食源性多酚对α-淀粉酶作用大米淀粉活性的影响

为探究不同种类多酚在以大米淀粉为底物对淀粉酶的抑制特性，通过建立抑制动力学体系探究阿魏酸、没食子酸、芦丁3种食源性多酚对α-淀粉酶活性的抑制类型和抑制效果，并绘制相应曲线图。结果表明，随着食源性多酚浓度的增加，食源性多酚对α-淀粉酶的抑制效果越强，且其抑制效果按照芦丁、没食子酸、阿魏酸的顺序依次减弱，其半抑制质量浓度IC₅₀分别为6.53、11.87、15.38 mg/mL。通过对Lineweaver-Burk双倒数曲线等图形进行分析可以判断阿魏酸、芦丁对α-淀粉酶的抑制类型为竞争性和非竞争性混合抑制，没食子酸对α-淀粉酶的抑制类型为非竞争性和反竞争性混合抑制，根据曲线图分析并求得3种食源性多酚的抑制常数K_ic与K_iu。食源性多酚能够有效抑制淀粉酶酶解。     

几种多酚化合物对H2O2和CCl4诱导人肝细胞损伤的保护

以α- 生育酚作为对照,研究茶多酚、没食子酸、槲皮素、山奈素、芹菜素五种多酚化合物对H2O2 和CCl4 诱导的人肝细胞损伤的保护作用。结果表明,不同浓度的多酚化合物(5、10、20 mg/L)与肝细胞预先作用1h,再进行诱导损伤,可以提高肝细胞的细胞活率和还原型谷胱甘肽(GSH)含量水平,降低乳酸脱氢酶(LDH)渗出率和丙二醛(MDA)生成量。显示它们对H2O2 和CCl4 诱导的肝细胞损伤有保护作用,保护能力大小顺序为没食子酸>槲皮素>茶多酚>芹菜素>α- 生育酚>山奈素。其保护作用可能与多酚化合物具有较强的清除自由基能力有关。     

8种单体多酚对葡萄酒微生物的抑菌活性比较

酚类化合物不仅能赋予葡萄酒丰富的色泽、风味和抗氧化活性,还能抑制葡萄酒微生物的生长。为了比较不同多酚化合物抑菌能力的大小,用牛津杯测试法研究了不同质量浓度(2、5、10 g/L)单体多酚(儿茶素、表儿茶素、没食子酸、表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)、鞣花酸、杨梅酮、槲皮素和山奈酚)对引起葡萄酒病害的代表菌种:乳酸菌、醋酸菌和酵母菌的抑制作用。结果表明:在8种供试多酚中,杨梅酮、槲皮素和EGCG抑菌能力相对较强;黄烷-3-醇类化合物对醋酸菌和酵母菌的抑制能力比乳酸菌更强,没食子酸则恰好相反;山奈酚对所有供试菌株都没有抑菌能力。多酚能在一定程度上抑制葡萄酒微生物的生长繁殖。     

应用前沿亲和色谱评价5 种知母糖苷类化合物的α-淀粉酶抑制活性

以硅胶为载体,制备α-淀粉酶亲和色谱柱,以线扫循环伏安法为检测方法,评价知母提取物的α-淀粉酶抑制活性。首先考察固定化条件对固定化酶的影响以及亲和色谱柱的稳定性。其次利用前沿亲和色谱检测5 种知母糖苷类化合物（新芒果苷、芒果苷、知母皂苷AⅡ、知母皂苷BⅡ、知母皂苷BⅢ）的α-淀粉酶亲和力。最后检测化合物的α-淀粉酶抑制活性。结果表明5 种化合物的α-淀粉酶结合力大小排序为：新芒果苷（Kd＝0.230 5 μmol/L）＞芒果苷（Kd＝0.299 5 μmol/L）＞知母皂苷BⅡ（Kd＝0.312 4 μmol/L）＞知母皂苷BⅢ （Kd＝0.316 2 μmol/L）＞知母皂苷AⅡ（Kd＝0.453 3 μmol/L）,其排序结果与样品的α-淀粉酶抑制活性一致。说明前沿亲和色谱可以用来定量检测化合物的α-淀粉酶抑制活性,且可根据亲和力的大小将化合物的抑制活性进行排序。     

