两种新硫色满酮衍生物体外抗肿瘤活性研究

目的研究新合成化合物（顺）-3-（氯代亚甲基）-5-氟-硫色满-4-酮（CFTK）和（顺）-3-（氯代亚甲基）-5-甲基-硫色满-4-酮（CMTK）对人乳腺癌MCF-7细胞、人肝癌HepG-2细胞、人结肠癌LS174T细胞、人肺癌A549细胞、人黑色素瘤A375细胞、人肾癌786-O细胞、人慢性粒细胞白血病K562细胞、人系髓样白血病U937细胞、小鼠肉瘤S180细胞的抗肿瘤活性,为深入研究CFTK和CMTK抗肿瘤作用提供实验依据。方法以不同浓度的CFTK和CMTK作用于9种癌细胞,应用改良的MTT法检测CFTK和CMTK对9种癌细胞生长的抑制作用。结果通过检测以上细胞的增殖情况,得出CFTK对9种癌细胞的半数抑制浓度（IC50）在（6.32±1.52）μmol.L-1~（19.8±4.08）μmol.L-1之间,CMTK对9种癌细胞的IC50在（7.16±0.76）μmol.L-1~（18.2±5.28）μmol.L-1之间;与同浓度的顺铂（CDDP）相比,具有明显的抗肿瘤活性。结论 CFTK和CMTK能够明显抑制肿瘤细胞的生长,具有极高的体外抗肿瘤活性,为进一步研究开发提供依据。     

新化合物（Z）-7-氟-6-甲基-3（哌嗪-1-亚甲基）硫色满-4-酮体外抗肿瘤作用

目的：研究（Z）-7-氟-6-甲基-3（哌嗪-1-亚甲基）硫色满4-酮（FMTK）对人宫颈癌HeLa细胞系,肺癌A549细胞系,肝细胞癌HepG2细胞系,低分化胃腺癌BGC-823细胞系的抗肿瘤活性,为深入研究FMTK抗肿瘤作用提供实验依据。方法：4种肿瘤细胞培养于含有不同浓度的FMTK培养液中,实验设受试药物组、阴性对照组、阳性对照组、空白对照组、溶剂对照组,采用四甲基偶氮唑蓝微量酶比色法（MTF法）检测FMTK对以上4种肿瘤细胞增殖的影响;采用大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6检测FMTK对正常细胞的毒性。结果：通过检测以上细胞的增殖情况,得出FMTK半数抑制浓度（IC50）如下：HeLa（80．09±1．48μg·ml^-1）,BGC-823（55．87±1．14μg·ml^-1）,HePG2（35．06±2．68μg·ml^-1）,FMTK对A549几乎没有抑制作用。FMTK对人宫颈癌HeLa细胞系,肝细胞癌HepG2细胞系,低分化胃腺癌BGC-823细胞系抑制作用随着剂量和时间的增加而增高,与阴性对照组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）;FMTK对大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6没有抑制作用。结论：FMTK具有体外抗肿瘤活性,对正常细胞IEC-6无毒性。     

3-氯代亚甲基色满-4-酮类化合物的设计、合成及体外抗真菌活性研究

本文以取代苯酚为原料,经微波条件下的取代反应和多聚磷酸中进行的环合反应制备了取代色满酮,取代色满酮与甲酸乙酯的缩合产物经氯化反应制备了3-氯代亚甲基色满-4-酮类化合物,共合成了10种未见文献报道的新化合物。化合物结构经质谱和核磁共振氢谱进行了确证,并且采用二倍稀释法对目标化合物的体外抗真菌活性进行了测试,结果表明它们具有很好的体外抗真菌活性,其中化合物4c、4e、4g和4h对石膏样小孢子菌的MIC值为1μg.mL1,高于对照药氟康唑和两性霉素B,具有进一步研究价值。     

