放疗后早期肿瘤组织内^99Tc^m-rh-Annexin V分布与Survivin、Caspase-3蛋白表达的相关性研究

采用^99Tc^m-rh-Annexin V作为凋亡显像示踪剂,观察小鼠放疗后早期肿瘤组织内Survivin、Caspase-3蛋白表达。结果显示,放疗组肿瘤组织内^99Tc^m-rh-Annexin V分布、TUNEL检测阳性细胞数及Caspase-3蛋白表达均明显多于对照组,Survivin蛋白表达A组明显高于B组,差异均存在显著性（P均＜0．01）。相关性研究表明,肿瘤组织的放射性摄取与TUNEL阳性细胞数呈明显正相关（r=0．942,P=0．000）;肿瘤组织内Survivin蛋白表达与Caspase-3蛋白表达呈明显负相关（r=-0．836,P=0．000）。肿瘤组织内^99Tc^m-Annex-inV分布与Caspase-3蛋白表达呈明显正相关（r=0．948,P=0．000）,与Survivin蛋白表达呈明显负相关（r=-0．819,P〈0．01）。以上结果提示,肿瘤组织内^99Tcm—rh—Annexin V的分布可以反映放疗后早期肿瘤组织细胞凋亡的状况以及凋亡调控蛋白Survivin、Caspase-3表达水平的变化。     

单次化疗后肿瘤内~(99)Tc~m-Annexin Ⅴ的分布与bcl-2、bax蛋白表达的相关性研究

采用99Tcm-rh-Annexin Ⅴ作为核素凋亡显像示踪剂,观察小鼠单次化疗后肿瘤内bcl-2与bax蛋白的表达。结果显示,单次化疗后化疗组肿瘤组织的放射性摄取百分数(%/g)、阳性细胞数及bax蛋白表达均明显多于对照组(P<0.01);bcl-2蛋白表达两组间差异无显著性(P=0.220);化疗组bcl-2/bax明显高于对照组(P<0.01)。相关性研究表明,对照组与化疗组肿瘤组织的放射性摄取百分数与TUNEL阳性细胞数均呈明显正相关(r=0.801,r=0.769)。对照组肿瘤组织内bax蛋白表达与放射性摄取及TUNEL阳性细胞数均呈明显正相关(r=0.849、0.652),bcl-2/bax比值与放射性摄取百分数及TUNEL阳性细胞数均呈明显负相关(r=-0.820、-0.694)。以上结果提示,肿瘤组织内99Tcm-rh-Annexin Ⅴ的分布可以反映化疗后早期肿瘤组织细胞凋亡的状况以及凋亡调控蛋白bax表达水平的变化。     

单次化疗后肿瘤内99Tcm-Annexin Ⅴ的分布与bcl-2、bax

目的 评价应用99Tcm-rh-AnnexinⅤ显像检测单次化疗后肿瘤细胞凋亡的可行性，并探讨其在肿瘤组织内的分布与凋亡调控蛋白bcl-2、bax表达的相关性。方法 采用直接标记法标记rh-AnnexinⅤ作为核素凋亡显像示踪剂。将小鼠肝癌细胞（Hca-F25）接种于小鼠右腋下部位；随机分为A（n=9，对照组）、B（n=10，化疗组）两组，8d后肿瘤生长至直径约1cm时，B组一次性接受环磷酰胺（cyclophosphamide）腹腔内注射，剂量为150mg/kg；20h后两组同时由鼠尾静脉注入99Tcm-rh-AnnexinⅤ；4h后行SPECT显像并处死、取材，应用井型闪烁探测器检测荷瘤小鼠肿瘤组织内示踪剂分布，以%ID/g（每克组织百分注射剂量率）表示。采用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡；采用采用免疫组化SP法检测标本中bcl-2、bax蛋白表达。结果 单次化疗后B组肿瘤组织的%ID/g、TUNEL检测阳性细胞数及bax蛋白表达均明显多于A组（P<0.01）；bcl-2蛋白表达A、B两组间差异无显著性（P＝0.220）；A组bcl-2/bax明显高于B组（P<0.01）。相关性研究表明，在A、B组中肿瘤组织的%ID/g与TUNEL阳性细胞数均呈明显正相关（r=0.801，r=0.769），而bcl-2蛋白表达与bax蛋白表达间无明确相关性；A组肿瘤组织内bcl-2、bax蛋白表达与肿瘤组织的%ID/g及TUNEL阳性细胞数均无明确相关性；B组肿瘤组织内，bcl-2蛋白表达与%ID/g及TUNEL阳性细胞数均无明确相关性，bax蛋白表达与%ID/g及TUNEL阳性细胞数均呈明显正相关（r＝0.849、0.652），而bcl-2／bax比值与%ID/g及TUNEL阳性细胞数均呈明显负相关（r＝－0.820、－0.694）。结论 肿瘤组织内99Tcm-rh-AnnexinⅤ的分布可以反映化疗后早期肿瘤组织细胞凋亡的状况以及凋亡调控蛋白bax表达水平的变化。     

