rhEGF对人皮肤成纤维细胞的促增殖作用

目的 研究重组人表皮生长因子(rhEGF)在不同浓度下对人皮肤成纤维细胞增殖的影响,为临床准确定量应用这两种因子修复创面、加速创面愈合提供理论依据. 方法 体外培养人皮肤成纤维细胞,分别用浓度为0,10,30,50,80,100,150 μg/L的rhEGF干预细胞,48 h后四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞的活性.选择最适浓度生长因子干预的细胞,用流式细胞仪检测细胞的DNA倍体情况. 结果 不同浓度的rhEGF分别对成纤维细胞干预48 h后,显示rhEGF在80μg/L浓度时MTT值最大;并检测出在最适浓度生长因子干预24 h后细胞大多处于DNA合成前期和合成期. 结论 rhEGF浓度在30-100μg/L之间对人皮肤成纤维细胞有明显的促增殖作用,其中以80μg/L较显著.     

PPN抑制HBV-DNA表达及复制的体外实验

目的：体外观察PPN对HBV－DNA表达、复制的抑制效果及其细胞毒性作用。方法：取10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml PPN水溶液分别加入2.2.15细胞株培养悬液中，8天后用放射免疫法检测上清液中HBeAg的含量，并计算HBeAg抑制率、细胞存活率、HBeAg抑制率为50％时的药物浓度（ID50）、实验组存活细胞为对照组的50％时的药物浓度（CD50）和治疗指数（TI）。PCR技术检测HBV－DNA阳性血清中加入160μg/ml PPN水溶液后对HBV－DNA复制的抑制作用。结果：当加入的PPN浓度为160μg/ml和80μg/ml时，HBeAg抑制率分别为89．8％和82．4％，细胞存活率分别为98．7％和99．2％；HBV－DNA阳性血清中加入PPN后可有效抑制其复制。结论：PPN可有效抑制HBV－DNA的表达和复制，且对靶细胞（肝细胞）无细胞毒作用，有进一步研究和推广应用的价值。     

氧化低密度脂蛋白对大鼠心肌成纤维细胞胶原的影响

目的 探讨氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)对大鼠心肌成纤维细胞胶原合成的影响.方法 体外培养乳鼠心肌成纤维细胞,加入ox-LDL(10、20、50、100μg/ml)干预24 h,3H-胸腺嘧啶核苷掺人法观察细胞DNA合成,3H-脯氨酸掺入法观察胶原的合成,酶谱法测定基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9活性,Western blot检测MMP-2和MMP-9蛋白表达水平,RT-PCR检测MMP-2、MMP-9的mRNA表达.结果 和对照组比较,ox-LDL作用于心肌成纤维细胞24 h后,呈浓度依赖性促进细胞DNA合成,同时抑制细胞胶原合成.ox-LDL显著增加MMP-2和MMP-9活性,但各组间作用无明显区别;同时MMP-2和MMP-9蛋白表达也显著性增加,以100μg/ml组作用最强.50μg/ml ox-LDL能显著增加MMP-2和MMP-9的mRNA表达,100μg/ml组作用更强.结论 ox-LDL作用于心肌成纤维细胞能减少胶原的合成并增加胶原的降解,提示其在心肌重构过程巾起一定的作用.     

维拉帕米抑制培养细胞DNA、RNA和蛋白质合成的作用

为探讨钙拮抗剂对细胞大分子物质的代谢影响,本文观察了维拉帕米对人成纤维细胞(2BS)和猴内皮细胞(RF/6A)DNA,RNA和蛋白质合成的作用.维拉帕米抑制2BS细胞DNA和RNA合成的作用为浓度依赖性,ID_(50)分别为12.3和22μg/ml.抑制RF细胞DNA和蛋白质合成的ID_(50)分别为34.4和49.6μg/ml.     

