阿昔洛韦抗柯萨奇病毒B3作用的初步观察

目的观察阿昔洛韦抗柯萨奇病毒B3(CVB3)的作用.方法通过活细胞计数评价阿昔洛韦对Hep-2细胞的细胞毒作用;通过观察病毒感染后的细胞病变效应计算病毒抑制率,评价阿昔洛韦在Hep-2细胞培养中的抗CVB3作用.结果阿昔洛韦对Hep-2细胞的半数细胞毒性浓度(TC50)在0.2mg/mL以上;CVB3的半数抑制浓度TC50为25μg/mL,治疗指数为8.4.结论阿昔洛韦安全性较高并能有效地抑制柯萨奇病毒B3在Hep-2细胞中的增殖.     

重组蓝藻抗病毒蛋白N抗柯萨奇B3病毒的体外实验研究

目的:研究重组蓝藻抗病毒蛋白N (CV-N)体外抗柯萨奇病毒B组3型(CVB3)的作用. 方法:通过观察药物毒性、细胞病变效应(CPE)、MTT比色法检测细胞增殖,判断CV-N的细胞毒性及抗病毒效果. 结果:CV-N对Vero细胞毒性较低(TC50为359 μg/ml),对CVB3无直接灭活作用,对阻止CVB3病毒吸附细胞的作用优于病毒唑,而对病毒的复制无明显抑制作用. 结论:CV-N作用于CVB3病毒感染的早期,有可能作为柯萨奇病毒感染的预防药物.     

黄芩苷体外抑制柯萨奇病毒B组3型感染的机制研究

目的：探讨黄芩苷（baicalin,BA）体外抑制柯萨奇病毒B组3型（coxsackie virus B3,CVB3）感染的效用及机制。方法：CellTiter 96? AQueous 单溶液试剂检测Hela细胞存活率,病毒空斑实验检测病毒滴度,CHOD?PAP法和ACS?ACOD法分别用于检测细胞中游离脂肪酸（free fatty acids,FAA）和胆固醇（cholesterol,CHO）的含量,RT?PCR检测脂类代谢关键分子脂肪酸合成酶（fatty acid synthase,Fasn）和乙酰?CoA羧化酶（acetyl?CoA carboxylase,ACC）的mRNA表达,Western blot检测CVB3病毒衣壳蛋白VP1表达。结果：BA在低于100 μg/mL时对Hela细胞无明显毒性效用,但能呈剂量依赖地抵抗CVB3诱导细胞病变,显著减少病毒滴度和抑制CVB3/VP1的表达;CVB3感染能显著增加细胞中FFA和CHO含量以及Fasn和ACC的mRNA表达,但是经BA处理后,能显著减少这些脂类代谢物质的含量;棕榈酸预处理细胞,能恢复BA处理组中CVB3/VP1的表达。结论：BA能通过调节细胞脂类合成来发挥抗CVB3感染的效用。     

住院儿柯萨奇病毒B组感染状况的分析

目的：分析近3年院内柯萨奇病毒B组感染状况,认识柯萨奇病毒B组与小儿疾病的内在关系。方法：观察了796例病儿,其中上呼吸道感染218例、肺炎179例、哮喘106例、心肌炎155例、紫癜19例,其他疾病89例,采用ELISA方法检测柯萨奇病毒B组（CVB）的抗原（CVB－Ag)和抗体IgM(CVB-IgM)。结果：（1）上呼吸道感染组和肺炎组CVB阳性率分别是47．25％和48．04％,两组间无统计学差异;（2）哮喘、心肌炎和紫癜儿CVB阳性率分别是62．265、61．25％和68．42％,三组间比较无统计学差异,但CVB阳性率均高于上呼吸道感染组和肺炎组（P＜0．05）;（3）其他疾病组和健康儿CVB感染发生率均低（分别是15．73％和3．33％）,两组间无差异。结论：CVB感染与小儿多种疾病相关,尤其应该重视研究CVB感染与哮喘、病毒性心肌炎和过敏性紫癜发病的内在联系。     

