酸性蛋白酶制备花椒籽蛋白抗菌肽的研究

利用酸性蛋白酶酶解花椒籽蛋白制备抗菌肽,以底物质量浓度、酶与底物比、pH值、酶解温度、酶解时间为影响因子,在单因素试验结果的基础上,应用Box-Behnken方法进行三因素三水平的试验设计,以对大肠杆菌的抑菌率为响应值,应用响应面法对花椒籽蛋白制备抗菌肽工艺进行优化。其最佳工艺条件为：底物质量浓度30 mg/mL、酶与底物比3.0%、酶解pH 4.0、酶解温度51.2 ℃、酶解时间4.7 h,此条件下酶解产生的抗菌肽复合物的水解度为9.05%,对大肠杆菌的抑菌率为56.98%。     

碱性蛋白酶水解苦荞蛋白工艺优化及其抗氧化活性

采用碱性蛋白酶对苦荞蛋白进行酶解,以水解度(DH)作为指标,采用单因素试验和正交试验优化苦荞蛋白酶解工艺。以VC作为对比,检测苦荞蛋白肽的体外抗氧化能力。结果表明:苦荞蛋白最佳酶解条件为:底物浓度3%, pH 10,温度45℃,加酶量5%,酶解时间4 h。在此条件下水解度DH为19.42%,制备的苦荞蛋白肽羟自由基的清除率IC50为1.372 mg/mL,抑制羟自由基的能力为17.55 U/mg。表明苦荞蛋白肽具有较好的抗氧化能力。     

酶解虾壳蛋白制备ACE 抑制剂的工艺优化

以虾壳粉为原料,以水解度和ACE抑制率为指标,利用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶进行酶解,其中中性蛋白酶和碱性蛋白酶有较高的ACE抑制活性,因此对碱性蛋白酶和中性蛋白酶的工艺条件进一步优化。结果表明：碱性蛋白酶酶解工艺优化条件为：温度60℃、pH9.5、底物质量浓度2.5g/100mL、加酶量4000U/g、酶解时间2.5h,在此条件下ACE抑制率最高,为67.70%,水解度为69.79%;中性蛋白酶酶解工艺优化条件为：温度50℃、pH7.0、底物质量浓度2.5g/100mL、加酶量2000U/g、酶解时间2h,在此条件下ACE抑制率最高,为84.04%,水解度为26.76%。提示中性蛋白酶酶解能够产生更多的ACE抑制肽,是酶解虾壳蛋白制备ACE抑制肽的较优酶。     

酶法制备花椒籽蛋白铁结合肽的工艺优化

采用不同的蛋白酶水解花椒籽蛋白,以花椒籽蛋白质铁结合肽水解度和铁结合能力为指标,筛选出制备花椒籽蛋白铁结合肽的最佳蛋白酶,并利用最佳蛋白酶酶解花椒籽蛋白制备铁结合肽。在单因素试验的基础上,应用BoxBehnken方法进行四因素三水平的试验设计,考察底物浓度、酶添加量、pH值、酶解温度和酶解时间对铁结合能力的影响,优化花椒籽蛋白制备铁结合肽工艺。结果表明:最佳蛋白酶为碱性蛋白酶,最佳工艺条件为:底物浓度27.70 mg/mL、酶添加量0.09mg/mL、酶解pH 10.47、酶解温度65℃、酶解时间2.5h,该条件下酶解产生水解液的水解度为7.23%,铁结合能力为585.66mg EDTA/g·蛋白质。     

酶法水解鲢鱼蛋白的研究

研究鲢鱼蛋白酶解液制备的工艺条件,采用正交试验着重探讨蛋白酶酶量、酶解时间、酶解温度、初始pH值、固液比对鲢鱼蛋白酶解效果的影响.结果表明,最佳酶解条件为:中性蛋白酶:木瓜蛋白酶=2:1(质量分数),底物浓度为固液比1:2(g/mL),酶添加量为底物浓度的1.6%,初始pH7.0,温度50℃,酶解时间5 h.酶解后,水解度为68.71%,氨基氮为67.3 mg/100 mL,可溶性蛋白得率可达70.02%.     

长白山松子抗氧化肽制备及活性研究

以长白山松子分离蛋白为原料,采用碱性蛋白酶制备抗氧化肽,通过Box-Behnken中心组合试验确定最佳水解工艺条件为:酶解温度56.5℃、加酶量7822U/g、底物质量浓度0.021g/mL、pH9.0、酶解时间240min。对该条件制备的抗氧化肽进行活性研究,结果显示随着浓度的升高,松子抗氧化肽在4mg/mL时对ABTS自由基的清除率和Fe2+螯合率达到100%,16mg/mL时对DPPH自由基清除率达到80.95%,24mg/mL时,对羟基自由基清除率达到100%。     