单次化疗后肿瘤内99Tcm-Annexin V的分布与bcl-2、bax蛋白表达的相关性研究

采用^99Tc^m-rh-Annexin V作为核素凋亡显像示踪剂，观察小鼠单次化疗后肿瘤内bcl-2与bax蛋白的表达。结果显示，单次化疗后化疗组肿瘤组织的放射性摄取百分数（％／g）、阳性细胞数及bax蛋白表达均明显多于对照组（P〈0．01）；bcl-2蛋白表达两组间差异无显著性（P=0．220）；化疗组bcl-2／bax明显高于对照组（P〈0．01）。相关性研究表明，对照组与化疗组肿瘤组织的放射性摄取百分数与TUNEL阳性细胞数均呈明显正相关（r=0．801，r=0．769）。对照组肿瘤组织内bax蛋白表达与放射性摄取及TUNEL阳性细胞数均呈明显正相关（r=0．849、0．652），bcl-2／bax比值与放射性摄取百分数及TUNEL阳性细胞数均呈明显负相关（r=-0．820、-0．694）。以上结果提示，肿瘤组织内^99Tc^m-rh-Annexin V的分布可以反映化疗后早期肿瘤组织细胞凋亡的状况以及凋亡调控蛋白bax表达水平的变化。     

沉默乏氧诱导因子-1α和生存素基因联合放疗对裸鼠移植人肝癌的抑瘤效应

为探讨RNA干扰(RNA interference,RNAi)乏氧诱导因子-1α(Hypoxia induced factor1α,HIF-1α)和生存素(Survivin)基因联合X射线照射对裸鼠移植人肝癌细胞SMMC-7721的抑瘤效应,肿瘤局部注射脂质体包裹的靶向HIF-1α和/或Survivin基因的RNA干扰质粒后,接受5Gy X射线照射。观察各组裸鼠治疗后不同时间肿瘤体积和平均存活时间,以免疫组化染色法检测肿瘤组织Survivin、HIF-1α、增殖细胞核抗原(Proliferation cell nuclear antigen,PCNA)表达和肿瘤间质微血管密度,以TUNEL法检测肝癌细胞凋亡。结果表明,治疗开始后第9-21天,双干扰联合放疗组裸鼠肿瘤体积显著小于单干扰联合放疗组,且平均生存时间明显延长。治疗结束后1天,双干扰联合放疗组裸鼠肿瘤组织Survivin、HIF-1α、PCNA表达和肿瘤间质微血管密度明显低于对照组和放疗组,双干扰联合放疗组移植瘤凋亡细胞百分数较其它组明显升高。结果提示,双干扰联合放疗可有效地抑制裸鼠移植人肝癌细胞增殖和血管生成,促进细胞凋亡,其抑瘤效应明显优于放疗和单干扰联合放疗。     