甲基强的松龙对柯萨奇病毒B3m体外作用的研究

目的：探讨甲基强的松龙体外在无免疫因素影响下与柯萨奇病毒B3m(CVB3m)作用情况。方法：首先测定甲基强的松龙对Hela细胞的毒性，并以微量法及全量法从最大无毒浓度开始2倍系列稀释后作用于感染CVB3m的Hela细胞，并收集各稀释度上清液进行病毒半数感染量（TCID50）重新滴定。结果：（1）甲基强的松龙高浓度（＞1．25mg/ml)对Hela细胞有毒性作用，最大无毒浓度为1．25mg/ml；（2）低家度甲基强的松龙可促进细胞生长，且在1．25mg/ml,0.625mg/ml有限制病毒复制作用，其细胞病变及培养上清液的TCID50均低于病毒对照孔，抑制倍数分别为249和31．8倍。结论：甲基强的松龙本身无直接促进病毒增殖作用，低浓度反而保护细胞，并可借助体内免疫系统，发挥免疫抑制作用，在柯萨奇病毒感染时，适时、适量应用激素利于病情恢复。     

扩张型心肌病患者血清sICAM-1的变化及与CVB感染的关系

目的 检测扩张型心肌病患者血清可溶性细胞间粘附分子-1（sICAM-1）的变化及与柯萨奇B组病毒（Coxsackievirus B，CVB）感染的关系，探讨扩张型心肌病的发病机制。方法 用酶联免疫吸附法测定42例扩张性心肌病患者、36例健康对照者血清中sICAM-1和CVB—IgM水平，并进行分析。结果 扩张型心肌病组血清sICAM-1水平明显高于对照组（P〈0．01）；心功能越差，血清sICAM-1水平越高；扩张型心肌病组CVB—IgM阳性率显著高于健康组（χ^2=11．56，P〈0．01）；患者CVB—IgM（＋）者血清sICAM-1水平显著高于CVB—IgM（-）患者（P〈0．01）。结论 在扩张型心肌病的发生发展中免疫反应和柯萨奇病毒感染炎性反应之间可能存在交叉反应现象；sICAM-1可作为血清学指标，在临床上为判断扩张型心肌病炎症活动和心功能状况提供间接依据。     

B组柯萨奇病毒对心肌细胞感染模式的研究

目的观察B组柯萨奇病毒（Coxsackie virusB,CVB）在原代心肌细胞中的感染特点,从而研究CVB对心肌细胞的致病机制。方法原代培养Balb／c乳鼠心肌细胞,并获得纯化的心肌细胞。使用B组柯萨奇病毒嗜心肌毒株3型（CVB3m）攻击原代心肌细胞,观察病毒感染心肌细胞后心肌细胞的细胞病变、超微结构和心肌酶的变化。结果成功原代培养了Balb／c乳鼠心肌细胞。心肌细胞在病毒感染后,细胞病变（CPE）不明显,与在HeLa等细胞中的典型CPE不同。心肌细胞在CVB3m感染后保持细胞形态和博动超过2周时间。电镜显示心肌细胞结构正常,细胞器数量增加,在心肌细胞胞质中可见晶格样病毒颗粒排列。培养细胞的上清液中心肌酶升高。结论CVB在原代心肌细胞中表现为持续感染,CVB在心肌细胞中的致病机制不同于HeLa细胞。     

复方金钱草清热颗粒对柯萨奇病毒体外抑制作用的研究

目的：研究复方金钱草颗粒冲剂对柯萨奇B组病毒致人喉癌细胞（Hep-2）细胞病变是否有抑制作用。方法：①Hep-2细胞感染病毒的同时给药；②Hep-2感染病毒2h后再给药；③药物与病毒作用2h后再感染Hep2细胞。结果：复方金钱草清热颗粒对柯萨奇病毒段、B5致Hep-2细胞病变有抑制作用，同时对CBVs的抑制作用明显优于CBV3。结论：金钱草对柯萨奇病毒有体外抑制作用。     