响应面法优化豆粕肽制备工艺

以豆粕为原料,从酶的筛选入手,考察中性蛋白酶、复合风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶对豆粕肽得率的影响差异,通过单因素实验和响应面试验优化制备工艺。结果表明:以复合风味蛋白酶为酶解酶,酶解温度50℃,酶解pH 6.5,酶解时间7 h,加酶量1%,底物质量浓度4 g/100 mL,可以制备得率较高【(12.42±0.06)%】且口感更优的豆粕肽。本研究结果为豆粕资源开发及功能性肽产品的应用奠定了理论基础。     

酪蛋白源降胆固醇肽的酶解制备工艺优化

以酪蛋白为原料,采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶以及胰蛋白酶对酪蛋白进行水解,确定制备降胆固醇肽的最佳蛋白酶;通过单因素实验和响应面试验,研究水解pH、水解温度、酶与底物比、底物浓度和水解时间对酪蛋白水解度和胆固醇胶束溶解度抑制率的影响,确定最佳水解条件;而后通过超滤和凝胶过滤层析确定降胆固醇肽的初步分离工艺。结果表明:制备酪蛋白源降胆固醇肽的最佳水解工具酶是中性蛋白酶,其最佳酶解条件为反应温度51.3 ℃,酶与底物浓度比6.47%,pH6.34,底物浓度5 g/100 mL,反应时间3.5 h,胆固醇抑制率为58.25%±0.59%;Sephadex G-10分离酪蛋白降胆固醇肽条件为上样浓度80 mg/mL,上样体积2.5 mL,洗脱速度3.5 mL/min;经酶解、超滤及层析后制备的酪蛋白源降胆固醇肽峰1和峰2样品在100 μg/mL的胆固醇溶解度抑制率为24.2%±0.24%和4.3%±0.16%。经酶解制备分离后,获得具有抑制降固醇胶束溶解活性的降胆固醇肽,为降胆固醇肽的开发提供理论研究基础。     

液压压榨澳洲坚果粕酶解制备多肽工艺优化

以液压压榨澳洲坚果粕为原料,分析了其常规营养成分含量与氨基酸组成。采用碱性蛋白酶与中性蛋白酶催化酶解澳洲坚果粕蛋白制备多肽。以水解度为指标,利用单因素试验与正交试验考察了各因素对澳洲坚果粕蛋白水解度的影响。结果表明：液压压榨澳洲坚果粕中含有32.25%的蛋白质,17 种氨基酸,含量为25.05%。碱性蛋白酶各因素对澳洲坚果粕蛋白水解度影响的主次顺序为：酶解时间＞酶解温度＞加酶量＞酶解pH值＞底物质量浓度,最佳工艺条件为：酶解温度60 ℃、酶解时间3.5 h、底物质量浓度110 g/L、酶解pH 8.0、加酶量2 400 U/g,在此条件下水解度达到了22.83%。中性蛋白酶各因素影响水解度的主次顺序为：加酶量＞酶解时间＞底物质量浓度＞酶解温度＞酶解pH值,最佳工艺条件为酶解温度55 ℃、酶解时间3.5 h、底物质量浓度100 g/L、酶解pH 7.0、加酶量3 200 U/g,水解度达到了22.78%。碱性蛋白酶与中性蛋白酶各因素对澳洲坚果粕蛋白水解度的影响均达到了极显著水平（P＜0.01）。在最佳工艺条件下,碱性蛋白酶酶解液压压榨澳洲坚果粕制备多肽的效果优于中性蛋白酶。     

响应面法优化制备南瓜籽抗氧化肽的工艺

以南瓜籽分离蛋白为原料,采用酸性蛋白酶酶解制备南瓜籽抗氧化肽。选用加酶量、酶解温度、pH值、底物质量浓度、酶解时间作为研究对象,以酶解液对DPPH自由基的清除率为评价指标,在单因素试验的基础上,运用Plackett-Burman筛选试验确定显著因素,然后通过三因素三水平的Box-Behnken响应面分析法优化制备南瓜籽抗氧化肽的酶解工艺条件。结果表明：酸性蛋白酶酶解南瓜籽蛋白质的最佳工艺条件为：酶解温度50℃、pH2.5、酶解时间5h、底物质量浓度0.05g/mL、加酶量6000U/g pro,在此条件下,DPPH自由基清除率可达到92.82%。     

响应面试验优化酶解法制备海洋微藻微拟球藻抗氧化肽工艺

以海洋微藻饵料微拟球藻蛋白为原料,采用胃蛋白酶酶解制备微拟球藻抗氧化肽。以酶解产物的水解度和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除活性为评价指标,研究酶底比（质量百分比）、底物质量浓度、酶解温度和pH值对酶解产物的影响。在单因素试验的基础上,利用响应面法优化制备高抗氧化活性抗氧化肽的工艺条件,确定最佳酶解工艺条件为：底物质量浓度5.0?mg/mL、酶解温度32?℃、pH?1.36、酶底比6%。在最佳酶解条件下实际测得微拟球藻抗氧化肽的DPPH自由基清除率为51.85%。     

