黄芪对体外B组柯萨奇病毒持续感染抑制作用的研究

目的：探讨黄芪水提液对持续感染细胞模型中CVB3、CVB5的作用。方法：不同浓度黄芪水提液作用于持续感染CVB3、CVB5的ECV304细胞模型，原位ELISA，细胞保护试验，病毒滴度测定了解持续感染细胞模型中CVB3、CVB5增殖情况的改变。结果：经黄芪作用后，CVB3-ECV304和CVB5-ECV304持续感染细胞模型病毒抗原表达减少，细胞模型培养上清液中病毒含量减少，致Vero细胞病变程度减轻。结论：黄芪可体外抑制持续感染细胞模型中CVB3、CVB5的增殖。     

反义寡核苷酸抑制柯萨奇病毒B_3致病作用的实验研究

目的 :观察在细胞培养系统和小鼠体内反义寡核苷酸 (AODN)抑制柯萨奇病毒B3(CVB3)致病作用。方法 :观察细胞病变效应 (CPE) ,常规微量法滴定病毒的50 %组织细胞感染量 (TCID50)以及观察感染小鼠心肌组织的病理改变。结果 :1 AODN可推迟和减轻CVB3 感染细胞CPE ,且随AODN浓度增高 ,对CPE的抑制作用增强 ;培养上清中病毒滴度随AODN浓度升高而降低。2 随AODN剂量增加 ,感染小鼠心肌组织病毒滴度逐渐降低 ;心肌细胞病变程度逐渐减轻 ;心肌炎发病率也逐渐降低。结论 :AODN可能通过抑制CVB3 复制来保护Vero细胞和小鼠心肌组织抵抗感染。     

bFGF反义寡核苷酸对大鼠肺成纤维细胞增殖信号通路的影响

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)反义寡核苷酸(AODN)对大鼠肺成纤维细胞增殖、转化信号通路的影响。方法:分离成年大鼠肺成纤维细胞,分为4组:对照组(未转染肺成纤维细胞);TGF-β1组(未转染肺成纤维细胞+5ng/ml TGF-β1刺激);TGF-β1+AODN组(转染AODN肺成纤维细胞+5ng/ml TGF-β1刺激);TGF-β1+RODN(正义寡核苷酸)组(转染RODN肺成纤维细胞+5ng/ml TGF-β1刺激)。每组设3复孔,并作细胞爬片,镜下计数肺成纤维细胞数量,绘制生长曲线。MTT比色法测定肺成纤维细胞增殖率。免疫细胞化学方法检测肌成纤维细胞特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)。通过ELISA法检测培养液中bFGF、CTGF及Ⅰ型胶原蛋白含量。用RT-PCR法分析肺成纤维细胞Smad3 mRNA、Smad7 mRNA、Ⅰ型胶原mRNA表达水平。结果:1细胞计数显示:TGF-β1+RODN组各时段成纤维细胞的数目均较对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组明显增多(P<0.05);TGF-β1+AODN组中成纤维细胞增殖数比TGF-β1组明显减低(P<0.05)。2MTT结果显示:TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞光密度值明显高于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P<0.05);TGF-β1+AODN组中肺成纤维细胞光密度值明显比TGF-β1组减低(P<0.05)。3免疫细胞化学染色结果显示:TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞与对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组比较,α-SMA染色的平均光密度值(IOD)明显增加(P<0.05);TGF-β1+AODN组中肺成纤维细胞α-SMA染色的平均光密度值(IOD)比TGF-β1组明显减低(P<0.05)。4 ELISA法检测结果显示:在TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞培养液中bFGF、CTGF及Ⅰ型胶原蛋白含量明显高于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P<0.05);TGF-β1+AODN组肺成纤维细胞培养液中bFGF、CTGF及Ⅰ型胶原蛋白含量比TGF-β1组明显减低(P<0.05)。5RT-PCR法检测结果显示:在TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞Smad3mRNA及Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达明显高于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P<0.05);TGF-β1+AODN组肺成纤维细胞Smad3mRNA及Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达明显比TGF-β1组明显减低(P<0.05);TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞Smad7mRNA表达明显低于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P<0.05);TGF-β1+AODN组肺成纤维细胞Smad7 mRNA表达比TGF-β1组明显增加(P<0.05)。结论:bFGF反义寡核苷酸可抑制肺成纤维细胞的增殖、转化及胶原合成,bFGF反义寡核苷酸可能通过下调TGF-β1-Smad信号通路来发挥作用。     