血清IFN—γ在柯萨奇B组病毒不同感染状态时的变化

目的：了解柯萨奇B组病毒（CVB）心肌炎和上呼吸道感染的不同感染状态时γ－干扰素（IFN－γ）水平变化。方法：38例CVB心肌炎患儿（A组），25例呼吸道CVB感染患儿（B组）和12例先天性心脏病患儿（C组），根据CVB抗原（CVB－Ag),CVB-IgM抗体（CVB－IgM)结果分为感染早期（A1、B1组），中期（A2、B2组）和晚期（A3、B3组），采用生物素－亲和素双抗体夹心酶联免疫吸附分析技术（ABC－ELISA）测定IFN－γ。结果：CVB－Ag阳性和CVB－Ag阴性、CVB－IgM阳性和CVB－IgM阴性患儿间IFN－γ水平差异均无显意义（P＞0．05）；A、B、C三组间IFN－γ水平差异均有显意义（P＜0．01，P＜0．05）；A1组与B1组、A2组与B2组，IFN－γ水平差异均有显性意义（P＜0．01）。结论：呼吸道CVB感染和CVB性心肌炎不同感染状态时IFN－γ水平均升高，但变化各有特征。     

先天性心脏病与柯萨奇病毒B3,B4感染的关系

采用配对病例对照研究，探讨先心病与柯萨奇病毒B3、B4感染的关系，结果显示：病例组与对照组患儿CVB3、CVB4．IgG抗体阳性率分别为59．3％、54．3％和53．6％、45．7％，差异天显著性（P值均＞0．05）；经单因素和多因素回归分析均未发现CVB3、CVB4感染与先心病有病因学联系（P＞0．05）     

复方羌芪水提液体外抗柯萨奇病毒B3作用的研究

目的：测定复方羌芪水提液的体外抗ＣＶＢ３作用，并对其抗病毒机理进行初步的探讨。方法：用含有不同浓度复方羌芪水提液的维护液培养ＣＶＢ３感染的Ｖｅｒｏ细胞，４８ｈ后用ＭＴＴ法测定细胞活性；培养上清液滴定ＴＣＩＤ５０。结果：复方氏水提液能抑制ＣＶＢ３对Ｖｅｒｏ细胞的致病变作用（ＣＰＥ），使细胞夏活率升高，培养上清病毒滴度降低；且随药物浓度及药物与病毒作用时间的延长抑制作用增强。结论：复方羌芪水提液的抗病     

L—精氨酸对小鼠病毒性心肌炎心肌细胞的影响及其机理的探讨

目的：探讨Ｌ－精氨酸对病毒性心肌炎病理变化的影响。方法：将接种柯萨基病毒Ｂ３的Ｂａｌｂ／ｃ雄性小鼠随机分为饲服Ｌ－精氨酸组和对照组,于接种病毒后第５ｄ测小鼠血清ＮＯ（ＮＯ２／ＮＯ３）和ＣＫ－ＭＢ,心肌组织病理学改变和超微结构变化。结果：血清ＮＯ（ＮＯ２／ＮＯ３）和血清ＣＫ－ＭＢ,Ｌ－精氨酸组高于对照组;心肌组织病理学检查可见Ｌ－精氨酸组小鼠心肌细胞有程度不等的空泡变性和坏死,病理损伤较对照组严重;     

大蒜多糖对小鼠病毒性心肌炎的治疗作用

目的 :探讨大蒜多糖对实验性小鼠病毒性心肌炎的治疗作用。方法 :采用BALB C小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3(CVB3)建立实验性小鼠病毒性心肌炎模型。小鼠随机分为正常对照组、模型组、大蒜多糖组、黄芪组。注射病毒 1h后给药 ,连续 7d ,于第 8d处死存活鼠取材。观察小鼠存活率及心肌病理变化 ,测定血清心肌酶、丙二醛(MDA)、一氧化氮 (NO)含量和谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)活力、心肌组织中病毒滴度及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达。结果 :大蒜多糖治疗组与模型组相比小鼠存活率明显增高 ,心肌组织病理损伤减轻 ,血清心肌酶、MDA、NO含量显著降低 ,GSH Px活力升高 ,心肌组织中病毒滴度及iNOS表达降低。结论 :大蒜多糖对实验性小鼠病毒性心肌炎具有治疗作用     