钾通道与肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡关系中钙通道所起作用的研究

目的:观察钾通道与肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖和凋亡关系中钙通道所起的作用.方法:将PASMC分为对照、钾通道阻断剂四乙胺TEA (开放剂比那地尔Pin)、钾通道阻断剂(开放剂) 钙通道阻断剂硝苯地平Nif(开放剂Bay K8644)组,采用非核素增殖试剂盒、3H-TdR掺入测定细胞增殖.将PASMC分为对照、钾通道开放剂、钾通道开放剂 钙通道开放剂组,采用细胞凋亡检测试剂盒测定细胞凋亡.结果:与对照组相比,10～20 mmol/L的钾通道阻断剂TEA显著增加PASMC细胞数(P<0.01),15～30 mmol/L TEA显著增加DNA合成(P<0.05, P<0.01).TEA 5 μmol/L Nif组中只有20 mmol/L TEA使DNA合成增加(P<0.05),其余浓度组与对照组均无统计学差异.TEA Nif组与TEA组相比,TEA浓度在10～25 mmol/L时2组细胞数相差显著(P<0.01),15～30 mmol/L TEA时2组DNA合成相差显著(P<0.05,P<0.01).与对照组相比,25～500 μmol/L Pin显著减少PASMC细胞数和DNA合成(P<0.01).Pin 1 μmol/L Bay组与Pin组相比,当Pin浓度为25～500 μmol/L时2组PASMC细胞数相差显著(P<0.01),当Pin浓度在50～500 μmol/L时DNA合成相差显著(P<0.01).Pin Bay组与对照组相比,50～500 μmol/L的Pin仍能显著减少PASMC细胞数(P<0.01), 25～500 μmol/L的Pin显著减少DNA合成(P<0.01).与对照组相比,50～500 μmol/L的Pin显著增加PASMC凋亡率(P<0.05,P<0.01).Pin 1 μmol/L Bay组与Pin组相比,细胞凋亡率无显著差异.结论:钙通道在钾通道与PASMC增殖关系中起重要作用,但在钾通道与PASMC凋亡关系中无明显作用.     

藻蓝蛋白对氨甲喋呤和顺铂的体外增效研究

用MTT法在体外培养的喉癌Hep-2细胞中观察了藻蓝蛋白对氨甲喋呤和顺铂细胞毒性的增效作用，结果表明：藻蓝蛋白与3种浓度的氨甲喋呤合用后显著增强氨甲喋呤的毒性，其增敏效果近似于异博定。藻蓝蛋白与0.1μg/ml，1μg/ml顺铂联合应用后能显著增强顺铂的细胞毒性，但对10μg/ml顺铂的增敏作用不明显。     

壳聚糖基因纳米粒子对L02细胞的作用

目的研究壳聚糖基因纳米粒子(CNP)、精氨酸化壳聚糖基因纳米粒子(ANP)和十六烷基化壳聚糖基因纳米粒子(HNP)对人正常肝细胞系L02细胞的作用。方法采用复凝聚方法制备CNP、ANP和HNP,粒度及zeta电位分析仪进行纳米粒子表征。将浓度分别为5、10、30、50μg/ml(以DNA含量计)的各种纳米粒子与L02细胞共育,采用MTT法进行细胞毒性评价,流式细胞分析技术进行细胞凋亡检测。结果CNP、ANP和HNP的zeta电位为12.10～14.63mV,粒径约为148.07～179.47nm。当各基因纳米粒子浓度为30μg/ml时,细胞存活率开始降低;达到50μg/ml时,存活率降至最低。当各基因纳米粒子浓度为30μg/ml时,可以诱导L02细胞发生凋亡,随纳米粒子浓度的升高,凋亡率升高。结论当达到一定浓度时,CNP、ANP和HNP对L02具有一定细胞毒性,可诱导细胞产生凋亡。     

藻蓝蛋白对氨甲喋呤和顺铂细胞毒性的增效作用研究

作者用MTT法在体外培养的喉癌Hep—2细胞中观察了藻蓝蛋白对氨甲喋呤和顺铂细胞毒性的增效作用,结果表明,藻蓝蛋白的浓度与细胞存活率之间有着良好的线性关系,它在0.1μ/ml浓度下对Hep—2细胞没有明显毒性,与三种浓度的氦甲喋呤合用后显著增强氨甲喋呤的毒性,随着氨甲喋呤浓度提高,其增效作用亦增强,将藻蓝蛋白与异搏定比较,其增敏效果近似于异搏定。藻蓝蛋白与0.1μg/ml、1μg/ml顺铂联合应用后能显著增强顺铂的细胞毒性,但对10μg/ml顺铂的增敏作用不明显。     

