脱脂羊脑蛋白酶解条件优化及酶解产物体外抗氧化活性

以脱脂羊脑蛋白为原料,采用响应面（response surface method,RSM）法建立脱脂羊脑蛋白的枯草芽孢杆菌中性蛋白酶水解回归模型,优化酶解工艺条件,在体外研究脱脂羊脑中性蛋白酶酶解产物的抗氧化性能。结果表明：脱脂羊脑蛋白底物质量浓度为3.03 g/100 mL,酶添加量为5 653.20 U/g,温度为39.4 ℃时,脱脂羊脑蛋白水解度最高,达到（14.59±1.26）%。当脱脂羊脑蛋白水解度为（14.39±1.17）%时,酶解产物对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基和羟自由基（•OH）清除能力最强;当脱脂羊脑蛋白水解度为（12.48±0.71）%时 ,酶解产物对超氧阴离子自由基（O2－•）清除能力和总还原能力最强;当脱脂羊脑蛋白水解度为（12.48±0.71）%时,酶解产物对DPPH自由基、•OH、O2－•、亚硝酸根阴离子的IC50分别为2.49、3.13、10.37、10.89 mg/mL,酶解产物对Fe2+螯合率的IC50为7.48 mg/mL,证明脱脂羊脑蛋白酶解产物具有一定抗氧化活性。     

鲨鱼肉酶解物的抗氧化作用及其稳定性研究

以还原能力和金属离子螯合能力、清除DPPH·、O2-·、OH·自由基能力为指标,考察鲨鱼肉酶解物的抗氧化活性,同时以清除自由基DPPH·的活性为指标,分析温度和pH值对其抗氧化作用稳定性的影响。结果表明:鲨鱼肉酶解液产物具有一定的还原能力和金属离子螯合能力,其清除DPPH·、O2-·、OH·自由基的IC50值分别为10.16、23.71、19.82mg/mL。酶解产物耐热性强;在酸性环境中,鲨鱼肉酶解液能较好地保持其抗氧化活性,但在碱性环境中抗氧化活性丧失较快。     

芝麻蛋白酶解条件控制及其产物抗氧化研究

以水解度(DH)为指标,采用五元二次回归正交旋转组合实验对胰酶酶解芝麻蛋白工艺进行探索。实验结果表明胰酶最佳酶解工艺为:pH 8.0,温度45℃,底物浓度为4%,酶与底物浓度为9600u/g,酶解时间为120m in。在此条件下酶解,水解度可达68.30%。并用比色法分别检测了最佳条件下酶解所得的芝麻蛋白酶解液对O2-.和.OH的清除作用。结果表明芝麻蛋白酶解液对O2-.和.OH都有一定的清除作用,且呈剂量依赖关系。酶解液对O2-.清除作用随水解度的增大而增强,其半清除剂量(IC50)在12~17 mg/mL,弱于未酶解的蛋白(IC50=3.88 mg/mL);对.OH有着极强的清除作用,并随水解度的增大而增强,半清除剂量(IC50)0.2~0.5 mg/mL,优于未酶解蛋白(IC50=0.97 mg/mL)。     

东海海参胶原蛋白酶解物的制备与抗氧化活性及其对神经细胞损伤的保护作用

目的:研究木瓜蛋白酶酶解东海海参胶原蛋白的最优化条件,测定酶解产物的抗氧化活性及其对神经细胞损伤的保护作用。方法:以水解度为指标,通过响应面法优化东海海参胶原蛋白的酶解条件,确定最佳酶解参数。通过测定酶解产物对超氧自由基、羟基自由基和DPPH自由基的清除能力,研究其抗氧化能力。通过测定SK-N-SH神经细胞的存活率并进行形态观察,研究酶解产物对由H2O2造成的神经细胞损伤的保护作用。结果:木瓜蛋白酶酶解东海海参胶原蛋白的最佳条件为:底物含量34.3 g/g酶,温度43.2℃,pH 7.12,在该条件下东海海参胶原蛋白的水解度为16.73%。东海海参胶原蛋白酶解产物对超氧自由基、羟基自由基和DPPH自由基具有较好的清除作用,且与其浓度呈剂量依赖关系。酶解产物清除上述3种自由基的IC50值分别为34,25和24 mg/mL。胶原蛋白酶解产物对由H2O2造成的神经细胞SK-N-SH的损伤具有较好的保护作用。结论:研究结果为东海海参胶原蛋白的开发和利用奠定了良好基础。     

