西咪替丁对胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响

目的:观察西咪替丁对人胃癌SGC-7901细胞增殖、细胞周期分布及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法:培养人胃癌SGC-7901细胞,以不同浓度的西咪替丁处理后用MTT法检测SGC-7901细胞的增殖情况;流式细胞术检测癌细胞周期和凋亡;Hoechst33258染色后荧光显微镜观察药物作用后癌细胞的形态变化;透射电镜观察用药后细胞超微结构的改变;Western印记法检测Bcl-2和Bax蛋白表达.结果:以不同浓度的西咪替丁分别处理人胃癌SGC-7901细胞24h和48 h,结果发现,在0.5,1,2.5,5,10 mmol/L时对SGC-7901细胞的增殖具有显著的抑制作用,与对照组相比差异显著(24 h:0.705±0.018,0.560±0.038,0.408±0.029,0.276±0.042,0.205±0.031 vs 0.803±0.012,P<0.05;48 h:0.902±0.024,0.671±0.015,0.420±0.030,0.180±0.037,0.0117±0.021 vs 1.079±0.040,P<0.05),并呈时间和剂量依懒性,而在0.25 mmol/L以下浓度对SGC-7901细胞未见明显细胞毒作用;0.5-10 mmol/L西咪替丁作用后,可观察到典型的细胞凋亡形态学改变;流式细胞仪检测可见凋亡峰,G0/G1期细胞明显增多(60.83±2.27,67.21±1.18,75.15±4.01,81.88±3.10,86.99±1.43 vs 50.28±1.97,P<0.05);西咪替丁还可下调SGC-7901细胞中的Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达.结论:西咪替丁可改变细胞周期分布,并能通过下调Bcl-2、上调Bax蛋白表达,诱导SGC-7901细胞凋亡,从而抑制细胞增殖.     

应用基因芯片研究康莱特对人胰腺癌Patu-8988细胞的凋亡诱导作用

目的 探讨康莱特注射液诱导人胰腺癌细胞(Patu-8988)凋亡过程中相关基因表达的变化。方法 通过流式细胞仪Annexin V／PI双染法研究康莱特诱导Patu-8988细胞凋亡的过程，应用基因芯片技术分析加药前后凋亡相关基因的表达差异，并以Western印迹对部分基因蛋白产物表达进行验证。结果康莱特对Patu-8988细胞的凋亡诱导作用呈时间依赖性。康莱特作用24h后，在96条有关凋亡的目的基因中共有17条基因表达发生大于3倍的显著变化，其中表达上调基因12条，下调基因5条。Western印迹表明P53、Bcl-2、Bax、Caspase-3等蛋白表达改变与基因芯片结果一致，同时Caspase-3底物多聚ADP核糖多聚酶被降解。结论 康莱特可使Patu-8988细胞中多个凋亡相关基因的表达发生改变，进一步揭示了其诱导胰腺癌细胞凋亡的作用机制。     

基因芯片技术分析20(S)-原人参二醇抑制人胃癌SGC-7901细胞作用机制

目的 利用基因芯片检测20(S)-原人参二醇(Ppd)作用于SGC-7901细胞后的基因表达情况,从基因水平上探讨Ppd抑制SGC-7901细胞增殖的作用机制.方法 SGC-7901细胞经不同浓度Ppd处理48 h,倒置光显微镜和荧光显微镜观察细胞形态学变化,MTT法检测SGC-7901细胞的存活率,流式细胞仪检测细胞周期变化,然后提取总RNA,逆转录生成cDNA,cDNA与基因芯片杂交,扫描仪检测杂交结果.结果 扫描信号分析数据显示10条基因表达有差异,p21、chk1 表达上调,cyclinB1、cyclinE1、E2F1、DNA 2PK、hTERT、bcl22、jnk、VEGF表达下调.结论 Ppd可以抑制SGC-9017细胞增殖,作用机制与改变细胞周期某些调控物质的基因表达、诱导细胞凋亡有关.     

siRNA阻断NF-κB信号通路联合5-FU对食管鳞癌细胞凋亡的促进作用

目的: 利用RNAi技术特异性的抑制NF-κB亚单位p65的表达,观察其对p65表达的抑制作用及联合5-FU对食管鳞癌细胞Eca109和EC9706的影响.方法:将终浓度为50 nmol/L的p65 siRNA转染到食管鳞癌细胞EC9706和Eca109中,通过RTPCR检测0、24、48和72 h时段p65 mRNA的表达水平.Western blotting法检测p65和Bcl-2蛋白表达,Annexin V/PI复染结合流式细胞仪检测细胞凋亡,显微镜下观察p65 siRNA与5-FU单独或联合应用对食管鳞癌细胞形态学特性的影响.结果:EC9706和Eca109细胞转染p65 siRNA 24、48和72 h后,p65 mRNA的表达水平随时间的延长逐渐下调,在72 h的阻断效率最为明显,与0 h相比,差异有显著性(0.12±0.01 vs 0.28±0.05,0.1±0.01 vs 0.38±0.04,均P<0.05),转染72 h后,p65和Bcl-2蛋白表达水平下调.EC9706和Eca109转染p65siRNA后,细胞凋亡指数明显升高(6.65%±0.27% vs 2.03%±0.08%,8.03%±0.06% vs 2.66%±0.25%,均P<0.05);p65 siRNA转染72 h后,EC9706和Eca109细胞增殖较慢;当p65 siRNA与5-FU联合作用,细胞增殖明显受到抑制.结论:p65 siRNA可阻断NF-κB信号通路,下调NF-κB下游基因中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,表明活化的NF-κB信号通路可成为食管鳞癌基因治疗中一个重要的分子靶点.     