中药HB对喉癌Hep-2细胞的抑制作用及其机制研究

目的：研究蜈蚣提取物HB对喉癌Hep-2细胞生长的抑制作用及其作用机制。方法：MTT法观察不同浓度的HB对Hep-2细胞的生长抑制情况,采用激光扫描共聚焦技术分析HB作用Hep-2细胞48h后细胞内钙,DNA含量的变化情况。结果：Hep-2细胞用10μg/ml,100μg/ml的HB处理72h后,细胞存在活率显著降低;用10μg/ml,和20μg/ml的HB处理Hep-2细胞48h后,细胞内钙含量显著升高（P＜0．001）,DNA含量显著降低（P＜0．001）,结论：中药HB在体外对Hep-2细胞的生长有明显的抑制作用,机制与降低细胞内DNA含量,细胞内钙超载有关。     

丹参对体外关节软骨细胞抗过氧化氢损伤实验研究

目的观察过氧化氢(H2O2)对体外培养关节软骨细胞的损伤效应及丹参(salvia miltiorrhiza,SM)的干预作用。方法兔原代膝关节软骨细胞培养,Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光检测鉴定。将培养的软骨细胞随机分为正常组、损伤对照组(损伤组)和丹参组。损伤组用0.1mmol/L过氧化氢(终浓度)制造体外软骨细胞损伤模型,丹参组将不同浓度的丹参(终浓度0.01g/L、0.05g/L、0.25g/L)于过氧化氢损伤前30min加入,分别测定各组细胞活力(MTT法)、培养液上清中丙二醛(MDA)含量(硫代巴比妥酸法)、总蛋白含量(考马斯亮蓝法)及细胞DNA合成计数(氚标记脱氧嘧啶核苷酸法,3H-TdR法)。结果损伤组细胞活力显著降低、培养液上清MDA含量显著上升、蛋白含量及细胞DNA合成显著下降。丹参组细胞活性较损伤组显著升高、培养液上清MDA水平显著降低、蛋白含量及细胞DNA合成显著上升。结论丹参能抵抗过氧化氢造成的体外软骨细胞损伤。     

聚砜膜空心纤维透析器细胞毒性研究

目的应用聚砜膜空心纤维透析器浸提液配制的细胞培养液培养小鼠成纤维细胞L929(4×104/ml),观察其对L929细胞生长的影响。方法细胞计数法和WST-1法。结果和对照组相比,两种试验方法实验组的细胞均生长良好,细胞增殖度均大于75%,为1级反应。结论根据国家标准进行评价,该聚砜膜空心纤维透析器对L929细胞形态、生长和增殖没有影响,无细胞毒性作用,具有良好的生物相容性,符合生物材料应用要求。     

蜕皮甾酮在体外条件下对人骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的 分离培养并鉴定人骨髓间充质干细胞(hMSC),观察不同剂量蜕皮甾酮(EDS)对hMSC增殖的影响.方法 密度梯度离心法获取hMSC,检测第2代细胞CD44、CD105、CD34及CD29的表达以鉴定其为hMSC.设不同浓度EDS的细胞培养体系(10、25、50和100μg/ml)与对照组(单纯hMSC培养基,无EDS)作对比,MTT比色法测定hMSC的增殖活力,并行流式细胞周期观察.结果 EDS各浓度组hMSC的MTT吸光度值与对照组比较均有明显差异(P<0.01);EDS浓度为25 μg/ml时hMSC MTT吸光度值显著高于其余各组(P<0.01);在EDS浓度为10、50、100 μg/ml时,组间吸光度值未见明显差异(P>0.05),但显著高于对照组(P<0.01).流式细胞周期显示EDS浓度为25μg/ml时hMSC培养体中细胞S期细胞所占比例、增殖指数均明显高于对照组.结论 EDS在一定浓度范围内对体外培养条件下的hMSC具有生长促进作用,该作用在EDS浓度为25 μg/ml时最为显著,但是EDS促进hMSC增殖的作用不随剂量的增加而增加.     