裸燕麦球蛋白酶解液的纯化及其抗氧化研究

通过Osborne法制得的裸燕麦球蛋白,利用碱性蛋白酶对其进行酶解,采用Sephadex G-25凝胶层析对酶解液进行纯化及其分子质量测定,然后对各分离组分清除 ·OH、O2－ ·、DPPH自由基能力进行研究。结果表明：酶解液经分离纯化得到图谱为2个峰,分别为组分I(分子质量10738～133929D)和组分II(分子质量114～861D)。测得组分II清除 ·OH(IC50 0.589mg/mL)、O2－ ·(IC50 1.783mg/mL)、DPPH自由基(IC50 0.095mg/mL)能力高于组分I和酶解液。     

不同干燥方式对银耳多糖理化特性及抗氧化活性的影响

研究传统热风干燥、冷冻干燥和抽真空干燥等不同干燥方式对银耳多糖（Tremel la fuci formispolysaccharides,TFPs）的理化特性和体外还原力、清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基（hydroxyl free radical,•OH）和超氧阴离子自由基（superoxide free radicals,O2－•）的影响。结果表明：3 种干燥方式对TFPs均有显著影响,其中冷冻干燥处理多糖（freezing drying Tremella fuciformispolysaccharides,TFPs-F）的得率、总糖和黏度最高;3 种干燥方式对粗多糖相对分子质量分布和和抗氧化活性有一定影响;TFPs-F的还原力、清除DPPH自由基、•OH和O2－•的半抑制浓度（half-inhibitory concentration,IC50）分别为2.61、1.64、1.78、1.75 mg/mL;传统热风干燥和抽真空干燥处理多糖的还原力、清除DPPH自由基、•OH和O2－•的IC50高于低温冷冻干燥处理多糖相应的IC50。结果说明,冷冻干燥处理是获得高品质和高活性银耳多糖的较好方法。     

鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽的抗氧化活性

选取铁离子还原体系和3 种自由基体系为指标,研究鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽体外清除自由基效果和抗氧化作用。采用超滤膜分离鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽组分,筛选出体外清除•OH活性最好的组分,再建立小鼠衰老模型,将分离得到活性最好的组分采用灌胃法,测定小鼠皮肤中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、过氧化氢酶（catalase,CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）及丙二醛（malondialdehyde,MDA）和羟脯氨酸（hydroxyproline,Hyp）的含量,研究鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽体内抗氧化和清除自由基作用。结果表明：鮟鱇鱼皮胶原蛋白肽具有较强的还原能力且对O－2•、DPPH自由基、•OH具有清除效果,质量浓度为10 mg/mL时对•OH、DPPH自由基、O－2•的清除率和对Fe3+ 的还原能力分别为70.48%、68.78%、42.53%和0.676;分子质量小于2 000 D的鮟鱇皮胶原蛋白肽组分对•OH具有较好的清除效果,IC50为15.7 mg/mL;剂量为100 mg/（kg•d）时,显著提高了皮肤中SOD、GSH-Px、CAT的活性,较模型组分别增加20.9%、41.3%和58.1%,且显著抑制MDA的形成。     