沉默乏氧诱导因子-1α和生存素基因联合X射线照射对乏氧细胞的体外抑瘤效应

为探讨RNA干扰（RNA interference，RNAi）沉默乏氧诱导因子-1α（Hypoxia induced factor -1α，HIF-1α）和生存素（Survivin）基因联合X射线照射对乏氧人肝癌细胞SMMC-7721的体外抑瘤效应，利用双靶向HIF-1α和Survivin基因载体，采用阳离子脂质体介导法转染SMMC-7721细胞，经乏氧培养36h后，分别以RT-PCR和Western blot法检测HIF-1α和Survivin基因的mRNA及其蛋白表达，分别以四甲基偶氮唑盐（MTT）法和流式细胞术检测细胞存活分数及细胞凋亡。结果表明，转染质粒pGenesil-Survivin-HIF的SMMC-7721细胞中，HIF-1α和Survivin基因mRNA表达水平与对照和阴性干扰组相比明显降低（p〈0．05），也未检测到HIF-1α和Survivin蛋白的表达。单、双干扰联合放疗组存活分数较照射组明显降低（p〈0．01），双干扰联合放疗组存活分数较其它组也明显降低（p〈0．01）。单、双干扰联合放疗组凋亡细胞百分数较对照组明显升高（p〈0．01），双干扰联合放疗组凋亡细胞百分数较其它组也明显升高（p〈0．01）。结果提示，质粒pGenesil—Survivin—HIF可有效地干扰乏氧SMMC-7721细胞HIF-1α和Survivin基因的mRNA及其蛋白表达。双干扰联合放疗组对乏氧SMMC-7721细胞的体外抑瘤效应明显优于单干扰联合放疗组。     

白藜芦醇对肺癌A549细胞的放射增敏作用及其机制研究

摘要采用MTT法检测不同浓度白藜芦醇对肺癌A549细胞的毒性;克隆形成实验测定白藜芦醇对A549细胞增殖抑制作用;碱性单细胞凝胶电泳实验（彗星实验）检测细胞DNA受损情况;采用Westernblot法检测白藜芦醇与辐射联合作用对抑制凋亡蛋白Survivin的影响。结果表明,白藜芦醇对肺癌A549细胞的抑制作用随着白藜芦醇浓度升高及时间延长而增加：白藜芦醇与辐射联合作用可以明显增加辐射所致A549细胞的DNA损伤（p〈0．05）,并降低克隆形成率及抑制凋亡蛋白Survivin的表达。表明白藜芦醇对A549细胞具有放射增敏作用,且放射增敏作用可能是通过抑制Survivin蛋白的表达实现的。     

放疗前后宫颈鳞癌组织凋亡指数与bcl-2、bax基因表达的相关性研究

检测了宫颈鳞癌患者放疗前和放疗中凋亡指数 (AI)及bcl- 2、bax的基因表达 ,探讨了宫颈癌组织中基因表达与凋亡之间的关系。采用免疫组化SABC法检测bcl- 2和bax基因的表达 ,TUNEL法检测宫颈癌活检组织的细胞凋亡水平。在此基础上分析bcl- 2和bax基因表达的细胞阳性率与凋亡指数的关系。结果表明 ,X射线照射 10Gy后 ,宫颈癌组织bax基因表达增强 (p<0 .0 5 ) ,凋亡指数亦明显增加 (p <0 .0 1) ,bcl- 2基因表达的细胞阳性率水平无明显改变 (p >0 .0 5 )。照射前宫颈癌组织bcl- 2和bax的基因综合表达细胞阳性率与自发凋亡相关性较差 (p >0 .0 5 ,r=0 .370 3,其上界为 0 .70 71) ,而 10Gy照射后 ,宫颈癌组织中bcl- 2和bax的综合表达细胞阳性率与辐射诱导的凋亡具有明显的相关性 (p <0 .0 5 ,r =0 .5 2 6 4,其上界为 0 .70 71)。     

18F-FDG对小鼠Lewis肺癌移植瘤抑制作用的实验研究

建立Lewis肺癌C57BL/6小鼠皮下移植瘤模型18只,按随机数字法分为高剂量18F-FDG治疗组、低剂量18F-FDG治疗组和对照组,每组6只,分别给予18F-FDG 18.5×107Bq、9.25×107Bq和0.2 mL等体积的生理盐水,于接种后第7天腹腔内一次给药,观察18F-FDG对Lewis肺癌移植瘤体积变化和瘤重的影响。22天后用流式细胞仪检测细胞凋亡,以免疫组化法检测bcl-2及Survivin基因的蛋白表达。发现18F-FDG高、低剂量组肿瘤抑瘤率及凋亡率明显高于对照组,Bcl-2及Survivin蛋白的表达明显低于对照组(P<0.05),与低剂量组相比,高剂量组与对照间差异更为显著(P<0.01)。这表明18F-FDG可明显抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤生长,其机制可能与下调Bcl-2及Survivin蛋白的表达促进细胞凋亡有关。     