舒林酸抑制人胃腺癌细胞增殖及诱导凋亡

目的在体外对舒林酸抗人胃腺癌细胞增殖和凋亡诱导作用及其机制进行初步研究.方法采用人胃腺癌细胞株MKN45,MKN28作为研究对象.体外药物敏感试验(MTT)检测不同浓度和作用时间的舒林酸对细胞的增殖抑制效应;分别用Hoechst33258细胞核荧光染色、透射电镜和DNA琼脂糖凝胶电泳观察舒林酸诱导的细胞凋亡改变;应用Western斑点免疫印迹法观察经舒林酸2mmol·L-1和4mmol·L-1作用24 h后细胞内环氧化酶-2(COX-2)和凋亡抑制蛋白Bcl-2表达程度的变化.结果舒林酸对人胃腺癌细胞MKN45,MKN28的杀伤率随着剂量的增大和作用时间的延长而增加,舒林酸对不同类型的细胞杀伤率不同.舒林酸能够诱导人胃腺癌细胞MKN45,MKN28产生凋亡,凋亡诱导作用的强弱同样具有时间和剂量依赖性,而且对不同类型胃癌细胞的凋亡诱导效应有显著差异.经舒林酸2 mmol·L-1和4 mmol·L-1作用24 h后,MKN45细胞内COX-2和Bcl-2蛋白比未经舒林酸作用的细胞表达明显减少,而MKN28细胞内COX-2和Bcl-2蛋白的表达未出现明显变化.结论舒林酸在体外对人胃腺癌细胞株MKN45和MKN28有良好的增殖抑制作用,诱导凋亡是其抑制胃癌细胞增殖的重要作用机制.舒林酸对人胃腺癌细胞的抑制和凋亡诱导作用与其抑制细胞内环氧化酶-2,并进而抑制Bcl-2的表达有关,并可能与胃癌细胞的分化状态有关.     

脓毒症大鼠肝脏组织中免疫相关基因表达的改变

目的：观察脓毒症大鼠肝脏组织中免疫相关基因表达的改变。方法将120只Wistar大鼠按随机数字表法分为假手术组30只、模型组90只,模型组根据选模后不同时间点（24、48、72 h）随机分为3个亚组各30只。通过盲肠结扎穿孔术（ CLP）复制脓毒症大鼠模型,应用含有28000个大鼠基因cDNA克隆的基因芯片,检测脓毒症大鼠肝组织在CLP后各个时点的免疫相关基因表达变化并筛选出差异基因。结果造模24 h,筛选出差异基因671条,免疫相关基因97条（表达上调48条、下调49条）;造模48 h,筛选出差异基因133条,免疫相关基因36条（表达上调13条、下调23条）;造模72 h,筛选出差异基因204条,免疫相关基因33条（表达上调18条、下调15条）。3个时间点重复基因共58条,免疫相关基因15条（表达上调4条、下调10条、先上调后下调1条）。结论脓毒症大鼠肝组织中,一系列与细胞防御及免疫功能相关的基因表达出现显著改变,它们可能在不同程度上参与了脓毒症大鼠肝损伤的病理生理过程。     

中药淫羊藿苷逆转肝癌HepG2.2.15细胞恶性表型及诱导分化研究

目的: 探讨淫羊藿苷(ICA)诱导HepG2.2.15细胞分化凋亡的作用机制.方法:MTT法检测细胞增殖;流式细胞术(FACS)检测细胞周期分布;RT-PCR方法检测P27基因、FLIP基因mRNA表达水平的变化;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测ICA处理后HepG2.2.15细胞凋亡的变化;电化学发光法和速率散射比浊法分别检测ICA处理后HepG2.2.15细胞上清液中甲胎蛋白(AFP)和转铁蛋白(Tf)水平变化.结果: ICA作用HepG2.2.15细胞增殖呈抑制作用, 具有时间依赖性. ICA处理后, HepG2.2.15细胞周期各时相分布与对照组相比发生变化, G0/G1期升高, S期减小, 与对照组相比有显著性差异(56.26±1.56% vs 49.68±1.34%, 19.95±1.24% vs 28.02±1.03%;P<0.01). ICA分别上调HepG2.2.15细胞P27和下调FLIP基因mRNA的表达水平(0.78 vs 0.27, 0.54 vs 0.90);HepG2.2.15细胞凋亡率增加, AFP下降, Tf水平升高, 与对照组相比均有显著性意义(7.09% vs 0.59%, 156±46 mg/L vs 285±58 mg/L, 152.1±26 mg/L vs 67.1±24 mg/L;P＜0.05).结论:ICA可能通过升高G0/G1期, 减少S期抑制HepG2.2.15细胞的增殖;上调P27 mRNA和Tf水平, 下调FLIP mRNA的表达和AFP合成的水平来诱导细胞分化.     

