青蒿素与蒿甲醚对人鼻咽癌CNE-1细胞放射增敏作用的比较研究

为了比较青蒿素(Artemisinin)和蒿甲醚(Artemether)对人鼻咽癌CNE-1细胞放射增敏作用的差异,取指数生长期的人鼻咽癌CNE-1细胞,采用细胞克隆形成法分别检测青蒿素和蒿甲醚对CNE-1细胞生长的抑制效应,比较两种药物抑制效应的差异性,并确定实验的药物浓度;将人鼻咽癌细胞分为对照组、单纯药物组、单纯照射组及联合治疗组。单纯药物组、联合治疗组分别分为青蒿素组和蒿甲醚亚组,射线照射剂量为0、2、4、6和8Gy,采用多靶单击数学模型拟合细胞存活曲线,取放射增敏比(SER)为达到相同生物效应时,单纯照射的剂量与联合治疗组的剂量之比。实验结果表明,两种药物对细胞的抑制作用均随着药物浓度的提高而增强,存在剂量依赖关系。青蒿素对CNE-1细胞的抑制作用高于蒿甲醚,测得青蒿素放射增敏比(SER)为1.272,蒿甲醚SER为1.481,表明蒿甲醚较青蒿素对人鼻咽癌CNE-1细胞具有更强的放射增敏作用。     

青蒿素及其衍生物辐射增敏作用及其机制的研究进展

传统抗疟药青蒿素及其衍生物(蒿甲醚、蒿乙醚、青蒿琥酯、双氢青蒿素)具有强大的抗肿瘤作用,越来越受到人们的关注.新近又发现青蒿素及其衍生物具有辐射增敏作用,能通过调控细胞周期、产生氧自由基介导细胞毒作用、抑制谷胱甘肽(Glutathione,GSH)合成、抑制DNA损伤修复作用等方式增加射线对肿瘤细胞的杀伤能力,其作用还具有药物浓度及辐射剂量依赖性,因此在临床上具有很好的放疗增敏效果.本工作就青蒿素及其衍生物辐射增敏作用的特点及作用机制进行综述.     

线粒体靶向6-(4-(二甲氨基)吡啶)甲基香豆素的合成及其辐射增敏作用

通过溴化和亲电两步反应得到线粒体靶向的抗肿瘤及辐射增敏药物6-(4-(二甲氨基)吡啶)甲基香豆素,探讨其对肺癌细胞系A549的抑制作用及辐射增敏作用。采用MTT法检测其对A549细胞的抑制率;克隆形成法检测辐射增敏作用(通过多靶单击方程拟合A549细胞的吸收剂量存活曲线,求出辐射增敏比,评价增敏效果);DCFH-DA法测定活性氧(Reactive oxygen species,ROS)含量。结果表明:A549细胞抑制率与药物浓度基本呈正相关;和照射组相比,联合组(照射加给药)存活分数明显降低(p0.05),辐射增敏比RSE=1.585;各剂量下,联合组与照射组相比,ROS均有显著性提高(p0.05)。结果提示,6-(4-(二甲氨基)吡啶)甲基香豆素对A549细胞具有抑制作用,且呈剂量依赖性;对A549细胞具有辐射增敏作用;可以显著提高A549细胞中的ROS含量。     

LGK-974对人肝癌细胞系HepG2的辐射增敏作用

观察LGK-974(CAS:1243244-14-5)对人肝癌细胞系HepG2的辐射增敏作用,并探讨可能的作用机制。应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测LGK-974对HepG2细胞的生长抑制作用;细胞克隆形成法确定1.0mmol/L LGK-974对HepG2细胞放疗敏感性的影响;H2DCFH-DA探针流式细胞法检测细胞活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平;RT-PCR及Western Blot法检测Nrf2及其下游NQO-1、HO-1基因的转录水平和蛋白表达水平。结果显示,LGK-974抑制HepG2细胞的生长分裂和增殖,24、48、72 h的半抑制浓度(IC50)为4.3、2.14、0.536mmol/L(p0.05);1.0mmol/L LGK-974对HepG2细胞的放射增敏比(SERD0)为1.37;LGK-974能增大辐射产生的ROS水平(p0.05);照射后Nrf2及其下游基因HO-1、NQO-1的转录水平和表达水平均增加;LGK-974能降低辐射对Nrf2、HO-1和NQO-1的转录和表达水平的增加作用(p0.05)。由此得出,LGK-974对人肝癌细胞系HepG2具有明显的辐射增敏作用,其机制可能是抑制Nrf2信号通路,阻止细胞缓解辐射产生的氧化压力。     