Isodihydroauroglaucin诱导的细胞凋亡可能与其诱导DNA损伤有关

目的对化合物2-(3E,5E-庚二烯基)-3,6-二羟基-5-(3-甲基-2-丁烯基)苯甲醛(isodihydroau-roglaucin)的抗癌活性进行研究。方法利用细胞毒实验测定isodihydroauroglaucin对人宫颈癌细胞(HeLa)的生长抑制作用;通过DNA含量分析和Annexin V-FITC/PI双染实验检测isodihydroauro-glaucin诱导的HeLa细胞死亡;利用单细胞凝胶电泳方法检测isodihydroauroglaucin对DNA的损伤作用。结果 Isodihydroauroglaucin对HeLa细胞的生长具有抑制作用,其IC50值为170μmol.L-1;DNA含量分析和Annexin V-FITC/PI双染实验表明isodihydroauroglaucin诱导HeLa细胞凋亡;isodi-hydroauroglaucin对DNA有损伤作用。结论 Isodihydroauroglaucin可能通过诱导DNA损伤诱导He-La细胞凋亡。     

N~1-乙基-N~(11)-(环庚烷基)甲基-4,8-二氮杂癸烷对宫颈癌细胞的作用

目的探讨N1-乙基-N11-(环庚烷基)甲基-4,8-二氮杂癸烷(CHEN)对宫颈癌细胞株Siha的抗肿瘤作用。方法MTT法检测细胞的生长情况;流式细胞术及DNA片段化分析法检测细胞凋亡;化学分析法测定精胺氧化酶(SMO)活性。结果CHEN可显著抑制Siha宫颈癌细胞生长,且抑制作用随药物浓度增加而增强,用10μmol·L-1 CHEN处理细胞,24和48h生长抑制率分别高达61%和75%。细胞凋亡分析发现,CHEN处理可诱导Siha细胞凋亡,导致凋亡峰出现和细胞核DNA片段化。在0~20μmol·L-1浓度范围内,CHEN作用24h对Siha细胞SMO活性无明显影响。结论CHEN通过诱导细胞凋亡而抑制宫颈癌细胞生长,该抑制作用与SMO活性无关。     

(±)2-(7,8,3,′4,′5′-五甲氧基)黄烷通过诱导周期阻滞和细胞凋亡抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖

目的研究(±)2-(7,8,3′,4′,5′-五甲氧基)黄烷(PMF)体外对人胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制作用及机制。方法MTT法检测不同浓度PMF体外对SGC-7901细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测PMF对细胞周期分布的影响;Western blot法检测PMF对凋亡相关蛋白PARP、caspase-3表达的影响。结果不同浓度的PMF作用72 h可剂量依赖性地抑制SGC-7901细胞增殖;PMF作用12 h可使SGC-7901细胞周期阻滞于G2/M期;PMF作用24 h细胞周期检测可见亚二倍体峰(SubG1),并可诱导细胞凋亡相关蛋白PARP、caspase-3的活化。结论PMF体外可抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,其增殖抑制作用与诱导G2/M周期阻滞和细胞凋亡有关。     