丁酸钠诱导COLO205结肠癌细胞凋亡及其对caspase-3的调控

目的: 观察丁酸钠对COLO205结肠癌细胞株caspase-3的调控, 并探讨其诱导COLO205细胞株凋亡的机制.方法: 1、2、4 mmol/L丁酸钠与结肠癌细胞共同培养48 h;MTT法测定细胞活性;免疫组织化学法检测细胞中caspase-3的蛋白表达;流式细胞仪检测细胞的凋亡率.结果: 与阴性对照组比较, 1、2、4 mmol/L丁酸钠组细胞活性下降(0.47±0.09, 0.40±0.03,0.37±0.02 vs 0.55±0.09, P<0.05或0.01);丁酸能显著促进caspase-3蛋白的阳性表达(31.9±1.15, 40.6±1.04, 51.7±1.17 vs 29.4±1.02,P<0.05或0.01), 增加COLO205细胞的凋亡率(8.27%±0.42%, 15.1%±0.72%, 21.6%±0.95% vs 7.0%±0.33%, P<0.05或0.01).结论: 丁酸钠能通过上调caspase-3基因的表达并诱导COLO205细胞凋亡.     

人参皂甙Rh2对食管癌Eca-109细胞caspase3、caspase8基因的影响

目的:探讨人参皂甙Rh2诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡过程中caspase3、caspase8凋亡调节基因的相互关系及可能的作用机制.方法:应用MTT法测定其对细胞的生长抑制作用,流式细胞术分析人参皂甙Rh2作用后细胞凋亡及增殖的变化,应用免疫细胞化学及Western blot技术检测用药前后凋亡相关基因caspase3、caspase8蛋白表达的变化.结果:人参皂甙Rh2对人食管癌Eca-109细胞有生长抑制作用,并呈时效和量效依赖关系.流式细胞仪分析结果发现,食管癌Eca-109细胞在DNA组方图上出现典型的亚二倍体峰即凋亡峰,在细胞周期中的分布也发生了明显的变化,其48h凋亡率明显高于对照组(19.10%±2.12% vs 2.10%±0.87%,P<0.01).免疫细胞化学及Western blot技术结果显示,20mg/L人参皂甙Rh2作用72h后食管癌Eca-109细胞caspase3、caspase8蛋白表达明显升高(0.35±0.04 vs 0.10±0.02,0.84±0.06 vs 0.31±0.11,均P<0.05).结论:人参皂甙Rh2具有诱导食管癌Eca-109细胞凋亡和抑制细胞...     

丹参酮ⅡA介导p38MAPK信号转导诱导人肝癌细胞凋亡

目的: 研究丹参酮ⅡA诱导人肝癌细胞凋亡和凋亡相关基因表达的p38MAPK信号转导通路, 揭示其抗肝癌的部分机制.方法: 4、8、16 mg/L丹参酮ⅡA分别作用人肝癌SMMC-7721细胞48 h后, 免疫荧光染色观察细胞凋亡情况; 琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞特征性DNA条带; 流式细胞仪法(Flowcytometry, FCM)检测细胞凋亡和细胞周期; 荧光定量PCR检测Fas和Caspase-3基因mRNA的表达水平; 并比较阻断p38MAPK信号通路后丹参酮ⅡA对肝癌细胞凋亡和Fas和Caspase-3基因mRNA的表达.结果: 丹参酮ⅡA作用48 h后, 荧光显微镜下观察到经Hoechst染色的典型凋亡细胞. 琼脂糖凝胶电泳可见凋亡细胞DNA呈规律性的梯状条带. 4、8、16 mg/L浓度丹参酮ⅡA作用人肝癌细胞后的细胞凋亡率分别为12.83%±1.51%, 17.86%±2.70%和29.24%±7.58%, 与对照组6.30%±2.08%比较均有显著性差异( P<0.01); 阻断p38MAPK信号通路后, 凋亡率和G0/G1期细胞比例明显降低( P<0.01). 8 mg/L丹参酮ⅡA作用人肝癌细胞48 h后Fas mRNA和Caspase-3 mRNA的表达明显上升; 阻断p38MAPK信号通路后, 丹参酮ⅡA作用人肝癌细胞的Fas mRNA和Caspase-3 mRNA的表达明显下降.结论: 丹参酮Ⅱ A 能诱导人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡, 阻滞肝癌细胞于G0/G1期. 通过p38MAPK信号转导通路上调Fas、Caspase-3 mRNA的表达可能是其诱导肝癌细胞凋亡的重要机制.     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP