandatory labeling of GM food and feed imposed by many countries has led to the development of relevant detection techniques. Polymerase Chain Reaction (PCR) – based methods are presently the most effective and reliable for GM detection even in processed food products. This study evaluated the effect of electron beam irradiation, used for food pasteurization, on the detection and quantification of dry GM soyabean and maize products; qualitative and quantitative (real-time TaqMan^TM probe) PCR analysis showed that electron beam irradiation treatment, even at a high dose (10 kGy), did not affect the traceability of transgenes.     

多重PCR同时检测常见8种食物过敏原

依据大豆Lectin基因,小麦Gliadin基因,花生Arah3基因,腰果Ana o3基因,鱼和虾16S rRNA,牛和鸡线粒体DNA设计特异性引物序列.在单一PCR方法基础上,建立2种4重PCR方法检测8种食物过敏原的技术.该方法检测周期短,具有较好的特异性和灵敏性,可用于对食品中多种食物过敏原的检测和监控.     

环介导等温扩增技术快速检测植物蛋白饮料中大豆成分

目的 建立植物蛋白饮料中大豆成分环介导等温扩增（Loop-mediated isothermal amplificantion,LAMP）快速检测技术方法。方法 根据大豆Lectin基因保守序列,设计大豆成分环介导等温扩增检测特异性引物和反应体系,对方法特异性、灵敏度和稳定性进行测试,并以实时荧光PCR方法为参比方法,对32种植物蛋白饮料进行检测应用验证。结果 本研究建立的LAMP方法特异性强,稳定性好,最低检出限为0.1%（以质量分数计）;通过参比方法验证,方法特异性和灵敏度为100%,不存在假阳性和假阴性。结论 本研究建立的LAMP技术快速检测植物蛋白饮料大豆成分的方法具有操作简单、快速准确、检测成本低等优点,可为植物蛋白饮料大豆成分掺杂掺假提供一种快速检测方法。