秋刀鱼抗氧化肽制备及其抗氧化活性的研究

本文选择胰酶对秋刀鱼蛋白进行酶解,以蛋白质利用率和氧化自由基吸收能力(ORAC值)为指标,运用响应面分析法优化秋刀鱼蛋白制备抗氧化肽的酶解工艺,并且对酶解产物的特性进行了研究。结果表明:最优酶解条件为加酶量1085 U/g蛋白,水料比3:1,酶解时间8 h时,此时蛋白质利用率和ORAC值分别为76.86%和883.40μmol Trolox equivalent/g。秋刀鱼酶解产物的总氨基酸含量为4576.69 mg/100 mL,其中游离氨基酸和肽态氨基酸分别占34.28%和65.31%;总氨基酸中必需氨基酸占34.76%,抗氧化活性氨基酸和支链氨基酸占26.25%,说明秋刀鱼酶解产物具有较高的营养价值。秋刀鱼酶解产物中相对分子质量在1000~3000 Da之间的组分最多,占44.18%。秋刀鱼酶解产物清除DPPH·的IC50值为3.32 mg/mL,清除O2-·的IC50值为5.08 mg/mL,当秋刀鱼酶解产物的蛋白浓度为10 mg/mL时,其吸光值为0.67,说明秋刀鱼酶解产物具有较高的抗氧化活性。     

羊肝蛋白酶解条件优化及酶解产物抗氧化活性研究

为优化羊肝蛋白酶解工艺条件及探讨其体外抗氧化活性,以水解度为评价指标,采用碱性蛋白酶酶解羊肝,在单因素试验基础上,通过响应面法优化羊肝蛋白的酶解工艺条件。结果表明,羊肝蛋白最佳酶解条件为酶解温度51 ℃、pH 8.5、酶解时间4.1 h、加酶量0.40%。在此条件下,进行3次验证试验,测得羊肝酶解液实际水解度为（40.31±0.24）%。体外抗氧化试验结果表明,羊肝酶解产物具有一定的抗氧化活性,其清除羟自由基（·OH）、超氧阴离子自由基（O2-·）和DPPH自由基的IC50值分别为17.01 mg/mL、13.21 mg/mL和10.42 mg/mL,并具有一定的还原能力。     

碱性蛋白酶酶解魔芋飞粉制备抗氧化多肽

为优化碱性蛋白酶酶解魔芋飞粉蛋白制备抗氧化多肽的条件,采用响应面分析法,以·OH清除率为响应值,研究酶解温度、酶用量、酶解p H值对制备抗氧化肽的影响。此外,还研究了不同分子质量魔芋多肽的抗氧化活性,结果表明:最佳酶解工艺参数:底物质量分数2.25%、温度55℃、酶用量3 228 U/g底物、p H 7.84、水解时间270 min。该条件下抗氧化多肽(18.35 mg/m L)的·OH清除率为73.41%,多肽得率为75.37%。通过Sephadex G-25和Sephadex G-15串联柱分离得到5个多肽组分,其中分子质量为1 500 u和1 000 u的组分抗氧化活性较高,其清除DPPH·的IC50分别为2.82 mg/m L和3.65 mg/m L;清除·OH的IC50分别为9.03mg/m L和14.16 mg/m L;抑制大鼠肝脏自发性脂质过氧化的IC50分别为0.21 mg/m L和0.66 mg/m L;抑制大鼠红细胞H2O2诱导氧化溶血的IC50分别为0.11 mg/m L和0.22 mg/m L。     

鸭肉蛋白酶解产物的抗氧化特性

为了解酶解时间、蛋白酶种类对鸭肉蛋白酶解产物抗氧化特性的影响,分别用复合蛋白酶、风味蛋白酶和胰酶对鸭肉进行单酶酶解和双酶分步酶解（胰酶＋复合蛋白酶、胰酶＋风味蛋白酶）,制备不同时间段的酶解产物,并对其自由基清除能力（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基（hydroxyl radical,·OH）和超氧阴离子自由基（superoxide radical,O2－·））和总还原力进行分析。结果表明：各鸭肉蛋白酶解产物的DPPH自由基清除率随着酶解时间的延长而增加,但·OH和O2－·清除率及总还原力随着酶解时间的延长先增加后降低（P＜0.05）。在5 种鸭肉蛋白酶解产物中,复合蛋白酶酶解物表现出最强的DPPH自由基清除能力（75.70±1.54）%、·OH清除能力（59.41±1.24）%和O2－·清除能力（98.50±4.51）%,但用双酶分步酶解得到的酶解产物表现出最强的总还原力（0.330±0.017）。因此鸭肉蛋白酶解产物的抗氧化特性受酶解时间和蛋白酶种类的影响,复合蛋白酶是制备鸭肉蛋白源抗氧化肽的最适蛋白酶。     