GM-CSF/IL-3融合蛋白、GM-CSF和IL-3抗辐射诱导Tf-1细胞凋亡的分子机制

摘要探讨造血生长因子GM-CSF／IL-3融合蛋白、GM-CSF及IL-3抗γ射线辐射诱导Tf-1细胞凋亡的分子机制。采用荧光强度比色法检测辐射后Tf-1细胞内Caspase-3活性;RT-PCR半定量及免疫组化实验方法分别观察Bcl-2、Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平的变化。GM-CSF／IL-3融合蛋白、GM-CSF、IL-3以及GM-CSF与IL-3合用均可使辐射后Tf-1细胞内Caspase-3活性明显降低,其活性是不加入任何细胞因子对照组的15．71％-43．65％。在Tf-1细胞辐射后48h时,各细胞因子组Bcl-2 mRNA及蛋白的表达水平较对照组明显提高;其中GM-CSF／IL-3融合蛋白10μg／L组在辐射后24h时观察到Bcl-2 mRNA表达增强。细胞辐射后48h时,GM-CSF／IL-3融合蛋白10μg／L、100μg／L及IL-310μg／L组Caspase-3 mRNA的表达明显增强;辐射后48h时,各细胞因子组均观察到Caspase-3蛋白表达增多。三种细胞因子可通过明显抑制Caspase-3活性、促进Bcl-2、Caspase-3mRNA、蛋白质的表达以及抑制Caspase-3酶原激活而发挥抗辐射诱导的Tf-1细胞凋亡。     

吲哚美辛对荷瘤小鼠抗肿瘤作用机制的实验研究

用微观放射自显影技术及免疫组化法探讨了非甾体类抗炎药吲哚美辛(IN)对Lewis肺癌的生长抑制作用机制。结果显示:与对照组相比,实验组IN的抑瘤率为55.05%;IN可显著下调Bcl-2蛋白的表达(t=6.154,P<0.001),对Bax蛋白的表达没有明显影响(t=2.101,P>0.05)。放射自显影结果显示,在肿瘤细胞的细胞膜、细胞浆及细胞核中均有黑色银颗粒分布,且在用药后12 h时肿瘤组织中的平均银颗粒数高于4、7、243、6 h时。以上结果表明,IN可抑制Lewis肺癌的生长,其机制与下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达及降低Bcl-2/Bax的比值有关;IN可进入到肿瘤细胞内发挥抗肿瘤作用。     

99Tcm标记小干扰RNA探针的干扰活性及其在荷瘤鼠体内的生物分布

使用双功能螯合剂NHS MAG3和氯化亚锡还原法构建99Tcm标记的小干扰RNA（Small Interference RNA,siRNA）探针。将标记和未标记的端粒逆转录酶（Human Telomerase Reverse Trancriptase,hTERT）靶向siRNA转染至肝癌HepG2细胞,72 h后,蛋白印迹法显示两者具有相近的蛋白抑制率（约76.7%）。标记物在荷HepG肿瘤裸鼠体内的生物分布显示,肾脏分布最高,其次为肝脏。注射hTERT靶向探针后 1～6 h内,肿瘤分布由（0.82 ± 0.16）%ID/g增加至（0.97 ± 0.15）%ID/g,肿瘤与血液和肿瘤与肌肉的放射性摄取比（T/NT）分别为2.62 ± 0.70和6.02 ± 0.52,显著高于对照组（P< 0.05）。以上结果提示,⁹⁹Tc^m-siRNA探针对活体肿瘤示踪具有良好的研究前景和潜在的应用价值。     