微量元素硒对HL—60细胞凋亡的诱导及bcl—2／bax基因的表达调控

目的：研究微量元素硒诱导人类白血病细胞凋亡的作用及其相关的基因调控。方法：体外培养人急性早幼粒白血病细胞（HL－60）,加入硒使其终浓度分别为0、0．1μg/ml、1μg/ml、2μg/ml,作用48h后收集细胞,分别作形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞光度计分析、TUNEL及bcl-2/bax基因蛋白表达的细胞化学检测。结果：上述多项指标的分析结果均证明元素硒能诱导癌细胞凋亡。通过流式细胞光度计检测到对照组、0．1μg/ml、1μg/ml、2μg/ml加硒组的凋亡百分率分别为4．43％、8．36％、37．91％、63．47％。这说明浓度为0．1μg/ml的硒没有明显的诱导癌细胞凋亡的作用,而浓度为1μg/ml、2μg/ml时凋亡细胞显著增多并呈剂量依赖关系。随着凋亡细胞的增多,bcl-2基因表达相应减弱,而bax基因表达相应增强。结论：微量元素硒可诱导HL－60细胞凋亡,并且呈剂量依赖关系,凋亡的发生受bcl-2/bax基因调控。     

不同浓度的盐酸千金藤碱对人鼻咽癌细胞的抑制作用实验研究

目的研究探讨不同浓度盐酸千金藤碱对人鼻咽癌细胞CNE-1/CNE-2和5-8F的抑制作用。方法选用鼻咽癌高分化鳞癌细胞株CNE-1和鼻咽癌低分化鳞癌细胞株CNE-2、5-8F作为实验组,人脐静脉内皮细胞株EVC-304为正常细胞对照组,利用MTT法检测不同浓度的盐酸千金藤碱对3种鼻咽癌细胞和对照组细胞的增殖影响;利用Hoechst 33342染色法检测不同浓度的盐酸千金藤碱对3种鼻咽癌细胞和对照组细胞的凋亡影响;利用流式细胞术检测盐酸千金藤碱对3种鼻咽癌细胞和对照组细胞的细胞周期影响。结果不同浓度的盐酸千金藤碱对3种鼻咽癌细胞有量效相关的抑制增殖作用,EC50分别为9.924μg/ml(CNE-1),7.068μg/ml(CNE-2),9.905μg/ml(5-8F),浓度为50μg/ml时抑制率达到95%以上,与对照组正常细胞相比差异均有统计学意义(P<0.01);不同浓度的盐酸千金藤碱3种鼻咽癌细胞有量效相关的诱导凋亡的作用,到12.5μg/ml时,处理组肿瘤细胞与阴性组相比染色质浓缩成斑块状,差异显著(P<0.05);同时,12.5μg/ml终浓度的盐酸千金藤碱处理不同的鼻咽癌细胞48 h后,与阴性对照组相比,可见实验组G0/G1期鼻咽癌细胞显著增多,S期及G2/M期明显减少,差异有统计学意义(P<0.05),表明盐酸千金藤碱能抑制其DNA合成,改变细胞周期。结论盐酸千金藤碱对3种鼻咽癌细胞均有抑制作用,可能机制包括诱导其凋亡并且改变其细胞周期。     

氧化型辅酶Ⅰ抗辐射损伤作用及其量效关系的初步实验

目的 探讨氧化型辅酶Ⅰ(NAD+)抗辐射损伤作用及其量效关系.方法 L02人正常肝细胞株加入含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中常规方法培养,X线照射后和在照射后即刻加入NAD+,采用MTT法检测细胞活性,TUNEL法检测细胞凋亡,观察X线照射对L02人正常肝细胞的辐射损伤,并观察NAD+对受照射L02肝细胞辐射损伤的影响作用及其与NAD+浓度的关系.结果 L02人正常肝细胞受X线照射后细胞损伤随照射吸收剂量的增大而加重,受照射后24 h细胞抑制作用最显著,细胞损伤多表现为细胞凋亡;加入NAD+可提高受照射细胞存活率,其作用在NAD+终浓度为100～1000μg/ml范围内与浓度呈正相关,在浓度大于1000 μg/ml后,加大浓度并不再显著增加受照射细胞的存活率.结论 NAD+具有一定的抗细胞辐射损伤作用,其作用在一定范围内与其浓度呈正相关关系.     