洋葱油的抗氧化活性研究

探讨洋葱油对羟基自由基、超氧阴离子自由基、过氧化氢的清除作用以及对羟基自由基引发DNA损伤的抑制作用,并与天然抗氧化剂Vc作比较。结果显示洋葱油对羟基自由基的清除作用及对羟基自由基引发DNA损伤的抑制作用效果明显,与Vc相当。对超氧阴离子自由基、过氧化氢的也有一定的清除作用,效果稍差于Vc。研究表明,洋葱油具有很好的抗氧化作用。     

柞蚕雄蛾黄酮的提取及其体外抗氧化活性分析

研究柞蚕雄蛾黄酮提取工艺及其体外抗氧化作用,采用超声波乙醇提取柞蚕雄蛾黄酮,利用紫外-可见吸收光谱对其进行鉴定,采用正交试验设计优选柞蚕雄蛾黄酮提取的最佳工艺条件。从还原能力以及清除1,1-二苯基苦基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基（·OH）、超氧阴离子自由基（O2－·）效果来考察柞蚕雄蛾黄酮的体外抗氧化能力。得到最佳工艺条件为：乙醇体积分数60%、料液比1∶40（g/mL）、提取时间45 min、提取温度70 ℃,在此条件下进行验证实验,柞蚕雄蛾黄酮的一次提取量可达3.72 mg/g。柞蚕雄蛾黄酮对自由基的清除能力较强,均呈现出量效关系,其清除DPPH自由基、·OH、O2－·的IC50值分别为752.4、617.8、813.4 μg/mL,其中清除·OH能力要强于VC和2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚,清除O2－·能力大于2,6-二叔丁基-4-甲基苯
酚。表明柞蚕雄蛾黄酮具有较强的体外抗氧化活性。     

小麦秸秆酶法制备低聚木糖及其抗氧化活性

研究小麦秸秆酶法制备低聚木糖的最佳工艺及其抗氧化作用。确定低聚木糖的最佳制备条件为：酶解pH 6.0、木聚糖酶用量3 g/L、底物质量浓度70 g/L、酶解温度50 ℃、酶解时间4 h。在此条件下,酶解产生的还原糖含量为9.5 g/L,可溶性总糖含量为26.3 g/L,平均聚合度为2.77。考察低聚木糖的抗氧化活性,发现其对•OH、O2－•和DPPH自由基的清除能力呈量效关系。     

纤维素酶辅助提取芦笋黄酮及其抗氧化活性分析

以黄酮得率为指标,利用纤维素酶协同乙醇提取法从芦笋中提取黄酮,采用响应面设计优化最佳提取工艺参数。结果表明：当液料比50∶1（mL/g）、酶添加量0.20%、乙醇体积分数38.90%、酶解时间1.50 h、酶解温度50.0 ℃、pH 5.0时,芦笋黄酮最高得率为3.99%。当样品质量浓度达到100 μg/mL时,芦笋黄酮对羟自由基的清除率为46.08%,芦笋黄酮对超氧阴离子自由基的清除率为59.42%。小鼠体外抗氧化实验表明,20 μg/mL芦笋黄酮处理组超氧化物歧化酶（SOD）活力提高16.85%,丙二醛（MDA）含量减少2.49%。以D-半乳糖法亚急性衰老小鼠为模型,高剂量组小鼠血清和肝组织液SOD活力分别提高11.69%和27.62%,MDA含量分别减少38.04%和37.95%。     