柯萨奇病毒B_3致病模型的建立

目的 :建立柯萨奇病毒 (CV)B3 的实验动物模型 ,以期为抗病毒药物筛选提供工具。方法 :雄性BALB/C鼠腹腔注射CVB3 后 ,观察小鼠发病症状 ,并在不同时间处死小鼠 ,取小鼠心、脾、肝、肾等组织进行病毒分离、病毒核酸检测、心肌组织病理检查。结果 :感染后第 3d小鼠即出现症状 ,第 5d在小鼠的心脏、脾脏、肾脏均可分离出感染性病毒 ,其滴度分别为 :10 4 .7,10 3.3 ,10 3.2 TCID50 / 0 .1ml,同时小鼠心、脾、肾、等组织及血清中CVB RNA检测为阳性 ,心肌组织出现典型炎性改变。结论 :雄性BALB/C鼠感染CVB3 后可引起病毒性心肌炎发生     

肾上腺皮质激素对心肌炎小鼠肌钙蛋白Ⅰ的影响

目的:研究肾上腺皮质激素治疗病毒性心肌炎时血清肌钙蛋白I(cTnI)的变化。方法:对不同时期应用激素治疗的心肌炎小鼠采用化学发光法检测血清cTnI水平,并同正常对照组及病毒对照组比较,同时与心肌病理积分进行相关分析。结果:病毒性心肌炎小鼠血清cTnI显著升高,并与病理变化呈直线正相关(r=0.70)。病毒性心肌炎早期和中期使用肾上腺皮质激素可明显降低cTnI水平,中期使用肾上腺皮质激素疗效尤为明显。结论:中期应用激素治疗CVB3心肌炎小鼠可明显阻止炎细胞浸润心脏组织,降低血清cTnI水平,保护心肌细胞,控制心肌炎病情发展,改善预后。     

CVB3对不同营养状态的HeLa细胞mTOR信号通路调控的影响

目的:探讨不同营养状况对柯萨奇病毒B3 (CVB3) 感染HeLa 细胞后mTOR 信号通路调控的影响。方法:HeLa 细胞的培养方法:非饥饿法用常规含10% 胎牛血清细胞培养液换液培养24 h 后次日再用CVB3 干预; 饥饿法用不含胎牛血清的培养基换液培养24 h 后次日再干预。将HeLa 细胞分为非饥饿法病毒组与对照组、饥饿法病毒组与对照组4 组, 采用RT-PCR 检测不同时间点HeLa 细胞CVB3 外壳蛋白、mTOR 和p70S6K mRNA 表达。结果:非饥饿法:病毒组mTOR, p70S6K mRNA 表达与对照组比较仅在12, 24 h, 差异有统计学意义(P<0.05), 而饥饿法病毒组各时间点均低于对照组( 均P<0.05);饥饿法病毒组和对照组HeLa 细胞mTOR 表达均高于非饥饿法( 均P<0.05), 而p70S6K mRNA 差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:CVB3 使HeLa 细胞mTOR-p70S6K 信号通路表达下调, 饥饿法mTOR 表达高于非饥饿法。     

治咳川贝枇杷滴丸体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型的作用

目的：研究治咳川贝枇杷滴丸体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV—Ⅰ）的作用。方法：采用CPE法和MTT法在细胞水平上检测治咳川贝枇杷滴丸抗HSV—Ⅰ的作用;观察不同时间段的含药血清抑制HSV—Ⅰ的情况,在血清水平上进一步验证治咳川贝枇杷滴丸抗HSV—Ⅰ的作用。结果：细胞水平上,治咳川贝枇杷滴丸对HSV—Ⅰ有直接灭活作用、侵入阻断作用、生物合成抑制作用,最高抑制率分别为75．41％、60．76％和56．71％（P〈0．05）。在Tco范围以下,随着药物浓度的增加,病毒抑制率明显升高,呈量效关系。血清水平上,含药血清具有明显的抗HSV—Ⅰ作用,抑制作用呈一定的浓度、时间依赖性。结论：治咳川贝枇杷滴丸具有一定的体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型作用。     