甲硝羟乙唑衍生物(CM)对离体乏氧L_(7712)翻胞的辐射增敏作用

本文报道了用马血清代替小牛血清改进和建立了能用于检测L_(7712)细胞存活率的ADC法。并用此法研究证明了我们合成的甲硝羟乙唑衍生物(CM)对离体乏氧L_(7712)细胞有明显的辐射增敏作用,其SER值为2左右,较原化合物灭滴灵的SER(1.2)约提高67％。CM对缺氧细胞存活率的抑制作用比有氧下强。与前文报道的CM对荷瘤小鼠S_(180)缺氧下照射有辐射增敏作用及对鼠乏氧S_(180)生长有抑制作用的结果一致。作者对台盼蓝染色法和ADC法检测细胞存活率作了比较。     

二氢丹参酮Ⅰ对 QGY-7703 细胞和 SPC-A-1 细胞放射敏感性的影响

利用体外细胞集落形成法研究二氢丹参酮Ⅰ对肿瘤细胞放射敏感性的影响。实验表明，二氢丹参酮Ⅰ对人肝癌细胞株（ＱＧＹ７７０３）和人肺腺癌细胞株（ＳＰＣＡ１）有较强的细胞毒作用，半致死剂量ＬＤ５０分别为８．８６μｍｏｌ／Ｌ和７．７３μｍｏｌ／Ｌ。该药物与Ｘ射线联合作用能增强细胞对射线的敏感性，１μｍｏｌ／Ｌ的二氢丹参酮Ⅰ作用于有氧细胞１ｈ后照射，对ＱＧＹ７７０３细胞和ＳＰＣＡ１细胞的增敏比（ＳＥＲ）分别为１．４２和１．６２；ＱＧＹ７７０３细胞和ＳＰＣＡ１细胞的氧增比（ＯＥＲ）分别为２．０８和３．０３。１μｍｏｌ／Ｌ的二氢丹参酮Ⅰ在乏氧状态下对这两种细胞亦有放射增敏作用，ＱＧＹ７７０３细胞的ＳＥＲ仍为１．４２，而ＳＰＣＡ１细胞的ＳＥＲ增大为１．９６。在分次照射实验中，１μｍｏｌ／Ｌ的二氢丹参酮Ⅰ能完全抑制这两种细胞的亚致死性损伤修复（ＳＬＤＲ）。     

环氧化酶抑制剂Celecoxib增强脑胶质瘤SHG44细胞辐射敏感性的体外实验研究

为了研究COX-2选择性抑制剂celecoxib对人脑胶质瘤细胞SHG44的辐射增敏作用,用MTT法检测celecoxib对细胞存活分数的影响,用克隆法、RT-PCR法检测celecoxib或联合60Coγ射线照射与细胞克隆存活率及COX-2 mRNA表达水平的关系,探讨celecoxib辐射增敏的可能作用机制,为临床有效治疗胶质瘤提供实验依据.结果表明celecoxib细胞毒性作用随浓度升高而升高;celecoxib能抑制细胞克隆形成,联合60Coγ射线照射显示出协同作用;与对照组、单独药物和照射组相比较,celecoxib联合照射后COX-2 mRNA的表达水平均有所降低.本实验研究认为COX-2选择性抑制剂celecoxib对人脑胶质瘤SHiG44细胞具有辐射增敏作用,其机制与COX-2 mRNA表达水平密切相关.     

青蒿素对脑胶质瘤U251细胞的辐射增敏作用

为探讨青蒿素(Artemisinin)对脑胶质瘤细胞辐射敏感性的影响及其机制,采用甲基四唑蓝(MTT)法检测青蒿素对胶质瘤U251细胞增殖的抑制作用;Hoechst 33258荧光染色观察凋亡小体;单丹磺酞尸胺(MDC)染色和Western blotting检测U251细胞的自噬活性的改变;用克隆形成实验测定自噬抑制剂3-MA对U251细胞的增殖抑制作用。结果显示:青蒿素对U251细胞增殖有抑制作用;青蒿素和X射线联合处理组细胞凋亡增加,并出现大量自噬泡且LC3-Ⅱ表达量值增大(p<0.01);3-MA、青蒿素和X射线三联处理组细胞克隆形成率较联合处理组显著降低(p<0.01)。研究表明,青蒿素可能主要通过诱导细胞凋亡来增强U251细胞对X射线的辐射敏感性,同时青青蒿素也能增强辐射诱导U251细胞的自噬活性,但自噬机制在此过程中可能起到细胞保护作用。     

极谱法测定辐射增敏剂的亲电子能力及其与增敏作用的关系

采用差示脉冲极谱法测定和比较了新型辐射增敏剂CM、MISO、灭滴灵的半波电位(E_(1/2));结果其E_(1/2)。值大小次序为MISO>CM>灭滴灵;进一步证明了它们的还原能力与其辐射增敏作用密切相关。虽然CM的亲电子能力及其离体辐射增敏作用居中,但其毒性小,有一定的亲肿瘤组织作用,治疗指数高,初步临床结果表明它是一个低毒有效的辐射增敏剂。     