pH和缓冲体系对植物多酚抑制脂氧合酶活性的影响

为优化紫外分光光度法测定多酚抑制脂氧合酶(LOX)活性的方法,探究缓冲体系及pH的选取对LOX酶活力的影响和多酚自氧化作用,研究了不同缓冲溶液体系及pH条件下,LOX酶活力的变化及没食子酸、槲皮素、儿茶素、3,4-二羟基苯乙酸的自氧化情况。结果发现,LOX在碱性条件下活性较强,4种多酚在硼酸盐体系中自氧化最弱,在Tris-HCl体系中自氧化最强;且各体系中pH越高4种多酚自氧化作用越强,紫外光谱中反映的自氧化中间产物和终产物越多。最终确定pH 7.5的硼酸盐缓冲液作为检测缓冲体系。分析4种多酚对LOX酶活性的影响,发现随着多酚浓度的增大,LOX酶活性呈先下降后上升的趋势,4种多酚对LOX酶活的抑制效果依次为:槲皮素>儿茶素>没食子酸>3,4-二羟基苯乙酸。     

多穗柯三叶苷的抑制糖尿病关键酶活性和抗氧化性

从多穗柯中提取分离得到三叶苷,以抗糖尿病药物阿卡波糖为阳性对照,检测多穗柯三叶苷对小肠α-葡萄糖苷酶和胰脏α-淀粉酶活性的抑制作用和对α-葡萄糖苷酶活性抑制类型,并以芦丁为阳性对照检测其清除DPPH自由基能力。结果显示：多穗柯三叶苷对α-葡萄糖苷酶有明显抑制作用,为非竞争性抑制,抑制效果与阿卡波糖无明显差别,对α-淀粉酶活性的抑制率低于阿卡波糖;清除DPPH自由基能力强于芦丁。表明多穗柯三叶苷是一种有应用潜力的抗糖尿病活性物质。     

没食子酸对猪胰α-淀粉酶和蛋白酶的抑制作用

以没食子酸为材料,通过考察酶质量浓度、反应体系中底物和酶及没食子酸添加顺序、不同反应时间、不同没食子酸质量浓度对猪胰α-淀粉酶、蛋白酶的活性影响,研究没食子酸对两种酶的抑制作用。结果表明,在底物质量浓度为1g/100mL、体系添加顺序为酶液与抑制剂没食子酸溶液37℃预温5min后加入底物溶液的条件下,没食子酸抑制猪胰α-淀粉酶活性最优条件为:α-淀粉酶质量浓度0.64mg/mL,反应时间15min,没食子酸对α-淀粉酶的最大抑制率为95.52%;在体系添加顺序为酶液与抑制剂没食子酸溶液40℃预温5min后加入底物溶液的条件下,没食子酸抑制猪胰蛋白酶活性的最优条件为:胰蛋白酶质量浓度0.63mg/mL,反应时间30min,没食子酸对胰蛋白酶的最大抑制率为99.24%。没食子酸对两种酶的抑制效果均随没食子酸质量浓度的增大而增强。     

香椿叶多酚的提取分离及其体外对糖尿病关键酶活性的抑制作用

本研究从香椿叶中提取分离多酚,研究多酚对糖尿病关键酶(猪胰腺α-淀粉酶、鼠小肠蔗糖酶和麦芽糖酶)活性的影响。采用活性追踪法,运用多种分离纯化技术和色谱学分析,逐级筛选活性强的部位以及单体化合物。研究发现香椿叶多酚粗提物具有显著的酶抑制作用,猪胰腺α-淀粉酶、鼠小肠蔗糖酶和麦芽糖酶的半数抑制率(IC50)值分别为0.45 mg/mL、1.29 mg/mL和1.41 mg/mL。乙酸乙酯萃取后的70%乙醇洗脱部位为主要活性部位,其对猪胰腺α-淀粉酶、鼠小肠蔗糖酶和麦芽糖酶抑制作用的IC50值分别为0.091mg/mL、0.97 mg/mL和1.00 mg/mL。从活性部位分离出2个单体化合物,分别鉴定为:1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖(PGG)和没食子酸乙酯(EG),其中PGG具有显著的α-淀粉酶抑制活性,IC50值为0.069 mg/mL;EG对蔗糖酶和麦芽糖酶具有一定的抑制活性,IC50值分别0.82 mg/mL和0.81 mg/mL。研究表明多酚化合物是香椿叶的有效降血糖功能成分之一,PGG和EG是主要的活性成分。     

海洋低温α-淀粉酶菌株Bacillus thuringiensis dsh 19-1发酵条件研究

α-淀粉酶是催化淀粉水解的酶类,其广泛应用于食品、医学等领域。该研究利用响应面法设计试验,优化了海洋低温α-淀粉酶菌株Bacillus thuringiensis dsh 19-1的发酵条件。其最佳发酵条件为发酵时间42.4 h,发酵温度20.6 ℃,接种量4.1%。在上述优化条件下α-淀粉酶酶活可达3.06 U/mL,较优化前提高17.69%。     