内源性硫化氢对柯萨奇病毒B3性心肌炎小鼠心肌内病毒复制的影响

目的观察内源性硫化氢（H2S）对柯萨奇病毒B3（CVB3）所致病毒性心肌炎（VMC）小鼠心肌内病毒复制的影响,探讨内源性H2S在VMC发病机理中的作用。方法雄性Balb／c小鼠通过腹腔接种CVB,复制VMC模型。75只雄性Balb／c小鼠随机分为5组（每组15只）：正常对照组、VMC组及胱硫醚-1-裂解酶（CSE）不可逆抑制剂-炔丙基甘氨酸（PAG）低、中、高剂量干预组（PAG给药采用皮下注射,PAG低、中、高剂量干预组的PAG剂量分别为：20．0、40．0、80．0mg·kg^-1,1次／d,共6次。PAG的首次给药为腹腔接种CVB,的同时皮下注射PAG）。于腹腔接种CVB,后第7天处死小鼠。用光镜观察心肌组织的病理变化;用分光光度法测定心肌组织的H2S含量;用酶免疫吸附法测定心肌组织的CSE活性及血清的心肌肌钙蛋白I（cTnI）含量;用逆转录．聚合酶链反应方法检测心肌组织CVB,mRNA表达。结果VMC组心肌组织的CSE活性、H2S含量明显低于正常对照组（P〈0．01）,心肌组织的病理积分、CVB,mRNA表达水平及血清的cTn I含量明显高于正常对照组（P〈0．01）;PAG低、中、高剂量3个干预组心肌组织的CSE活性、H2S含量明显低于VMC组（P〈0．01）,心肌组织的病理积分、CVB,mRNA表达水平及血清的cTn I含量明显高于VMC组（P〈0．01）。结论心肌内源性H2S能抑制CVB,在心肌内复制。     

菘蓝的4种单体成分抗柯萨奇病毒作用的研究

目的 :了解菘蓝 4种有效单体 (6 ,7,8,9号 )抗柯萨奇病毒B组 3型 (CVB3 )的活性。方法 :通过观察细胞病变效应 (CPE) ,噻唑蓝 (MTT)比色法检测细胞活性 ,用半定量RT PCR检测不同药物浓度下病毒核酸含量 ,以确定有效单体抗CVB3 的作用。结果 :菘蓝的 4种单体成分对CVB3 生物合成均有抑制作用 ,且强于阳性对照药物病毒唑。表现在随着药物浓度的增加 ,CPE程度逐渐减弱 ,病毒核酸的含量逐渐下降。结论 :菘蓝的 4种单体能在体外通过抑制生物合成发挥抗CVB3 作用。     

芪芍五味子复方制剂抗CVB3病毒抑制心肌细胞凋亡机制的研究

目的 研究中药芪芍五味子复方制剂抗柯萨奇B3病毒(CVB3)效果及抑制病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡的机制.方法 采用细胞培养法观察细胞病变效应(CPE)与广谱抗病毒药物病毒唑对照,进行复方制剂体外抗病毒实验;BALB/c小鼠接种CVB3建立病毒性心肌炎动物模型,随机分为正常对照组、病毒对照组、复方制剂治疗组和维生素C与病毒唑联用组,观察各组心肌病理变化,Real-time定量PCR检测小鼠心肌CVB3RNA水平,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡和坏死率.结果 复方制剂体外最大无毒浓度为19.53g/L,预防给药、同时给药和治疗给药3种方式细胞培养所需有效药物浓度均低于病毒唑;与同期病毒对照组小鼠比较,复方制剂治疗组小鼠心肌炎症性病理变化明显减轻,CVB3RNA拷贝数降低(P<0.05),心肌细胞凋亡和坏死率显著降低(P<0.05).结论 芪芍五味子复方制剂可有效抗病毒,抑制病毒诱导心肌细胞凋亡,对CVB3感染小鼠心肌有良好的保护作用.