清咽滴丸抗柯萨奇病毒B3,B5的实验研究

目的：探讨清咽滴丸在细胞水平及血清水平对柯萨奇病毒B3、B5（CVB3、CVB5）的抑制作用。方法：利用CPE法和MTT法在细胞水平上检验清咽滴丸抗CVB3、CVB5感染的作用;观察不同时间段的含药血清抑制CVB3、CVB5的情况,进而在血清水平上验证清咽滴丸的抗病毒作用。结果：（1）细胞水平上,清咽滴丸在7.81×10-5g/mL时对CVB3的抑制作用最好,在3.91×10-4g/mL时对CVB3的治疗作用最强。血清水平上,当血药浓度1：10且在灌胃65 min时对CVB3呈现最好的抑制作用,抑制率达到58.74%（P〈0.05）。（2）细胞水平上,清咽滴丸在7.81×10-5 g/mL时对CVB5的抑制作用最好,在3.91×10-5 g/mL时对CVB5的治疗作用最强。血清水平上,当血药浓度1：10且在灌胃85 min时对CVB5呈现最好的抑制作用,抑制率达到74.23%（P〈0.05）。结论：清咽滴丸有一定的抗柯萨奇病毒B3、B5的功效。     

端粒酶反义寡核苷酸抑制及联合顺铂治疗子宫内膜癌的实验研究

目的研究端粒酶催化亚基反义寡核苷酸在体内、外对子宫内膜癌增殖的抑制作用,探讨反义抑制端粒酶治疗子宫内膜癌的可行性。方法以端粒酶催化亚单位基因(hTERT)为靶点设计合成硫代反义寡核苷酸(AODN),评价AODN对子宫内膜癌HEC-1A细胞株的抑制作用。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测AODN对细胞增殖能力及细胞生长的影响;用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)、定量端粒酶重复扩增法(TRAP)检测AODN对hTERT基因转录及细胞端粒酶活性。建立子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型,在体内观察AODN的作用特征。结果不同浓度的AODN转染细胞后,均不同程度的影响细胞的生长。AODN作用后细胞的端粒酶活性及hTERT mRNA的表达显著降低,且这种抑制作用具有明显的时间和剂量依赖性。低、高剂量AODN两组的对荷瘤鼠肿瘤生长的抑制率分别为34.20％和89．21％,顺铂联合AODN抑瘤率达75．30％。硫代AODN治疗后端粒酶活性下降87.32％。结论hTERT-AODN能够有效地抑制子宫内膜癌细胞生长,且与细胞毒性药物顺铂有很好的协同增效作用,hTERT基因的反义治疗有望成为内膜癌预防和治疗的新型药物。     

PDGFR-β反义寡核苷酸对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　研究血小板衍化生长因子 β受体 (PDGFR- β)反义寡核苷酸 (AODN)对血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响 .方法　建立大鼠血管平滑肌细胞体外增殖模型 .将细胞分为反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸组、无义寡核苷酸组和空白对照组 ,其中反义组按浓度又分为 1,2 .5 ,5 ,10和 15μmol· L- 1 5小组 .在加药后 2 4,48和 72 h以流式细胞仪测定细胞周期 ,免疫细胞化学染色分析细胞核增殖抗原的表达 ,MTT(四唑盐 )比色法测定细胞增殖活力 .结果　 10μmol·L- 1 PDGFR- β AODN干预 VSMC48h后 ,处于 DNA合成前期 (G0 / G1 )细胞数分数 (0 .70 )高于空白对照组 (0 .0 7,P <0 .0 5 ) ;PCNA免疫细胞化学染色发现以 5～ 15μmol· L- 1PDGFR- β AODN干预 48h后 VSMC各组胞核染色强度为2 0 .4%～ 6 .4%明显弱于空白组 (73.8% ) ,正义组 (72 .9% )和无义组 (75 .6 % ) (P<0 .0 5 ) ;10μmol· L- 1 PDGFR-β AODN作用 48h后 VSMC的增殖抑制率为 6 6 .7% ,高于正义组 (8.1% ) ,错义组 (11.8% )和 5 μmol· L- 1 AODN组 (4 5 .4% ) (P<0 .0 5 ) ;同时 10μmol· L- 1 AODN组 48h增殖抑制率与 2 4h(9.1% )相比明显增加 (P<0 .0 5 ) .结论　 PDGFR- β AODN对VSMC增殖有明显抑制作用 ,并且呈时间和浓度依赖性 .     