N_3-邻甲苯甲酰基-氟脲嘧啶通过凋亡作用抑制人胃癌细胞生长

目的N3-邻甲苯甲酰基-氟脲嘧啶(N3-O-toluyl-flu-orouracil,TFU)是N1-乙酰基-N3-邻甲苯甲酰基-氟脲嘧啶的降解产物和5-氟脲嘧啶(5-FU)前体物,本研究观察TFU体内外对人胃癌细胞生长抑制活性及作用特点。方法体外实验,以MTT法测定TFU对人胃癌细胞SGC-7901和MKN-45生长抑制作用,并与肝微粒体酶存在条件下的结果比较。在肝微粒体酶存在时,将人胃癌细胞与低剂量TFU孵育10h,以吖啶橙/溴乙锭染色(AO/EB)观察肿瘤细胞形态;分别以琼脂糖凝胶电泳法和流式细胞仪分析肿瘤细胞DNA断裂特点;Western blot法检测肿瘤细胞Bcl-2和Bax蛋白表达。体内实验,以裸鼠移植人胃癌细胞并灌胃给药观察TFU对肿瘤细胞生长抑制作用。取肿瘤组织切片,以TUNEL(ter-minal deoxynucleoid transferase nick-end labeling)染色法,观察肿瘤细胞核染色比例,计算凋亡率。结果TFU对胃癌细胞生长抑制作用较弱,而在肝微粒体酶存在时能够明显提高TFU对胃癌细胞生长的抑制率。TFU对裸鼠移植人胃癌细胞生长抑制作用较强,对动物体重抑制作用弱。进一步实验,在肝微粒体酶存在下,低剂量TFU能够诱导肿瘤细胞凋亡。吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)染色后,胃癌细胞呈现剂量依赖性凋亡形态改变。细胞染色体DNA断裂呈现Ladder现象和亚二倍体(sub-G1)凋亡峰。TFU上调胃癌细胞Bax蛋白表达,降低Bcl-2蛋白水平。TUNEL法检测裸鼠移植人胃癌细胞凋亡,TFU能够提高胃癌细胞核TUNEL染色水平。结论TFU对人胃癌细胞生长具有抑制作用,该作用可能与肝微粒体酶缓慢水解释放出低水平5-FU有关,低水平5-FU可能通过调节Bcl-2和Bax表达活性诱导胃癌细胞凋亡。     

松茸不同提取部位的体外抗肿瘤作用

摘 要 目的： 研究松茸不同提取部位的体外抗肿瘤活性。 方法: 采用MTT法测定松茸乙醇提取物各部位及多糖部位对HepG-2细胞、Hela细胞和MCF-7细胞的抑制作用;采用流式细胞术检测多糖部位诱导HepG-2细胞和Hela细胞凋亡的作用。结果:松茸多糖部位体外对3种肿瘤细胞的IC₅₀分别为53.77μg·ml^-1(HepG-2)、40.04 μg·ml^-1(Hela)、100.65 μg·ml^-1(MCF-7),抑制作用均优于其他各部位,且对HepG-2细胞和Hela细胞抑制作用呈现良好的时间与浓度依赖性;松茸多糖部位能诱导HepG-2细胞和Hela细胞凋亡。结论: 松茸多糖部位能显著抑制HepG-2和Hela等肿瘤细胞的生长,具有诱导凋亡的作用,为松茸抗肿瘤的主要活性部位。     

白花蛇舌草的有效成分2-羟基-3-甲基蒽醌通过Fas/FasL信号通路诱导卵巢癌细胞凋亡

目的研究中药白花蛇舌草的有效成分2-羟基-3-甲基蒽醌对人卵巢癌细胞HO-8910生长的抑制作用和凋亡的影响。方法不同浓度的2-羟基-3-甲基蒽醌与人卵巢癌细胞HO-8910分别培养0、24、48、72 h,用台盼蓝染色法测定HO-8910细胞存活率;以Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测HO-8910细胞的凋亡率;Western blot法检测Fas和Fas L蛋白的表达;采用荧光比色法测定Caspase-3和Caspase-8蛋白酶的活性。结果随着2-羟基-3-甲基蒽醌浓度的增加及作用时间的延长,药物对HO-8910细胞的生长有明显的抑制作用;HO-8910细胞的凋亡率亦随之增高,且呈药物浓度及时间依赖关系;2-羟基-3-甲基蒽醌作用HO-8910细胞后Fas和Fas L的蛋白表达水平逐渐上升;Caspase-3和Caspase-8蛋白酶的表达亦逐渐增强;Caspase-3和Caspase-8抑制剂能够抑制2-羟基-3-甲基蒽醌诱导的HO-8910细胞凋亡。结论 2-羟基-3-甲基蒽醌可以诱导HO-8910细胞凋亡,Fas/Fas L通路在2-羟基-3-甲基蒽醌诱导的HO-8910细胞凋亡过程中起重要作用。     