高温条件下多酚对茶油挥发性成分的影响

研究加热过程中多酚对茶油挥发性成分的影响,选取茶油和5组添加了0.02%多酚的茶油(没食子酸、儿茶素、槲皮素、没食子酸丙酯、3,4-二羟基苯乙酸)为材料,采用顶空固相萃取-气质联用法(HS-SPME-GC-MS)对6组样品在180℃下加热不同时间后挥发性风味成分进行分析。结果表明,在加热过程中添加多酚减缓了茶油挥发物数量的降低,但能抑制挥发物总量的生成;对挥发性物质种类的影响而言,添加多酚能有效减缓正构醛含量的减少,但对不饱和醛和其他不良挥发性成分如挥发性短链脂肪酸的生成具有抑制作用。因此,添加多酚能使高温下茶油的风味有所改善。     

苦丁冬青苦丁茶咖啡酰奎尼酸类物质与α-淀粉酶的相互作用特性

探讨苦丁冬青苦丁茶中咖啡酰奎尼酸(caffeoylquinic acids,CQA):3-CQA、4-CQA、5-CQA、3,4-di CQA、3,5-di CQA和4,5-di CQA对α-淀粉酶的体外抑制活性,并采用荧光光谱法和圆二色谱法分析CQA与α-淀粉酶的相互作用特性,使用修正后的Stern-Volmer方程与van’t Hoff方程探讨CQA-酶之间的结合常数、结合位点数及热力学参数。结果表明:3-CQA、4-CQA、5-CQA、3,4-di CQA、3,5-di CQA和4,5-di CQA对α-淀粉酶均有较强的抑制作用,半抑制浓度(IC_(50))分别为1.54、1.05、1.28、0.96、0.33、0.64 mg/m L;CQA与α-淀粉酶发生结合反应,生成稳定的复合物,从而造成酶分子内部荧光发生猝灭;热力学参数分析表明CQA与α-淀粉酶主要靠疏水作用力结合,反应自发进行。此外,圆二色谱结果显示CQA的结合引起α-淀粉酶二级结构的变化,破坏了酶蛋白的天然构象,从而降低了酶的催化活性。     

超微粉碎对香菇多酚组成及抗氧化活性的影响

将鲜香菇分为伞、柄后进行适当干燥,利用超微粉碎得到不同粒径的香菇伞粉和香菇柄粉,比较气流超微粉碎和纳米超微粉碎与普通粉碎处理在香菇伞粉和柄粉多酚溶出率、组成及抗氧化活性之间的差异。结果表明：与普通粉碎相比,超微粉碎可以使香菇伞粉总酚溶出率提高13%;通过高效液相色谱（high performanceliquid chromatography,HPLC）检测分析,香菇多酚类物质主要为没食子酸、儿茶素、咖啡酸、芦丁、阿魏酸和槲皮素,其中游离酚以没食子酸和儿茶素为主,结合酚以没食子酸、儿茶素和槲皮素为主。抗氧化能力评价中,气流超微粉碎能明显改善香菇多酚的还原力、2,2’-联氨-双-（3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸）二氨盐（2,2’-azino-bis（3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid）,ABTS）自由基清除力和总氧自由基吸收能力（oxygen radical absorbancecapacity,ORAC）;纳米超微粉碎能够提高柄粉多酚的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除力。超微粉碎能够提高香菇多酚的溶出率及抗氧化活性,可以作为以香菇为原料开发功能性食品的一种前处理加工手段。     

具有α-淀粉酶抑制活性的白芸豆多肽的制备及其热稳定性研究

以白芸豆为原料,酶法制备多肽。以α-淀粉酶抑制率为指标,比较酸性、中性和碱性蛋白酶的酶解效果。结果表明:3.350酸性蛋白酶的酶解效果最好。通过加酶量、酶解p H值、酶解温度和酶解时间的单因素试验和正交试验,得到制备白芸豆多肽的最佳工艺条件为:加酶量3 200 U/g、酶解p H 2.2、酶解温度55℃、酶解时间60 min,此条件下白芸豆多肽α-淀粉酶抑制率为80.82%。热稳定性研究表明,白芸豆多肽的热稳定性高于α-淀粉酶抑制剂(α-amylase inhibitor,α-AI)粗提液,该多肽在85、90℃条件下的α-淀粉酶抑制活性能保持更长时间。凝胶电泳分析表明白芸豆多肽的分子质量为7.53~9.09 ku。     

