响应面优化鱿鱼须脱皮液胶原肽酶解工艺及抗氧化活性

目的：研究秘鲁鱿鱼须脱皮液胶原肽酶解工艺及抗氧化活性。方法：以水解度和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率为指标,利用单因素试验和响应面法对其酶解工艺进行优化,并采用2,2’-联氮-二（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（2,2’-azinobis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)diammonium salt,ABTS）自由基与•OH清除率及亚铁还原能力评价其酶解产物抗氧化活性以及通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）和凝胶排阻色谱分析其分子质量分布。结果：最适酶解工艺为酶解温度50 ℃、初始pH 7.4、底物蛋白质质量分数3.2%、酶解时间3.7 h、酶添加量3 000 U/g。在此条件下,水解度和酶解产物DPPH自由基清除率分别为（37.23±0.08）%和（43.61±0.09）%,对ABTS＋•和•OH清除率的IC50分别为0.37 mg/mL和0.41 mg/mL,且表现出较强的亚铁还原能力;SDS-PAGE显示最适酶解工艺下,蛋白质基本被水解为小分子多肽;凝胶排阻色谱分析可知,酶解产物分子质量在1～5 kD之间。结论：酶解产物具备较强的抗氧化活性,可作为抗氧化活性物质基料,充分开发利用。     

脱脂羊脑蛋白水解多肽的分离纯化及抗氧化活性

为制备羊脑蛋白抗氧化肽,本实验对脱脂羊脑蛋白含量及氨基酸组成进行了分析;采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）对枯草芽孢杆菌中性蛋白酶不同酶解时间的酶解液分子质量进行了分析;采用交联葡聚糖凝胶Sephadex G-25和Sephadex G-15对羊脑酶解产物进行了逐级分离纯化,以羟自由基（·OH）和亚硝酸根离子清除能力为指标对分离组分进行抗氧活性评价,并对纯化后的组分抗氧化活性进行了测定。结果表明,脱脂羊脑粉中蛋白含量为60.55%,在测定的17 种氨基酸中,谷氨酸和天冬氨酸这两种酸性氨基酸含量最高,且含有7 种必需氨基酸;羊脑蛋白经酶解后,分子质量集中在10 kD以下;经Sephadex G-25纯化后,得到了6 个组分,其中组分F4的抗氧化活性最强,组分F4经SephadexG-15纯化后,得到3 个组分,其中组分F4-2的抗氧化活性最强,组分F4-2对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、·OH、超氧阴离子自由基（O2－·）、亚硝酸根离子的半数抑制率IC50分别为1.64、2.47、7.98、5.14 mg/mL。     

羊肝蛋白酶解条件优化及酶解产物抗氧化活性研究

为优化羊肝蛋白酶解工艺条件及探讨其体外抗氧化活性,以水解度为评价指标,采用碱性蛋白酶酶解羊肝,在单因素试验基础上,通过响应面法优化羊肝蛋白的酶解工艺条件。结果表明,羊肝蛋白最佳酶解条件为酶解温度51 ℃、pH 8.5、酶解时间4.1 h、加酶量0.40%。在此条件下,进行3次验证试验,测得羊肝酶解液实际水解度为（40.31±0.24）%。体外抗氧化试验结果表明,羊肝酶解产物具有一定的抗氧化活性,其清除羟自由基（·OH）、超氧阴离子自由基（O2-·）和DPPH自由基的IC50值分别为17.01 mg/mL、13.21 mg/mL和10.42 mg/mL,并具有一定的还原能力。     

石斑鱼肉肽的酶法制备工艺及其抗氧化性

以冰鲜石斑鱼肉为原料,采用碱性蛋白酶酶解的方法制备蛋白肽。以水解度和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率为评价指标,在单因素试验的基础上,运用正交试验设计优化肽的制备工艺;利用DPPH自由基法、2,2’-联氮双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（2,2’-azinobis（3-ethylbenzothi azoline-6-sulfonic acid）ammonium salt,ABTS）自由基法、羟自由基（·OH）法和铁氰化钾还原法评价酶解物的抗氧化性。结果表明：石斑鱼肉肽的最佳制备条件为：酶解温度55 ℃、酶解pH 9、酶用量5 000 U/g、底物质量浓度8 g/100 mL、酶解时间5 h;石斑鱼肉肽酶解物具有较强的抗氧化性,清除DPPH自由基能力、ABTS+·能力、·OH能力和总还原力均随酶解物质量浓度的增加而增强;酶解物清除DPPH自由基、ABTS+·、·OH的半抑制浓度（IC50）值分别为（1.18±0.26）、（0.89±0.05） mg/mL和（0.35±0.02） mg/mL。     

酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的分离与稳定性研究

目的：研究酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的分离和稳定性,为其开发应用提供基础数据。方法：超滤分离酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽,比色法测定其抗氧化能力。结果：超滤分级后得到分子质量为200～3 000 D的酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽对O2－•、•OH、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基的IC50分别为18.85 mg/mL、3.13 mg/mL、35.23 μg/mL。该抗氧化肽经过4 h胃蛋白酶+胰蛋白酶处理前后对DPPH自由基清除率分别为81.05%、82.26%;在pH 4、8条件下处理1 h,对DPPH自由基清除率分别为98.02%、11.80%（100 μg/mL）;在温度95 ℃条件下处理1 h,对DPPH自由基清除率为87.11%（100 μg/mL）;用浓度为1.0 mol/L的NaCl处理6 h,相比对照组,对DPPH自由基清除率由51.58%下降到22.68%（60 μg/mL）。结论：超滤后得到的分子质量为200～3 000 D的酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的抗氧化能力比酶解原液有一定提高;且在酸性、高温、脱盐处理后对DPPH自由基的清除能力保持较好;胃肠道消化酶对其DPPH自由基清除能力的影响不显著（P＞0.05）。     

鸭肉蛋白酶解产物的抗氧化特性

为了解酶解时间、蛋白酶种类对鸭肉蛋白酶解产物抗氧化特性的影响,分别用复合蛋白酶、风味蛋白酶和胰酶对鸭肉进行单酶酶解和双酶分步酶解（胰酶＋复合蛋白酶、胰酶＋风味蛋白酶）,制备不同时间段的酶解产物,并对其自由基清除能力（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基（hydroxyl radical,·OH）和超氧阴离子自由基（superoxide radical,O2－·））和总还原力进行分析。结果表明：各鸭肉蛋白酶解产物的DPPH自由基清除率随着酶解时间的延长而增加,但·OH和O2－·清除率及总还原力随着酶解时间的延长先增加后降低（P＜0.05）。在5 种鸭肉蛋白酶解产物中,复合蛋白酶酶解物表现出最强的DPPH自由基清除能力（75.70±1.54）%、·OH清除能力（59.41±1.24）%和O2－·清除能力（98.50±4.51）%,但用双酶分步酶解得到的酶解产物表现出最强的总还原力（0.330±0.017）。因此鸭肉蛋白酶解产物的抗氧化特性受酶解时间和蛋白酶种类的影响,复合蛋白酶是制备鸭肉蛋白源抗氧化肽的最适蛋白酶。     

不同干燥方式对银耳多糖理化特性及抗氧化活性的影响

研究传统热风干燥、冷冻干燥和抽真空干燥等不同干燥方式对银耳多糖（Tremel la fuci formispolysaccharides,TFPs）的理化特性和体外还原力、清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基（hydroxyl free radical,•OH）和超氧阴离子自由基（superoxide free radicals,O2－•）的影响。结果表明：3 种干燥方式对TFPs均有显著影响,其中冷冻干燥处理多糖（freezing drying Tremella fuciformispolysaccharides,TFPs-F）的得率、总糖和黏度最高;3 种干燥方式对粗多糖相对分子质量分布和和抗氧化活性有一定影响;TFPs-F的还原力、清除DPPH自由基、•OH和O2－•的半抑制浓度（half-inhibitory concentration,IC50）分别为2.61、1.64、1.78、1.75 mg/mL;传统热风干燥和抽真空干燥处理多糖的还原力、清除DPPH自由基、•OH和O2－•的IC50高于低温冷冻干燥处理多糖相应的IC50。结果说明,冷冻干燥处理是获得高品质和高活性银耳多糖的较好方法。     

酶解方式对核桃蛋白肽及其抗氧化活性的影响

分别采用7种蛋白酶对核桃蛋白进行单酶水解,并与双酶复合酶解进行比较,考察不同酶解方式对酶解产物水解度、短肽得率和抗氧化活性的影响。结果表明,碱性蛋白酶单酶酶解核桃蛋白,产物的水解度和短肽得率显著高于其它单酶处理,分别达到18.94%和76.37%,对DPPH自由基清除能力的IC50值仅为3.23mg/mL,抗氧化活性显著高于其它处理;将碱性蛋白酶分别与其它蛋白酶组合酶解,核桃蛋白酶解产物的水解度和短肽得率均有所提高,其中与木瓜蛋白酶组合处理的水解度可达28.36%,短肽得率可提高至85.62%。双酶酶解产物对提高清除DPPH自由基和羟自由基的活性不显著,碱性蛋白酶分别与中性蛋白酶、木瓜蛋白酶的组合可以显著提高酶解产物清除超氧阴离子自由基的活性。     