氧氟沙星-绕丹宁衍生物诱导人肝癌细胞凋亡作用

目的研究氧氟沙星-绕丹宁衍生物对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的诱导作用。方法用不同浓度的6-(3-苄基-4-氧代-2-硫代-噻唑烷-5-叉甲基)-9-氟-3-甲基-10-(4-甲基哌嗪-1-基)-2,3-二氢-7-氧代-7-氢-吡啶并[1,2,3-de][1,4]苯并噁嗪(R3)与人肝癌SMMC-7721细胞、食管鳞癌EC-9706细胞、结肠癌CaCO-2细胞和L-02肝转化细胞体外培养。MTT法检测R3对各种细胞的增殖抑制作用;DAPI荧光染色法和TUNEL法检测细胞凋亡变化;PI染色流式细胞术检测细胞周期变化;Western blot法测定p53和caspase-3蛋白表达量的变化。结果 R3在2~20μmol·L~(-1)的浓度范围内能明显抑制SMMC-7721细胞、EC-9706细胞和CaCO-2细胞的增殖,作用于细胞24 h的IC_(50)值分别为3.893、4.181和3.408μmol·L~(-1);R3作用于L-02细胞24 h的IC_(50)值为33.959μmol·L~(-1);氧氟沙星盐酸盐作用于SMMC-7721细胞24 h的IC_(50)值为240.137μmol·L~(-1);舒尼替尼作用于SMMC-7721细胞24 h的IC_(50)值为8.075μmol·L~(-1);R3处理SMMC-7721细胞后,细胞周期被阻滞在G1-S期检测点,且细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05)。R3明显增加SMMC-7721细胞p53和caspase-3蛋白表达量,其中caspase-3活性裂解片段增加明显。结论氧氟沙星-绕丹宁衍生物对肿瘤细胞具有较好的选择性抑制作用,能够明显诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡。     

薯蓣皂苷元衍生物的抗肿瘤活性研究

目的研究薯蓣皂苷元衍生物在体外的抗肿瘤活性。方法采用MTT法对人恶性黑色素瘤细胞A375、人肺腺癌细胞A549、人肝癌细胞HepG-2及人慢性髓原白血病细胞株K562进行体外抗肿瘤活性试验。结果薯蓣皂苷元衍生物对4个肿瘤细胞株A375、A549、K562、HepG-2具有不同程度的抗肿瘤活性。结论绝大部分薯蓣皂苷元衍生物对4个肿瘤细胞株有较好的抗肿瘤活性,IC50值都低于30μmol.L-1。化合物22对细胞株A375的IC50=4.48μmol.L-1,化合物9、10对细胞株K562的IC50分别为2.51、2.38μmol.L-1;显示其抗肿瘤活性与对照化合物1-(3β-薯蓣皂苷元)-3-苄基咪唑溴盐相当。     

塞来昔布对人肺癌A549细胞株增殖抑制和凋亡诱导作用观察

目的 体外研究选择性环氧化酶2 (COX-2)抑制剂塞来昔布对人肺癌细胞株A549增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 采用噻唑蓝(MTT比色法)观察不同浓度的塞来昔布对人肺癌细胞株A549的增殖抑制作用,TUNEL染色检测细胞凋亡,并用含半胱氨酸的门冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)活性检测试剂盒检测其活性变化.结果 塞来昔布能够以浓度依赖性方式有效地抑制K562细胞增殖,药物的Ic50为33.98 μmol·L-1;TUNEL染色分析显示给予不同浓度塞来昔布的细胞与未给予塞来昔布的细胞相比凋亡率有差异(P＜0.05),经塞来昔布处理的A549细胞内caspase-3的A405较正常对照组有显著增加(P＜0.05).结论 塞来昔布能够抑制A549细胞增殖,并呈药物浓度依赖性;塞来昔布能以浓度依赖性方式诱导K562细胞凋亡,其机制涉及caspase-3活化的信号转导途径.     