5-ALA治疗和hTERT mRNA的反义寡核苷酸联合应用对人卵巢癌细胞的杀伤作用及其机制

目的：观察5-氨基乙酰丙酸（5-ALA）光动力治疗（PDT）和人端粒酶催化亚单位 (hTERT) mRNA的反义寡核苷酸（ASODN)联合应用对人卵巢癌3AO细胞的增殖抑制及促凋亡作用,探讨两种方法联合应用协同促进对人卵巢癌3AO细胞的杀伤作用机制。方法：采用MTT法筛选不同浓度5-ALA 和激光能量照射对人卵巢癌3AO细胞增殖抑制作用的最佳组合参数; RT-PCR法检测hTERT ASODN和SODN转染后hTERT mRNA表达水平的变化。将人卵巢癌3AO细胞分为空白
对照组、hTERT ASODN转染组、hTERT SODN转染组、5-ALA PDT组、hTERT ASODN转染+5-ALA PDT组和hTERT SODN转染+5-ALA PDT组,应用MTT法检测各组人卵巢癌3AO细胞增殖抑制率;应用膜联蛋白V-硫氰酸荧光素(AnnexinV-FITC)/碘化丙啶(PI)双染色结合流式细胞术检测
各组人卵巢癌3AO细胞凋亡率。结果：5-ALA PDT对人卵巢癌3AO细胞的增殖抑制作用随着光敏剂浓度的增加和激光能量的增大而增加(P<0.05);不同浓度hTERT ASODN转染人卵巢癌3AO细胞24 h后,hTERT mRNA表达水平呈浓度依赖性下调(P<0.05),而hTERT-SODN对人卵巢癌3AO细胞hTERT mRNA表达无显著影响(P>0.05)。hTERT ASODN转染+5-ALA PDT (5-ALA浓度为0.5 mmol•L-1,激光能量密度为2.50 J•cm-2)组人卵巢癌3AO细胞的增殖抑制率高于5-ALA PDT组和hTERT ASODN组(P<0.05)。hTERT ASODN转染+5-ALA PDT组人卵巢癌3AO细胞的凋亡率为29.28％,显著高于hTERT ASODN 转染组（12.79％）和5-ALA PDT组（21.19％)(P<0.05）。结论：hTERT ASODN转染与5-ALA PDT联合治疗可协同增强对人卵巢癌3AO细胞的增殖抑制作用,其机制可能与联合作用促进细胞凋亡有关联。     