白藜芦醇对肺癌A549细胞的放射增敏作用及其机制研究

摘要采用MTT法检测不同浓度白藜芦醇对肺癌A549细胞的毒性;克隆形成实验测定白藜芦醇对A549细胞增殖抑制作用;碱性单细胞凝胶电泳实验（彗星实验）检测细胞DNA受损情况;采用Westernblot法检测白藜芦醇与辐射联合作用对抑制凋亡蛋白Survivin的影响。结果表明,白藜芦醇对肺癌A549细胞的抑制作用随着白藜芦醇浓度升高及时间延长而增加：白藜芦醇与辐射联合作用可以明显增加辐射所致A549细胞的DNA损伤（p〈0．05）,并降低克隆形成率及抑制凋亡蛋白Survivin的表达。表明白藜芦醇对A549细胞具有放射增敏作用,且放射增敏作用可能是通过抑制Survivin蛋白的表达实现的。     

羧甲基-β-1,3-葡聚糖对人B淋巴母细胞的辐射防护作用

利用X射线辐照经羧甲基-β-1,3-葡聚糖预处理的人B淋巴母细胞(Human B lymphoblasts,HMy2.CIR),探究羧甲基-β-1,3-葡聚糖对辐射损伤的防护作用。采用CCK-8法检测细胞存活率,并筛选出最佳给药浓度和孵育时间(0.1μg/mL,72 h);流式细胞仪检测羧甲基-β-1,3-葡聚糖对辐照后HMy2.CIR细胞凋亡的影响;微核实验检测羧甲基-β-1,3-葡聚糖对辐照后HMy2.CIR细胞微核形成的影响;彗星实验检测对DNA损伤程度和修复的影响。结果表明,羧甲基-β-1,3-葡聚糖对HMy2.CIR无细胞毒性并具有增殖促进作用;羧甲基-β-1,3-葡聚糖能够抑制辐射造成的凋亡率和微核率的增加,降低DNA损伤程度,加快损伤DNA的修复。羧甲基-β-1,3-葡聚糖对HMy2.CIR细胞辐射损伤有防护作用,其机制可能与抑制辐射诱导的细胞凋亡和DNA损伤有关。     

槲皮素对HeLa细胞辐射敏感性影响及其机理

为探讨药物槲皮素对HeLa宫颈癌细胞的辐射敏感性影响及其机理,使用不同浓度的槲皮素和不同照射剂量处理HeLa细胞,采用克隆形成法测定细胞存活率,应用流式细胞术测定细胞DNA双链断裂,以及测定槲皮素与电离辐射联合作用对HeLa细胞的周期影响.结果显示,不同槲皮素浓度处理组的HeLa细胞在不同照射剂量组间的存活率比较有统计...     

人卵巢癌耐药细胞株的放射敏感性研究

为了研究具有耐药性的卵巢癌细胞系对放射线治疗的影响，以人卵巢癌细胞株A2780及其紫杉醇耐药株A2780/Taxol为研究对象，以MTT法检测细胞的药物敏感性并评判分析细胞放射敏感性；克隆形成实验分析细胞放射抗拒性；实时荧光定量PCR分析照射前后细胞耐药基因MDR1的变化。实验结果显示：A2780／Taxol的耐药指数为43．96；随着放射剂量增大，A2780细胞和A2780／Taxol细胞的相对存活率明显下降，以A2780细胞明显（p〈0．05）；A2780细胞及其耐药A2780／Taxol细胞仇值分别为4．90和6．06，D0越大，放射抗拒性越强，表明耐药A2780／Taxol细胞的放射抗性强于A2780细胞（p〈0．01）；照射前及不同剂量照射作用后，耐药基因MDR1在A2780／Taxol细胞中的表达均明显高于A2780细胞（p=0．000）。这些结果揭示耐药卵巢癌细胞株A2780／Taxol对辐射具有耐受性，表明卵巢癌细胞系具有放化疗交叉耐受性，并且射线和药物诱导卵巢癌细胞耐药基因MDR1的过表达，可能是引起放化疗交叉耐受性的原因之一。     

NU7026对肝癌细胞放射增敏作用及机制研究

为给研制新的抗癌和放射增敏药物提供理论依据,采用Westernblot检测DNA—PKcs在肝癌细胞中的表达水平及NU7026对DNA—PKcs活性的影响,以彗星实验表达检测细胞DNA受损的情况,微核实验观察染色体损伤,克隆形成实验观察对细胞株放射敏感性的影响。结果表明,DNA．PKcs在肝癌细胞中呈高表达,NU7026能抑制辐射所诱发的p-DNA—PKcs／S2056的活化,微核实验及彗星实验检测表明,NU7026能有效延长辐照后细胞的修复时间,并能明显降低放射后细胞的克隆形成率。提示NU7026对肝癌细胞有放射增敏作用,其作用机制与抑制DNA-PKcs活性有关。     

