青蒿素对人乳腺癌细胞MDA-MB-435辐照后微核的影响研究

本实验主要分析青蒿素作用后p53功能突变的人乳腺癌细胞MDA-MB-435微核的变化。通过MTT法测定不同药物浓度及不同药物作用时间对细胞毒性的影响，通过胞质分裂阻滞法（CB法）计数青蒿素作用联合不同剂量^60Coγ射线照射后细胞的微核率（Micronucleus frequency，MNF）和微核细胞率（Micronucleus cell frequency，MNCF），将青蒿素作用的细胞与单纯照射细胞的微核率和微核细胞率的统计分析结果进行比较。实验结果表明，青蒿素对实验细胞MDA—MB-435毒性较小，在实验药物浓度为200μmol／L，作用时间为24h时，将CB微核法得到的数据进行回归拟合可以得到药物作用及未经药物作用的剂量效应曲线，比较两组曲线，青蒿素作用组的微核率及微核细胞率明显高于单纯照射细胞（p〉0．05）。     

白藜芦醇对肺癌A549细胞的放射增敏作用及其机制研究

摘要采用MTT法检测不同浓度白藜芦醇对肺癌A549细胞的毒性;克隆形成实验测定白藜芦醇对A549细胞增殖抑制作用;碱性单细胞凝胶电泳实验（彗星实验）检测细胞DNA受损情况;采用Westernblot法检测白藜芦醇与辐射联合作用对抑制凋亡蛋白Survivin的影响。结果表明,白藜芦醇对肺癌A549细胞的抑制作用随着白藜芦醇浓度升高及时间延长而增加：白藜芦醇与辐射联合作用可以明显增加辐射所致A549细胞的DNA损伤（p〈0．05）,并降低克隆形成率及抑制凋亡蛋白Survivin的表达。表明白藜芦醇对A549细胞具有放射增敏作用,且放射增敏作用可能是通过抑制Survivin蛋白的表达实现的。     

在DNA损伤修复信号传导通路中ATM介导的BCA1及RAD51作用机理的研究

为阐明毛细血管扩张性共济失调突变基因(Ataxia telangiectasia mutated,ATM)介导的乳癌基因1(Breast cancer gene 1,Brca1)磷酸化及其下游DNA修复相关蛋白(DNA damage repair protein 51,RAD51)在DNA损伤修复信号传导通路中作用机理,以源于正常人皮肤的成纤维细胞系GM细胞(Originated from human skinfibroblast GM Cell,GM0639)为对照,用免疫共沉淀与Western blot方法,观察60Co γ射线照射后共济失调症(Ataxia telangiectasia,AT)细胞、ATM转染的AT细胞(ATM+-AT)和GM细胞的BRCA1及RAD51蛋白表达的变化.经0、5、10、20Gy辐照后,AT细胞通过免疫共沉淀及Western Blot法分析其中ATM和BRCA1蛋白以及BRCA1和RAD51蛋白之间的相互作用以及PI3K抑制剂对ATM磷酸化其下游基因的影响.0Gy照射ATM+-AT和GM细胞未出现BRCA1表达条带;照射后,GM细胞、ATM细胞BRCA1和RAD51蛋白均有表达,而AT细胞无表达;PI3K抑制剂Wortmannin对经电离辐射照射后的AT、ATM+-AT和GM细胞中BRCA1蛋白表达具有抑制作用;照射后ATM+-AT和GM细胞中BRCA1和RAD51蛋白均有表达.因此,电离辐射照射后,BRCA1由ATM介导磷酸化后可进一步与RAD51相互作用,这是信号通路传导过程中的一个级联反映,从而修复损伤的DNA,保持基因组的稳定性.     

青蒿素对人宫颈癌细胞放射增敏作用及其机制的研究

目的:研究青蒿素(artemisinin)对人宫颈癌HeLa细胞放射敏感性增强的作用机制.方法:MTT法检测青蒿素对正常人皮肤成纤维细胞GM0639、宫颈鳞癌SiHa细胞和宫颈腺癌HeLa细胞的生长抑制作用.克隆形成实验检测青蒿素对GM0639、SiHa和HeLa细胞的放射增敏作用.Western 印迹法检测CyclinB1和Wee1蛋白在HeLa细胞中表达的变化.结果:MTT法检测结果显示,不同浓度的青嵩素(27.67～442.75 nmol/L)对GM0639、SiHa和HeLa细胞作用24和48 h时均有细胞生长抑制作用;而青蒿素(110.69 nmol/mL)分别作用GM0639、SiHa和HeLa细胞6 h后,对3株细胞的生长抑制率分别为0.93±0.25、0.84±0.10和0.77±0.03,对照组(未加药组)3株细胞的生长抑制率分别为0.92±0.13、0.83±0.09和0.75±0.21,加药组和对照组之间差异无统计学意义(P>0.05).青蒿素对GM0639和SiHa细胞无放射增敏作用,对HeLa细胞有放射增敏作用,SER=1.12;青嵩素和照射联合作用HeLa细胞后,细胞中CyclinB1蛋白表达比照射组增加,Wee1蛋白表达比照射组减少.结论:青蒿素能增加HeLa细胞的放射敏感性,其作用机制可能与上调CylinB1及下调Wee1的蛋白表达有关.     

新体系评价甜型红葡萄酒的营养健康效应及 改进食品安全质量的设想

目的 本研究以玉米低营养饲料喂养小鼠为动物模型, 结合建立的食品BDI-GS评价新体系以评价甜型红葡萄酒的营养及健康效应。方法 以线性生长期健康啮齿类ICR小鼠为对象, 各组小鼠均喂食单纯玉米饲料。空白组小鼠给予饮用水, 受试物小鼠每天分别灌胃给予0.2、0.4、0.8 mL的红酒原液, 共灌胃12 d。隔天称取体重1 次, 末次称重后眼眶取血、处死解剖, 通过统计9项脏器组织重量、系数及其损益指数(benefit-damage index, BDI)和累计积分(general score, GS)等指标进行评价, 并进行血清生化指标的分析测试。结果 甜型红酒低、中剂量对部分脏器营养指标均显示一定有益效应, 主要表现在胸腺、胰腺、肝肾和性腺的重量BDI略高于1.0; 综合营养效应(累计GSW)明显优于大剂量组小鼠, 而综合健康效应(累计GSI)各剂量相近。同时, 连续灌服甜型红酒可以显著升高血糖(P<0.05, P<0.01), 升高血液甘油三酯(triglyceride, TG)。结论 甜型红酒对机体脏器组织的总体营养及健康效应均较低, 但也未见明显损害, 连续饮用会使血糖升高, 对血脂还会造成一定不利影响。同时, 也表明低营养模型结合BDI-GS评价体系适合酒类及饮品的营养健康效应的评价, 并提出新的食品健康的评定标准及食品质量安全的设想。     

Tat-SmacN7诱导肿瘤细胞辐射敏感性的机理研究

探讨Tat—SmacN7诱导食管癌细胞株ECl09和非小细胞肺癌细胞株NCL—H460辐射敏感性的机制。采用体外培养EC109细胞和NCL—H460细胞,实验分为对照组、单纯给药组、单纯照射组和给药联合照射组,用RT-PCR检测CAPS8、CASP9和CASP3的转录水平,Fluorogenic caspase assay试剂盒检测Caspase-3.-8、和一9的活性,ELISA方法检测Caspase活性。结果显示,两种肿瘤细胞在使用Tat—SmacN7联合Caspase的抑制剂z—VAD—fmk后,存活曲线较不使用抑制剂组均有明显上移;Caspase-3、-8、和-9的活性在Tat—SmacN7组明显提高,提示Tat—SmacN7可通过细胞凋亡线粒体途径发挥辐射增敏作用,有望成为一种新的辐射增敏剂。     