Ad-hING4联合~(125)I粒子对裸鼠胰腺癌移植瘤的抑癌增效作用

本工作探讨腺病毒介导的人ING4基因(Ad-hING4)联合~(125)I粒子对裸鼠胰腺癌移植瘤的抑癌增效作用及其可能的机制.将本室构建的Ad-hING4腺病毒感染QBI-293A细胞,扩增后获得高滴度的病毒.建立25只裸鼠胰腺癌PANC-1皮下移植瘤模型,分成PBS对照组、空病毒Ad组、~(125)I粒子近距离放疗组、Ad-hING4基因治疗组、~(125)I粒子和Ad-hING4联合治疗组,进行抑瘤治疗实验;此后每5天测量1次肿瘤体积,20天后处死,计算抑瘤率和金氏q值.常规病理切片观察细胞生长形态、组织损伤程度和范围,并进行凋亡细胞计数(AI);免疫组化SP法检测肿瘤标本中微血管密度(MVD)、生存素SurvⅣin和活化的Caspase-3凋亡相关蛋白的表达.结果发现, ~(125)I粒子组、Ad-hING4组、联合治疗组抑瘤率分别达到34.19%(P<0.01)、31.50%(P<0.01)、67.15%(P<0.01),联合治疗组抑瘤率明显高于~(125)I粒子和Ad-hING4治疗组(P<0.01);病理切片检查显示近粒子处肿瘤细胞变性坏死,远离粒子处可见存活肿瘤细胞;三个治疗组凋亡指数(AI)、Caspase-3阳性细胞数明显高于PBS组(P<0.05),且联合治疗组明显高于~(125)I粒子和Ad-hING4治疗组(P<0.01);三个治疗组MVD值、SurvⅣin阳性细胞明显低于PBS组(P<0.05),且联合治疗组明显低于~(125)I粒子和Ad-hING4治疗组(P<0.01);Ad组与PBS组的各指标无显著性差异(P>0.05).可见~(125)I粒子、Ad-hING4可显著抑制裸鼠PANC-1胰腺癌移植瘤的生长,两者联用具有抑癌增效的协同作用,Ad-hING4有望作为一种新的放疗增敏剂;其抑瘤机制可能是通过下调SurvⅣin和上调Caspase3的表达,以诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤血管形成.     

99Tcm-EGF的直接法合成及其在荷C6动物体内生物学分布

探索用⁹⁹Tc^m直接标记表皮生长因子（EGF）的方法并研究其在荷C6动物体内的生物学分布特点。巯基乙醇（20 mL/L）10 μL还原EGF（2.5 μg）;含0.5 μg SnCl2的亚甲基二膦酸盐（MDP）溶液将还原高价锝使之与还原EGF的巯基结合,放化纯度大于95%,标记物稳定性较好,在6 h内放化纯度大于95%。通过内皮细胞培养进行⁹⁹Tc^m-EGF的生物活性鉴定,显示EGF在锝标记前后生物学活性未见明显改变（P＞0.05）。⁹⁹Tc^m -EGF在荷瘤鼠体内生物学分布显示肝、脾、肾等组织放射性分布较高,瘤区放射性较高,而脑组织最低,4 h瘤与正常组织放射性摄取比值(Tumor/Normal Tissue)为2.25, SPECT全身显像显示瘤组织放射性核素浓聚。因此直接合成的⁹⁹Tc^m-EGF可望成为特异性诊断高表达EGFR肿瘤的SPECT分子显像剂。     

电离辐射诱导P21蛋白表达及对细胞周期解偶联的作用

采用免疫细胞化学方法检测P21蛋白表达的变化。采用P1荧光标记及流式细胞术（Flow cytometry,FCM）测定细胞周期并分析细胞倍体的变化。观察电离辐射对EL-4细胞P21蛋白表达的影响及对细胞周期解偶联的作用。时效实验结果显示,4．0GyX射线照射后2—72h,EL-4细胞中P21蛋白表达明显增高（p〈0．05-p〈0．001）。量效实验结果显示,0．5—6．0GyX射线照射后24h,EL-4细胞中P21蛋白表达明显增高（p〈0．01—p〈0．001）。结果还显示,1．0-16．0GyX射线照射后,EL-4细胞的8倍体细胞数在各剂量组均未见明显变化（均p〉0．05）。研究表明,电离辐射可诱导EL-4细胞P21蛋白表达,但不诱导EL-4细胞周期解偶联。提示P21蛋白可能参与细胞周期解偶联的分子调控。     