MG132联合X射线对非小细胞肺癌生长转移和凋亡的影响

探讨蛋白酶体抑制剂MG132联合X射线对非小细胞肺癌H1299细胞生长、转移侵袭和细胞凋亡的影响及机制。采用MTT法检测不同MG132浓度不同时间处理后肺癌H1299细胞的增殖;Transwell小室实验测定肺癌细胞的迁移和侵袭能力;流式细胞术测定肺癌细胞的凋亡;Western—blot法测定蛋白表达水平。结果表明,MG132能明显抑制H1299细胞的生长,并呈现剂量-效应和处理时间-效应关系;MG132在无毒性剂量下联合X射线可显著抑制H1299细胞的迁移及侵袭能力,并明显诱导细胞凋亡;MG132能明显降低H1299细胞的基质金属蛋白酶-2、-9的表达水平,降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平,同时增加凋亡蛋白Bax的表达水平。提示MG132可以显著抑制人非小细胞肺癌H1299细胞的生长,且在无毒性剂量下联合X射线可以明显降低癌细胞转移和侵袭能力,能显著加强X射线诱导的细胞凋亡作用。     

槲皮素对胶质瘤干／祖细胞的辐射致敏作用及其机制的初步探讨

本研究旨在探讨槲皮素对胶质瘤干／祖细胞辐射敏感性的影响及其机制。用槲皮素（Quercetin,Que）作用于已经建立的胶质瘤干／祖细胞系SU-．2,用WesternBlot和免疫荧光法检测自噬相关蛋白LC3的变化,以检测SU-2的自噬活性的改变。采用四甲基偶氮唑盐（3．（4,5．Dimethylthiaz01-2-y1）．2,5-diphenyltetrazoliumbromide,MTT）比色法和克隆形成实验比较各处理组对SU．2的增殖抑制作用;应用AnnexinV-FITC／PI流式细胞术检测不同因素处理SU．2后细胞凋亡情况的改变。实验结果表明：用槲皮素预先处理胶质瘤干／祖细胞系SU-2再辐照组较单纯辐照组的细胞增殖率降低∞〈0．05）,克隆形成率明显降低p〈0,05）,细胞凋亡率显著增加仞〈0．05）。这些结果提示,胶质瘤干／祖细胞的基础自噬活性很低,经槲皮素处理后,再经X线照射,胶质瘤干／祖细胞的自噬活性提高,辐射敏感性明显增加。     

CpG-ODN对辐射所致人小肠隐窝上皮细胞微核形成的影响

研究了CpG—ODN（CpG oligonucleotides）对非免疫细胞人小肠隐窝上皮细胞（HIEC）照射后微核变化的影响。采用MTT法检测不同浓度的CpG—ODN对HIEC的细胞毒性,检测CpG—ODN预处理后的HIEC细胞在不同剂量辐射后微核率和微核细胞率的变化。结果表明,CpG—ODN在0．00—1．25μmol／L浓度范围内对细胞的存活率没有显著影响,CpG—ODN能显著降低微核率和微核细胞率。实验结果提示CpG—ODN对HIEC有较小的毒性且能减少细胞辐照后的微核形成,具有一定的辐射保护作用。     

FOXM1在食管鳞癌中的表达及对其放射敏感性的影响

采用Real-time PCR检测40例食管鳞状细胞癌及相对应癌旁组织中FOXM1(Forkhead box M1)m RNA表达情况;免疫组织化学方法检测94例食管鳞状细胞癌组织中FOXM1蛋白的表达情况,分析其与鳞状细胞癌临床病理之间的关系;采用针对FOXM1的si RNA沉默ECA-109、TE-1细胞中FOXM1基因表达水平,通过免疫荧光染色、克隆形成实验检测FOXM1对食管鳞状细胞癌放射敏感性的影响。结果表明,FOXM1m RNA表达水平在食管癌组织中显著高于癌旁组织(p0.01),其蛋白表达水平与病人生存期负相关。si RNA能有效干扰ECA-109细胞中的FOXM1表达水平,FOXM1沉默细胞中X-射线诱发的γH2AX焦点显著多于对照细胞,FOXM1沉默细胞电离辐射后克隆形成能力显著低于对照细胞。结果提示,FOXM1在食管鳞癌中的表达增加,其表达水平与病人预后负相关;FOXM1基因沉默可显著增强细胞放射敏感性,因此,FOXM1有可能成为食管鳞癌的治疗靶点。