响应面试验优化广昌白莲蛋白提取工艺及其酶解多肽抗氧化活性

以广昌白莲为原料,通过单因素试验和响应面试验优化超声波辅助提取白莲蛋白的工艺,并采用胃蛋白酶和碱性蛋白酶对白莲蛋白进行单酶和有次序双酶水解,研究其酶解产物的抗氧化活性。结果表明,广昌白莲蛋白的最佳提取条件为：在超声功率固定250 W条件下,料液比1∶14（g/mL）、提取温度35.5 ℃、提取时间58 min、NaCl浓度0.14 mol/L。所得蛋白提取率达到89.86%,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis,SDS-PAGE）分析显示其分子质量主要分布在14～25 kD和35～60 kD之间;不同酶解方式显著影响了白莲蛋白的酶解效果及其酶解产物的抗氧化活性,其中先胃蛋白酶后碱性蛋白酶的双酶酶解为最佳方式,其蛋白水解度达到20%,其酶解产物（P-A）H的总还原能力（A700 nm）、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除能力和·OH清除能力IC50值分别达到1.002、0.379 mg/mL和1.093 mg/mL,表明广昌白莲蛋白酶解产物具有较强的抗氧化活性。     

短瓣金莲花不同提取部位的抗氧化活性

目的：研究短瓣金莲花的抗氧化活性部位。方法：将短瓣金莲花药材依次用石油醚、乙酸乙酯、95%乙醇、60%乙醇、30%乙醇和去离子水提取,采用紫外-可见分光光度法对不同溶剂提取部位的黄色素、总黄酮和总酚含量进行分析,并测试各提取部位对羟自由基（•OH）和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基的清除作用以对其抗氧化活性进行研究。结果：短瓣金莲花石油醚提取部位的黄色素含量最高,为（11.37±0.07 ）mg/g;而60%乙醇提取部位总黄酮和总酚含量最高,分别为（213.21±1.12）mg/g和（121.75±0.58） mg/g,95%乙醇提取部位次之,分别为（200.47±0.65）mg/g和（105.19±0.61）mg/g。石油醚提取部位清除•OH能力最强,半抑制浓度（50% inhibiting concentration,IC50）为92.77 mg/L;95%乙醇提取部位清除DPPH自由基能力最强,IC50为10.14 mg/L,60%乙醇提取部位次之,IC50为10.70 mg/L。结论：短瓣金莲花清除•OH能力与黄色素含量呈正相关性,而清除DPPH自由基能力与黄酮和多酚含量呈正相关性;短瓣金莲花的石油醚和95%乙醇提取部位是最佳的抗氧化活性部位,有待进一步深入研究。     

猪皮胶原蛋白酶解及其酶解产物的抗氧化活性

以新鲜猪皮为原料,利用Alcalase水解胶原蛋白,并对影响Alcalase水解过程的各个因素进行研究,通过对水解度和超氧阴离子自由基(O2－ ·)清除率的测定,确定Alcalase水解猪皮胶原蛋白的最适条件;研究在最适条件下制备的不同质量浓度的猪皮胶原蛋白酶解液对DPPH自由基和O2－ ·的清除效果。结果表明：Alcalase水解猪皮胶原蛋白的最适条件为：pH7.5、温度55℃、酶与底物比6000U/g、底物质量浓度40mg/mL,水解时间4h;在此水解条件下,水解度达到9.55%,O2－ ·清除率达到60.11%;在相应质量浓度10～50mg/mL范围内,猪皮胶原蛋白酶解液的DPPH自由基最大清除率为95.06%,IC50为3.89mg/mL;O2－ ·最大清除率为65.89%,IC50为16.43mg/mL。猪皮胶原蛋白酶解液具有较强的自由基清除能力。     

鸡胸软骨Ⅱ型胶原免疫活性肽的制备及其性质

以水解度为指标,优化了中性蛋白酶酶解鸡胸软骨Ⅱ型胶原的条件,在此基础上制备不同水解度Ⅱ型胶原酶解复合物,并以淋巴细胞增殖率为指标对其免疫活性进行研究。结果表明,中性蛋白酶的酶解能力最强,其最佳酶解条件为：酶解温度50 ℃、pH 7.5、底物质量浓度25 mg/mL、加酶量40 U/mg、酶解时间150 min。当Ⅱ型胶原在水解度为18%时,其对淋巴细胞的增殖活性达到58.69%。Ⅱ型胶原酶解复合物的质量浓度对淋巴细胞的增殖率也有显著影响,当其质量浓度达到1 mg/mL时,对淋巴细胞增殖能力达到最大。免疫活性较高的Ⅱ型胶原酶解复合物的分子质量主要分布于1 000～180 D范围内,占其总含量的75.21%。     