CVB3感染对固有免疫识别受体MDA-5表达的影响及其意义

目的研究柯萨奇B3病毒(coxsackievirus group B type3,CVB3)感染对固有免疫识别受体—黑色素瘤分化相关基因5(melanoma differentiation-associated gene-5,MDA-5)表达的影响及其意义。方法采用RT-PCR扩增CVB3正负链以确证感染成功,CVB3感染正常HeLa细胞后用RT-PCR的方法检测MDA-5和IFN-β的表达变化,RT-PCR检测CVB3感染IFN-α处理过细胞MDA-5的表达情况,将细胞分为对照组(转染空载体)和MDA-5组(转染MDA-5表达质粒pEF-BOS-MDA-5),将空载体或pEF-BOS-MDA-5质粒与IFN-β启动子荧光报告质粒和作为内参照的pc MV-lacZ质粒瞬时转染进两组细胞,CVB3感染8h后收集细胞检测IFN-β启动子活性变化。结果与未感染组相比,CVB3感染下调固有免疫识别受体MDA-5及IFN-β的表达;IFN-α可明显上调MDA-5的表达,而CVB3感染抑制IFN-α的这种上调作用;CVB3感染下调MDA-5介导的IFN-β启动子的活化。结论CVB3感染能下调固有免疫识别受体MDA-5的表达并抑制MDA-5对IFN-β启动子的活化,从而下调IFN-β的表达,这可能是病毒性心肌炎中病毒逃逸机体免疫应答的机制之一。     

PKCα反义核酸对肺癌A549 细胞增殖的影响

目的 探讨聚乙烯亚胺(PEI)介导的人蛋白激酶Cα(PKCα)基因反义寡核苷酸(ASODN)对人肺癌A549细胞生长增殖及PKCα基因表达的影响.方法 以PEI介导PKCα ASODN,随机寡核苷酸(RODN)分别转染A549细胞,采用WST法和克隆形成抑制实验分析细胞生长增殖抑制效果;RT-PCR检测PKcd mRNA的表达水平;Western blotting检测PKCα蛋白的表达水平.结果 PEI介导的PKCaASODN转染A549细胞后,细胞牛长增殖和克隆形成均受到抑制(P<0.05),并呈浓度依赖关系,其抑制率明显高于PEI或PEI介导的RODN组;RT-PCR和Westernblotting结果均表明:PEI 介导的PKCαASODN转染A549细胞能明显抑制PKCα的表达,与空白对照组、PEI或PEI介导的RODN转染组相比,有统计学差异(P<0.05).结论 PEI介导的PKCα反义核酸能下调PKCα基因的表达,显著抑制A549细胞生长和增殖.     

甲基强的松龙对柯萨奇病毒B3m体外作用的研究

目的：探讨甲基强的松龙体外在无免疫因素影响下与柯萨奇病毒B3m(CVB3m)作用情况。方法：首先测定甲基强的松龙对Hela细胞的毒性，并以微量法及全量法从最大无毒浓度开始2倍系列稀释后作用于感染CVB3m的Hela细胞，并收集各稀释度上清液进行病毒半数感染量（TCID50）重新滴定。结果：（1）甲基强的松龙高浓度（＞1．25mg/ml)对Hela细胞有毒性作用，最大无毒浓度为1．25mg/ml；（2）低家度甲基强的松龙可促进细胞生长，且在1．25mg/ml,0.625mg/ml有限制病毒复制作用，其细胞病变及培养上清液的TCID50均低于病毒对照孔，抑制倍数分别为249和31．8倍。结论：甲基强的松龙本身无直接促进病毒增殖作用，低浓度反而保护细胞，并可借助体内免疫系统，发挥免疫抑制作用，在柯萨奇病毒感染时，适时、适量应用激素利于病情恢复。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值

目的 探讨降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值.方法 选取住院治疗的细菌性肺炎患者72例,根据治疗效果分为治疗有效组(有效组)47例和治疗无效组(无效组)25例,对治疗有效组和无效组中的降钙素酶原变化及影响肺炎治疗效果的危险因素进行分析.结果 有效组治疗后3天及治疗后7天的降钙素酶原显著低于无效组的患者(P＜0.05);年龄＞65岁、心功能≥3级、COPD、糖尿病、肺部双侧受累(X线示)、菌血症、感染性休克和3天内降钙素酶原变化率＜30％是影响细菌性肺炎治疗效果的危险因素;感染性休克、肺部双侧受累、3天内降钙素酶原变化率＜30％及心功能≥3级是影响细菌性肺炎治疗效果的独立危险因素.结论 测定降钙素原变化率对细菌性肺炎的疗效评估具有重要临床意义,可在临床推广应用.     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。