古抑菌素A诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及对脆性组氨酸三联体蛋白和凋亡相关蛋白表达的影响

目的:研究组蛋白去乙酰化转移酶抑制剂古抑菌素A(TSA)对人肝癌HepG2细胞的抑制作用以及对脆性组氨酸三联体(FHIT)蛋白和凋亡相关蛋白caspase-3、bax、bcl-2表达的影响,初步探讨其诱导凋亡的机制。方法:以不同浓度TSA(125、250、500、1000、2000nmol·L-1)处理体外培养的人肝癌HepG2细胞,孵育24、48h后采用MTT法、以吸光度值和抑制率为指标检测细胞的生长抑制情况;分别用原位末端脱氧核苷转换酶标记(TUNEL)法和免疫细胞化学法检测TSA(250、1000nmol·L-1)作用后细胞凋亡率和细胞中FHIT、caspase-3、bax、bcl-2的蛋白表达;同时设立溶剂为对照组。结果:与对照组比较,不同浓度TSA作用后吸光度值降低,抑制率升高,并呈明显的剂量依赖和时间依赖关系;TUNEL阳性细胞百分率升高(P<0.01)、细胞中FHIT、cas-pase-3、bax蛋白表达增强(P<0.05),bcl-2的变化不明显(P>0.05)。结论:TSA可能通过上调FHIT、caspase-3、bax蛋白的表达而诱导肝癌HepG2细胞凋亡。     

5，7-DMF诱导14-3-3σ基因甲基化促进乳腺癌MDA-MB-453 细胞凋亡的实验研究

目的探讨5,7-二甲氧基黄酮（5,7-DMF）对人乳腺癌细胞凋亡的影响及其可能机制。方法体外培养乳腺癌MDA—MB-453、MCF-7细胞和永生化人乳腺上皮HBL-100细胞,经5,7-DMF处理后,通过MTT法测定细胞活力：碘化丙啶（PI）染色流式细胞术（FCM）分析细胞凋亡率;甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测14—3—3σ基因甲基化状态：Westem blotting分析14—3—3σ蛋白表达水平。结果5,7-DMF对MDA—MB-453细胞活性的抑制作用最强;不同浓度（5、10和20μmol．L^-1）5,7-DMF作用48小时后,可显著诱导MDA—MB-453细胞凋亡,其细胞内14—3—3σ基因甲基化水平显著升高,而14—3—3σ蛋白表达水平显著降低。结论5,7-DMF可诱导乳腺癌MDA—MB-453细胞凋亡,其机制可能与促进14—3—3σ基因的甲基化和降低其蛋白表达有关。     

BAPTA-AM对HepG-2细胞MT的保护作用及其机制

目的观察BAPTA-AM抗H2O2诱导的HepG-2细胞MT损伤作用并探讨其机制。方法采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)、Rhodamine 123(Rh 123))荧光染色、细胞色素C酶联免疫分析、Caspase-9活性检测试剂盒、活性氧ROS检测法分别测定HepG-2细胞活性、线粒体(MT)膜电位、MT细胞色素C(CytC)的释放、Caspase-9的激活、活性氧(ROS)的产生量。结果 BAPTA-AM能抑制H2O2损伤HepG-2细胞所致MT跨膜电位的降低,减少CytC的释放,抑制Caspase-9激活和ROS的生成,提高受攻击H2O2的细胞活力。结论 BAPTA-AM通过减轻钙超载,保护MT,抑制凋亡通路的激活,产生抗细胞损伤、挽救细胞生命之效。     