响应面试验优化基于胶原特性酶解猪皮工艺及其抗氧化特性

以新鲜猪皮为原料,基于凝胶特性以羟脯氨酸含量为指标,对影响胃蛋白酶酶解过程的各个因素进行研究,通过Box-Behnken设计优化酶解工艺;以清除O2－•、•OH、H2O2能力和DNA损伤保护作用为指标研究酶解产物的抗氧化功能。结果表明：最佳酶解条件为加酶量0.25%、料液比1∶2（g/mL）、酶解时间1.65 h、酶解温度41.15 ℃,在此酶解条件下其产物清除O2－•的IC50值为20.19 mg/mL;清除•OH的IC50值为6.36 mg/mL;清除H2O2的IC50值为0.65 mg/mL;对DNA损伤保护作用的IC50值为1.86 mg/mL。     

绿豆皮黄酮的超声波辅助水提工艺优化及抗氧化活性

对绿豆皮黄酮的超声波辅助水提工艺及其体外抗氧化活性进行研究。在单因素试验的基础上,以超声提取时间、超声功率、超声温度和液料比为自变量,以绿豆皮黄酮提取量为响应值,采用四因素五水平的中心组合试验设计进行响应面回归分析。通过分析各因素的显著性和交互作用,优化得到绿豆皮黄酮的超声波辅助水提最佳工艺条件为：超声功率419 W（实际采用400 W）、超声温度70 ℃、超声时间75 min、液料比45∶1（mL/g）,在此条件下绿豆皮总黄酮提取量可达（10.18±0.03） mg/g。在对绿豆皮水提黄酮的体外抗氧化活性研究中,发现经HPD100大孔吸附树脂初步纯化的绿豆皮水提黄酮对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基的清除能力和VC相当,而其对羟自由基清除能力低于VC,绿豆皮水提黄酮对2 种自由基清除的IC50分别为6.57 μg/mL和54.21 μg/mL,VC的IC50值分别为6.12 μg/mL和16.58 μg/mL。     

棘胸蛙肌肉水解物的制备及抗氧化活性评价

以棘胸蛙腿部肌肉为研究材料,利用木瓜蛋白酶和酸性蛋白酶两种酶,以成品率和水解度为指标,通过单因素结合响应面分析的方法优化棘胸蛙水解物的酶解工艺,同时对棘胸蛙水解物抗氧化能力进行研究。结果表明,棘胸蛙水解物经木瓜蛋白酶和酸性蛋白酶的最佳酶解条件为：在各酶最适pH和温度的条件下,料液比为1:15(g/mL)、酶解时间4 h、加酶量为2%(m/m);该工艺条件下,棘胸蛙水解物的水解度分别为19.23%、23.51%,成品率分别为22.66%、15.32%,清除DPPH自由基的IC₅₀值分别为2.61、2.95mg/mL,清除ABTS⁺自由基的IC₅₀值分别为3.46、3.20 mg/mL,清除羟基自由基的IC₅₀值分别为8.20、9.23 mg/mL。综上,通过响应面法优化的棘胸蛙水解物酶解工艺方便可行,制备得到的水解物具有较强抗氧化活性,为棘胸蛙资源的开发提供了理论基础。     

牛蒡根多酚和黄酮超高压提取工艺优化及体外抗氧化活性

对牛蒡根多酚与黄酮的超高压提取工艺和抗氧化活性进行研究。在单因素试验基础上,用Box-Behnken设计,采用三因素三水平的响应面分析方法优化牛蒡根多酚和黄酮提取工艺。依据数据的模型拟合和回归分析,确定乙醇体积分数和料液比是影响多酚和黄酮得率的重要因素,并最终获得超高压辅助提取牛蒡根多酚和黄酮的最佳工艺条件为：乙醇体积分数75%、料液比1∶28（g/mL）、压力236 MPa、保压时间9 min、室温提取,采取该工艺得到牛蒡根多酚得率为（107.83±1.148） mg/g,黄酮得率为（21.27±0.950） mg/g。体外抗氧化实验结果表明：牛蒡根多酚提取物具有较强的金属离子螯合能力（IC50值为（1.393±0.011） mg/mL）、DPPH自由基清除能力（IC50值为（0.309±0.007） mg/mL）和铁离子还原能力。     

Plackett-Burman和Box-Behnken试验优化苦荞蛋白酶解制备抗菌肽的工艺

用中性蛋白酶酶解苦荞蛋白制备抗菌肽,以抑菌率和肽质量浓度为响应值,在底物质量分数、加酶量、pH值、酶解温度和酶解时间5个单因素试验基础上,采用Plackett-Burman试验选出其中影响显著的因素,再以肽质量浓度为评价指标,用Box-Behnken试验优化抗菌肽制备工艺。最佳工艺为:底物质量分数3.22%、加酶量4 000 U/g、pH 6.86。在此条件下,苦荞蛋白酶解产生的肽质量浓度为32.41 mg/mL(预测值为32.12 mg/mL),对大肠杆菌抑菌率为(27.88±2.78)%,对金黄色葡萄球菌的抑菌率为(94.56±0.74)%。结果表明,优化中性蛋白酶酶解苦荞蛋白制备抗菌肽工艺合理。