蛇含委陵菜总黄酮的体外和体内降血糖效果研究

目的：探讨蛇含委陵菜总黄酮（total flavonoid Potentilla kleiniana Wight et Arn.,TFP）的体外和体内降血糖效果。方法：TFP是利用超声波循环提取及D-101大孔树脂纯化得到。体外降血糖效果主要考察TFP对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶以及对氧化自由基吸收能力（oxygen radical absorption capacity,ORAC）的抑制影响,体内降血糖效果是利用链脲佐菌素诱导小鼠糖尿病模型,100、200、400 mg/（kg·d）的不同剂量治疗4 周,每周末尾部动脉取血测定血糖,4 周后眼眶取血测定血清胰岛素,处死取肝脏测定肝糖原和丙酮酸激酶的含量。结果：体外降血糖效果发现,TFP对α-葡萄糖苷酶具有较强的抑制活性并且体现剂量依赖性,而对α-淀粉酶的抑制活性不高,对ORAC的抑制活性较高,而体内降血糖效果发现,TFP不同剂量对糖尿病小鼠具有很好的降血糖效果,特别是400 mg/（kg·d）的剂量组降血糖效果非常明显,血清胰岛素的含量得到明显提高,另发现,TFP有利于丙酮酸激酶的分泌,从而促使肝糖原的合成,使得肝糖原的含量经过治疗后含量增加。结论：蛇含委陵菜总黄酮是一种具有很大潜力的降血糖和抗氧化的天然产物。     

乌龙茶粗多酚、EGCG和EGCG3’’Me体外抑制α-葡萄糖苷酶活性

为研究乌龙茶粗多酚、表没食子儿茶素没食子酸酯((-)-epigallocatechin gallate,EGCG)、甲基化EGCG(epigallocatechin3-O-(3-O-methyl)gallate,EGCG3’’Me)对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用,采用酶动力学和紫外吸收光谱方法,探究并比较了三者的抑制活性及类型。结果表明:乌龙茶粗多酚、EGCG和EGCG3’’Me对α-葡萄糖苷酶均有较强的抑制作用,半抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)依次为0.178、0.040、0.064 mg/m L;Lineweaver-Burk双倒数作图显示乌龙茶粗多酚和EGCG的抑制类型为非竞争抑制,而EGCG3’’Me为竞争性抑制;紫外吸收光谱实验表明乌龙茶多酚样品能够使α-葡萄糖苷酶的吸收光谱发生蓝移,推测酶蛋白的构象有所变化。EGCG与EGCG3’’Me对α-葡萄糖苷酶活性的影响和抑制类型的不同可能是由于EGCG的一个羟基被甲氧基取代所引起的。     

α-淀粉酶在不同地衣芽孢杆菌宿主菌中分泌表达的对比分析

研究不同地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)宿主菌对α-淀粉酶分泌表达的影响。以Bacillus subtilis的P43启动子,B.licheniformis WX-02α-淀粉酶基因的信号肽、编码区和终止子序列为表达原件,构建了α-淀粉酶分泌表达载体pP43SAT。将pP43SAT分别转入3株B.licheniformis宿主菌:WX-02(ΔamyL)、BL9和BL10,获得3株α-淀粉酶基因工程菌WX-02(ΔamyL,pP43SAT)、BL9(pP43SAT)和BL10(pP43SAT),并将构建的3株工程菌进行发酵对比分析。BL9(pP43SAT)和BL10(pP43SAT)的淀粉酶发酵活力分别达到94.01 U/mL和101.94 U/mL,比原始宿主菌WX-02(ΔamyL,pP43SAT)分别提高了21%和31%,这说明BL9和BL10新型宿主菌有利于淀粉酶的分泌表达。本研究证明多蛋白酶基因缺失可显著提高α-淀粉酶的表达,为α-淀粉酶的高效表达提供了新型宿主菌和新策略。     

槲皮素与葛根素对食品体系中非酶糖基化的抑制作用

通过对果糖胺、二羰基化合物、5-羟甲基糠醛（5-hydroxymethylfurfural,5-HMF）和荧光性末端产物的检测,考察槲皮素和葛根素对食品体系非酶糖基化反应的抑制作用。结果表明：槲皮素能促进非酶糖基化早期产物果糖胺和5-HMF的生成,对反应中期的二羰基化合物和非酶糖基化末端产物（advanced glycation end products,AGEs）具有较强的抑制作用;葛根素能促进果糖胺的生成,抑制二羰基化合物的生成,对5-HMF和AGEs无影响。这可能与槲皮素与葛根素的结构差异有关。