连翘三萜类化合物对人胃癌细胞株SGC-7901凋亡诱导机制的研究

目的：观察连翘中分离所得两种三萜类化合物：达玛-24-烯-3β-乙酰氧基-20s-醇[20（s）-dammar-24-ene-3β,20-diol-3β-acetate,DM]和五环齐墩果烷型三萜类化合物安博立酸（ambrolicacid,AA）对5种人消化道肿瘤细胞的抑制作用,以及AA对人胃癌细胞株SGC-7901的凋亡诱导作用。方法：MTT法观察AA和DM对5株人消化道肿瘤细胞株MKN-45、MKN-28、SGC-7901、PNAC-1、HepG-2的生长抑制作用,Annex-in-V/PI染色流式细胞术测定SGC-7901细胞的凋亡率,Western blotting检测相关凋亡蛋白表达。结果：两种三萜类化合物对人消化道肿瘤细胞有较好的抑制作用,其作用呈剂量依赖性;AA作用细胞72h后可以明显诱导细胞凋亡,而DM对细胞未有凋亡诱导作用;AA可下调pro-caspase3、6、8、9蛋白和Bcl-2蛋白表达水平,同时可上调Bax蛋白水平。结论：AA和DM对5株人消化道肿瘤细胞有明显抑制作用,AA诱导SGC-7901细胞凋亡的主要途径可能为调节凋亡相关蛋白的表达。     

SL-01, an oral gemcitabine derivative, inhibited human cancer growth more potently than gemcitabine

SL-01, an oral gemcitabine derivative, was synthesized by introducing the moiety of 3-(dodecyloxycarbonyl)pyrazine-2-carbonyl at the N4-position on the cytidine ring of gemcitabine. Our goal in this study was to evaluate the efficacy of SL-01 on the growth of human cancers with gemcitabine as control. Experiments were performed on human non-small cell lung cancer NCI-H460 and colon cancer HCT-116 both in vitro and in vivo. In vitro assays, SL-01 significantly inhibited the growth of cancer cells as determined by the 3-[4, 5-dimethylthiazol-2-yl]-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay. Further studies indicated that SL-01 induced the cancer cells to apoptosis showing chromatin condensation and externalization of phosphatidylserine. In in vivo studies, we evaluated the efficacy of SL-01 in nude mice bearing human cancer xenografts. SL-01 effectively delayed the growth of NCI-H460 and HCT-116 without significant loss of body weight. Molecular analysis indicated that the high efficacy of SL-01 was associated with its ability to induce apoptosis as evidenced by increase of terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) staining cells, activation of caspase-9, caspase-3 and cleaved poly ADP-ribose polymerase (PARP) in tumor tissues. SL-01 also increased Bax/Bcl-2 ratio in cancer cells. These biological activities of SL-01 were more potential than that of gemcitabine. Based on these in vitro and in vivo results, SL-01 is proposed as a potent oral anticancer agent that may supplant the use of gemcitabine in the clinic.     

黄芪皂苷对人胃癌细胞系MKN-74 增殖与侵袭的影响

目的探讨黄芪属植物黄芪的根部的一种提取物——黄芪皂苷(astragaloside,AST)在体外对胃癌MKN-74细胞增殖与侵袭力的影响。方法用五个不同剂量(0,2.5,5,10,20μmoL.L-1)的和胃癌MKN-74细胞共培养24、48、72小时,通过MTT法检测黄芪皂苷(AST)对细胞的抑制作用;Transwell侵袭实验检测黄芪皂苷对MKN-74细胞侵袭力的抑制作用。结果 (1)AST在体外能够显著抑制胃癌MKN-74细胞的增殖,2.5μmoL.L-1,5μmoL.L-1,10μmoL.L-1,20μmoL.L-1黄芪皂苷处理72小时生长抑制率分别为4.65%,7.58%,20.73%,30.38%,呈现明显的剂量和时间依赖性。(2)AST显著抑制MKN-74细胞的侵袭力,呈现剂量和时间依赖性。结论 AST在体外对人胃癌MKN-74细胞有显著的抑制细胞增殖作用。