荔枝皮原花青素的体外抗氧化活性和对DNA损伤的保护作用

分别采用邻苯三酚- 鲁米诺化学发光体系、硫酸亚铁- 鲁米诺- 过氧化氢化学发光体系和过氧化氢- 鲁米诺化学发光体系测定白腊、妃子笑、糯米糍和怀枝4 个品种的荔枝皮原花青素(procyanidins of litchi pericarp,LPPC)体外清除超氧阴离子自由基、羟自由基和过氧化氢的能力。同时运用硫酸铜- 邻菲啰啉- 抗坏血酸- 过氧化氢-DNA体系测定不同LPPC 对诱导体系DNA 损伤的保护作用。实验结果表明：白腊LPPC 具有较好的体外清除超氧阴离子自由基和过氧化氢的能力;妃子笑呈现出较显著的羟自由基清除能力和保护DNA 损伤的效果。不同品种的LPPC在不同化学发光体系中的抗氧化活性呈现较大差异。     

沙棘果渣总黄酮提取工艺及抗氧化活性分析

利用超声波辅助提取技术对河西走廊沙棘榨汁提油后的果渣下脚料总黄酮提取工艺进行优化,同时考察果渣黄酮提取液的还原力和清除羟自由基和超氧阴离子自由基的能力。通过单因素试验和L9（34）正交试验,得到影响黄酮得率的主要因素及其影响力大小为乙醇体积分数＞提取时间＞料液比;确定最佳提取条件为乙醇体积分数60%、提取时间40 min、料液比1∶50（g/mL）;此条件下,河西走廊沙棘果渣中总黄酮提取率为2.55%,果皮渣中总黄酮提取率为0.651%,沙棘籽粕中总黄酮提取率为1.901%。当质量浓度大于0.151 4 mg/mL时,沙棘果渣黄酮提取液的还原力大于VC的还原力;沙棘果渣黄酮提取液对羟自由基和超氧阴离子自由基均有一定的清除作用,其对羟自由基的清除率为39.07%～42.01%,大于同等质量浓度VC的清除作用,而对超氧阴离子自由基的清除率为47.17%～60.38%,小于同等质量浓度VC的清除作用,说明沙棘果渣黄酮提取液对羟自由基有更强的清除能力。     

Antioxidant and DNA Damage Protection Activities of Duck Gizzard Peptides by Chemiluminescence Method

Antioxidant and DNA damage protection activity of duck gizzard peptides were evaluated using chemiluminescence method. The duck gizzard peptides exhibited free radical scavenging activity against superoxide anions, hydroxide radicals, and hydrogen peroxide, as well as DNA damage protection in a dose-dependent manner. The duck gizzard peptides had varying degrees of antioxidant activity for the inhibition of different radical species as well as DNA damage, with half-inhibition concentration (IC₅₀) values of 14.58, 0.0163, 19.80, and 1.93 mg/mL, respectively. The duck gizzard peptides had the strongest inhibition of hydroxyl radical activity, and the weakest inhibition of hydrogen peroxide radicals. The results clearly indicated that duck gizzard peptides were good sources of natural antioxidants for future applications in the food industry.     

酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的分离与稳定性研究

目的：研究酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的分离和稳定性,为其开发应用提供基础数据。方法：超滤分离酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽,比色法测定其抗氧化能力。结果：超滤分级后得到分子质量为200～3 000 D的酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽对O2－•、•OH、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基的IC50分别为18.85 mg/mL、3.13 mg/mL、35.23 μg/mL。该抗氧化肽经过4 h胃蛋白酶+胰蛋白酶处理前后对DPPH自由基清除率分别为81.05%、82.26%;在pH 4、8条件下处理1 h,对DPPH自由基清除率分别为98.02%、11.80%（100 μg/mL）;在温度95 ℃条件下处理1 h,对DPPH自由基清除率为87.11%（100 μg/mL）;用浓度为1.0 mol/L的NaCl处理6 h,相比对照组,对DPPH自由基清除率由51.58%下降到22.68%（60 μg/mL）。结论：超滤后得到的分子质量为200～3 000 D的酶解缫丝蚕蛹蛋白抗氧化肽的抗氧化能力比酶解原液有一定提高;且在酸性、高温、脱盐处理后对DPPH自由基的清除能力保持较好;胃肠道消化酶对其DPPH自由基清除能力的影响不显著（P＞0.05）。