UpG法用于辐射损伤的量效关系研究

应用常规染色体制作法和紫外线照射加吉姆萨染色法(Ultraviolet plus GienlSa technology,UpG)检测经60Coγ射线离体照射后的人外周血淋巴细胞染色体畸变率(双着丝粒体 环),研究其剂量-效应关系,探讨UpG法用于辐射损伤的剂量估算效果.实验结果表明:两种方法得出的染色体畸变率与照射剂量密切相关(P<0.05),均可用于辐射损伤的量效关系研究.两种方法的结果相比,在同一照射剂量下,UpG法高于常规法,具有显著性差异(P<0.05).UpG法可以很好用于辐射损伤的剂量估算中,且较为准确、灵敏.     

60Coγ射线对AT细胞SOD活性和MDA含量的影响研究

研究毛细血管扩张性共济失调症（AT）患者皮肤的成纤维细胞系AT5BIVA（AT细胞）的应对电离辐射导致细胞氧化损伤的能力。以源于正常人皮肤的成纤维细胞系GM063（GM细胞）为对照，采用超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）、丙二醛（Malondialdehydc，MDA）测定试剂盒，AT细胞和GM细胞经60^Coγ射线0、1、2、3、4Gy照射后，观察比较它们的SOD活性和MDA含量的差异，并分别进行曲线拟合。结果显示在1、2、3、4Gy剂量照射下，AT和GM细胞中SOD活性均随受照剂量增加而明显降低（P〈0．01），同一剂量点的AT细胞中SOD活性明显低于GM细胞（P〈0．05）；AT和GM细胞中MDA含量均随受照剂量增加而升高（P〈0．05），同一剂量点的AT细胞中MDA含量明显高于GM细胞（P〈0．05）。AT细胞和GM细胞的SOD活性和MDA含量均与照射剂量呈线性关系。结果表明由于AT细胞中SOD活性降低，导致AT细胞应对辐射的氧化损伤能力不足，引起AT细胞中MDA含量增加，是AT细胞高辐射敏感性的原因之一。     

环氧化酶抑制剂Celecoxib增强脑胶质瘤SHG44细胞辐射敏感性的体外实验研究

为了研究COX-2选择性抑制剂celecoxib对人脑胶质瘤细胞SHG44的辐射增敏作用,用MTT法检测celecoxib对细胞存活分数的影响,用克隆法、RT-PCR法检测celecoxib或联合60Coγ射线照射与细胞克隆存活率及COX-2 mRNA表达水平的关系,探讨celecoxib辐射增敏的可能作用机制,为临床有效治疗胶质瘤提供实验依据.结果表明celecoxib细胞毒性作用随浓度升高而升高;celecoxib能抑制细胞克隆形成,联合60Coγ射线照射显示出协同作用;与对照组、单独药物和照射组相比较,celecoxib联合照射后COX-2 mRNA的表达水平均有所降低.本实验研究认为COX-2选择性抑制剂celecoxib对人脑胶质瘤SHiG44细胞具有辐射增敏作用,其机制与COX-2 mRNA表达水平密切相关.     

新的抗肿瘤药7-hy droxy staurosporine(UCN-01)抑制肿瘤浸润和转移

目的和方法 研究7-hydroxystaurosporine(UCN-01)对转移性前列腺肿瘤DU-1 45 细胞浸润和转移的影响。用体外转移和创伤法检查细胞浸润和转移,用Western blotting法检查蛋白质的表达。结果 UCN-01 在非毒性剂量下(100 nmol·L^-1)明显地抑制DU-145细胞浸润和转移。而且,UCN-01这种抗肿瘤浸润和转移功能与它增加细胞-细胞粘连分子E-cadherion的表达有关。结论 这些实验首次证实UCN-01 能抑制人前列腺肿瘤细胞的浸润和转移。UCN-01 的临床应用可能更有效地控制前列腺肿瘤转移。