己烯雌酚影响培养的睾丸引带细胞收缩及其信号机制

目的 探讨JNK信号转导通路在外源性雌激素对胎鼠睾丸引带细胞影响中的作用.方法 3 日龄雄性昆明小鼠的睾丸引带组织,进行原代细胞培养后传代.将传代细胞随机分组.实验组分DES(浓度10μg/L;0.02μg/L)两组;DES(浓度10μg/L;0.02μg/L)+SP600125(JNK抑制剂)两组,持续作用24h,应用细胞免疫荧光技术检测细胞内F-actin的表达.结果 引带细胞在浓度10μg/L的DES作用后形态变小,胞质突起明显减少,F-actin显示在细胞周边肌动蛋白丝带模糊,结构紊乱,明显解聚.在DES作用同时加入JNK抑制剂后,浓度10μg/L的DES组细胞形态变化小.且在DES(浓度10μg/L;0.02μg/L)组中F-actin显示在胞质内呈局部性表达增强,应力纤维排列紊乱或部分解聚断裂消失.结论 JNK信号通路参与了DES对细胞作用后的细胞形态的维持和骨架构建.     

二十二碳六烯酸对人胆囊癌GBC-SD细胞系生长的抑制作用

目的探讨二十二碳六烯酸（DHA）对体外培养的人胆囊癌GBC-SD细胞增殖的影响。方法采用体外细胞培养的方法,在处于指数生长期的GBC-SD细胞培养剂RPMI 1640中分别添加12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml的DHA,培养24～72小时后,采用噻唑蓝法（MTT法）检测GBC-SD细胞的增殖情况,光镜下观察细胞形态变化。采用DNA琼脂糖凝胶电泳、Annexin V-FITC/PI染色荧光显微镜检测GBC-SD细胞的凋亡情况。结果经12.5μg/ml的DHA作用24～72小时后GBC-SD细胞的A值与对照组比较差别无统计学意义（P〉0.05）,光镜下细胞形态无明显改变.经25μg/ml、50μg/ml的DHA作用24～72小时后GBC-SD细胞的A值与对照组比较差别有统计学意义（P〈0.05）,光镜下见细胞皱缩、核染色质凝聚、边集。细胞经25μg/ml、50μg/ml的DHA作用24小时后,DNA琼脂糖凝胶电泳显示DNA裂解片段出现阶梯状条带,经Annexin V-FITC/PI染色荧光显微镜下观察与对照组比较见较多绿色荧光。结论DHA可以抑制人胆囊癌GBC-SD细胞系的增殖并诱导其凋亡。     

脂多糖致大鼠急性肺损伤早期Ⅰ型前胶原羧基端肽的表达

目的：观察脂多糖（LPS）致大鼠急性肺损伤（ALI）早期是否存在肺纤维增生,探讨其在ALI发病机制中的作用。方法：将27只SD大鼠随机分成3组,其中对照组为气管内滴注NS（生理盐水）12h后取材,LPS1组、LPS2组为气管内滴注LPS 1.0ml/kg（浓度为100μg/ml）后分别于12h、24h取材。用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法测定血清及肺泡灌洗液（BALF）中Ⅰ型前胶原羧基端肽（PⅠCP）的浓度。结果：LPS2组大鼠血清PⅠCP浓度为（64.75±11.97）μg/L显著高于对照组（12.38±3.59）μg/L和LPS1组（13.96±4.30）μg/L（P〈0.05）,而LPS1组和对照组间差异无显著性（P〉0.05）;LPS2组大鼠BALF中PⅠCP浓度为（35.26±3.32）μg/L显著高于对照组（6.90±1.99）μg/L和LPS1组（6.92±2.50）μg/L（P〈0.05）,而对照组和LPS1组间差异无显著性（P〉0.05）。结论：LPS致大鼠ALI后24h血清及BALF中PⅠCP浓度显著增高提示ALI早期肺纤维增生存在。     

黄芪注射液对日本血吸虫成虫细胞鸟氨酸脱羧酶活性作用的研究

目的：观察黄芪注射液作用后日本血吸虫成虫细胞鸟氨酸脱羧酶活性的变化。方法：细胞接种后1周时，分别用浓度为2μg/ml、5μg/ml和8μg/ml的黄芪注射液处理24小时，然后用RPMI－1640加10％小牛血清的培养基培养。用分光光度法测定细胞鸟氨酸脱羧酶活性。结果：浓度为2μg/ml的黄芪注射液处理后第4周时细胞鸟氨酸脱羧酶活性显著增高。结论：黄芪注射液有增强日本血吸虫成虫细胞鸟氨酸脱羧酶活性的作用。