整合素素αⅤβ3受体显像剂18F标记RGD肽的研究进展

血管新生是肿瘤生长、转移过程中不可缺少的生物过程。整合素α_Ⅴβ₃受体在新生血管内皮细胞和多种肿瘤细胞表面高表达,在肿瘤血管新生中起着关键作用,目前已成为肿瘤诊断与治疗的一个重要靶点。精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（Arg-Gly-Asp, RGD）肽可特异性地与整合素α_Ⅴβ₃受体结合,¹⁸F标记的RGD肽类化合物PET显像可无创、动态地定量监测整合素α_Ⅴβ₃受体表达,在肿瘤早期诊断、疗效监测及抗血管新生评价上发挥着重要作用。本文就近年来国内外¹⁸F标记RGD 肽在肿瘤α_Ⅴβ₃受体显像中的研究进展作简要综述。     

电离辐射诱导EL-4淋巴瘤细胞G1期阻党政军及相关蛋白的表达

探讨X射线诱导EL－4细胞G1期阻滞及相关蛋白的表达。采用PI荧光标记 ,流式细胞术检测细胞周期的变化。用单克隆抗体免疫荧光标记,流式细胞术检测蛋白表达的变化。结果表明,2．0Gy和4.0Gy照射后12-72h,G1期EL－4细胞百分数显著高于假照射组（P＜0．05－p＜0.001).4.0Gy照射后EL-4细胞p53蛋白表达从照射后2h开始明显增高,持续至照射后24h(p＜0．05－p＜0．001）;p21蛋白表达在照射后2h开始明显增高,持续至照射后48h(p＜0.05-p＜0.001);GADD45蛋白表达在照射后2h开始明显增高,持续至照射后48h(p＜0．05－p＜－0．001）;MDM2蛋白表达在照射后4h开始明显增高,持续至照射后24h（p＜0.05-p＜0.01）。结果提示,中等剂量X射线照射可诱导EL－4细胞G1期阻滞。p53、p21和GADD45蛋白表达在电离辐射诱导EL－4细胞G1期阻滞中起重要作用。     

MMP1、TIMP1在放射复合伤口愈合过程中的表达及对伤口愈合过程的影响(英文)

利用放射复合伤口动物模型，动态观察伤口愈合过程中MMP1，TIMP1 mRNA转录及蛋白表达的变化及基对伤口愈合和组织改建的影响。结果显示：25Gy(γ射线）局部照射对伤口愈合有明显的损害作用，照射组伤口较对照组延迟6d愈合。在伤口愈合的炎症期和肉芽组织生长期，照射组新生表皮细胞中MMP1表达与对照组相近，在后期，随着照射组伤口愈合的延迟其表达相对较高。在伤后3-14d，TIMP1在对照组新生表皮细胞中呈弱阳性，表皮覆盖后呈阴性，而在照射组表皮覆盖前呈阴性或弱阳性。MMP1与TIMP1在照射组肉芽组织成纤维细胞、血管内皮细胞、巨噬细胞中表达较对照组明显降低，在愈合后期因辐射所致伤口愈合的延迟其表达时相拖后。结果表明：辐射所致MMP1与TIMP1在伤口肉芽组织中表达明显降低，直接影响迁移、血管形成和瘢痕组织形成等病理过程，是辐射影响伤口愈合的重要机制之一。     

99Tcm标记HYNIC-Anx13用于细胞凋亡显像的研究

为探讨⁹⁹Tc^m标记的HYNIC-Anx13用于细胞凋亡显像的可能性，分别以N-［三（羟甲基）甲基］甘氨酸（Tricine）, 乙二胺-N,N'-二乙酸（EDDA）和EDDA/Tricine为协同配体，对经6-肼基烟酰基（HYNIC）修饰的膜联蛋白V（Annexin V）片段（HYNIC-Anx13）的⁹⁹Tc^m 标记条件和主要影响因素进行了研究，并完成了HYNIC-Anx13的⁹⁹Tc^m标记物在正常小鼠体内的生物分布和大鼠细胞凋亡模型的显像实验。实验结果表明，标记物在反应溶液和小牛血清中较稳定，但在与半胱氨酸的竞争反应中及在生物体内的稳定性较差。生物分布实验及体内显像结果表明，⁹⁹Tc^m标记HYNIC-Anx13的血液清除较快，在体内主要经肾脏排泄；在模型组的靶器官中的放射性摄取明显高于对照组（p<0.05），但靶与非靶组织的放射性比值较低，细胞凋亡组织的显像图像不够理想。