水产蛋白酶解制备鲜味肽

以3种不同类别的水产蛋白为原料,制备具有风味提升的短肽。通过比较酶解产物的感官特点,确定m鲢鱼:m对虾:m扇贝为1:1:1;采用风味蛋白酶与复合蛋白酶双酶水解,添加两酶质量比为1:1。采用Box-Behnken设计和响应面法(RSM)优化酶解水产蛋白的工艺,以水解度和感官评分为指标,探讨酶与底物比([E]/[S])、酶解温度和酶解时间对鲜味肽的感官影响。结果表明：水产蛋白制备鲜味肽的最佳工艺为[E]/[S]7.5‰、底物质量浓度30g/100mL、自然pH值、酶解温度56℃、酶解时间5.9h。验证实验表明,该条件下水产蛋白的水解度和鲜味肽的感官评分分别为56.32%和6.8,与模型的预测值(55.17%和6.9)基本符合。酶解液超滤分离出4种组分的鲜味肽,将其分别进行Maillard反应。表明分子质量2.5～5kD鲜味肽Maillard反应后鲜味浓郁,无腥苦味。     

响应面法优化黄粉虫抗菌肽酶解工艺

目的：确定黄粉虫抗菌肽的最佳酶解工艺。方法：以黄粉虫为原料,碱提酸沉法提取黄粉虫蛋白质,再利用筛选出的蛋白酶进行水解,并用琼脂平板扩散法(打孔法)表征制得抗菌肽的抑菌活性。在单因素试验的基础上,应用Box-Behnken中心组合试验设计和响应面(RSM)分析法,探讨酶解温度、pH值、酶解时间、加酶量及底物质量浓度对酶解产物抑菌活性的影响。结果：碱性蛋白酶最适合水解黄粉虫蛋白制备抗菌肽,其最佳工艺条件为：底物质量浓度810g/100mL、酶解时间4.4h、加酶量440U/g pro、酶解温度54℃、pH9.5;酶解物抑菌圈大小理论预测值为15.17mm,实际测量值为15.04mm。结论：碱性蛋白酶水解黄粉虫蛋白能够得到抑菌活性较强的酶解物,优化的工艺条件与理论预测拟合程度较高。     

小黄鱼抗氧化肽制备条件的响应面优化

目的：优化胰蛋白酶(PTN 6.0S)酶解小黄鱼制备抗氧化肽的条件。方法：以酶解产物对1,1-二苯基苦基苯肼 (DPPH)自由基的清除率为指标,通过单因素试验及响应曲面法优化酶解条件。结果：酶解条件在pH7.0、温度52℃、时间19h、底物质量浓度4.2g/100mL,酶与底物比6‰时,产物对DPPH自由基的清除率达到最大值(46.90±0.3)%。响应面分析表明,酶解时间对产物的抗氧化活性有显著影响;温度与酶与底物比、时间与底物质量浓度、酶与底物比与底物质量浓度在酶解工艺中存在复杂的交互作用。     

鸭肉蛋白源抗氧化肽的酶法制备工艺

以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率为指标,采用响应曲面法（response surface methodology,RSM）优化胃蛋白酶制备鸭肉抗氧化肽的最佳酶解工艺条件。结果表明：以底物质量浓度、酶与底物质量比和酶解时间为自变量,以DPPH自由基清除率为响应值,得到的回归方程拟合度高（R2=0.995 7,R2Adj=0.992 7）。其中酶与底物质量比对DPPH自由基清除率的影响最大,其次是酶解时间,底物质量浓度的影响最小。胃蛋白酶的最优酶解工艺条件为底物质量浓度10.89 g/100 mL、酶与底物质量比0.013%、酶解时间3.54 h,此时DPPH自由基清除率的理论值可达84.23%,通过优化验证实验测得,在最优酶解条件下,DPPH自由基清除率的实际值为（83.57±0.20）%。     

优化乌骨鸡肉酶解工艺

报道了乌骨鸡肉酶解技术的最佳工艺参数。通过单因素试验确定了影响酶解效率的主要因素;然后采用5因素3水平正交试验获得了最佳酶解工艺参数:酶解温度42℃,pH7.4,酶与底物比7000 U/g,底物质量分数9%,酶解时间11 h。在此条件下,乌骨鸡肉酶解率大于23%,水解液总氨基酸含量40.643 mg/mL。对乌骨鸡进行深度水解处理,对提高其附加值奠定了技术基础。     

泥鳅蛋白酶解工艺条件的优化

以泥鳅蛋白为原料,酶解制备具有降血压活性的短肽。从9种蛋白酶中筛选出菠萝蛋白酶的酶解液具有较高降压活性,IC50值为0.65mg/mL。在单因素试验的基础上,采用和Box-Behnken和响应面法(RSM)优化了酶解泥鳅蛋白的工艺条件,以ACE抑制率为指标,探讨酶与底物的比值([E]/[S])、酶解温度和酶解时间对ACE抑制率的影响。结果表明：制备降血压肽的最佳酶解条件为[E]/[S]4.9‰、酶解时间5.9h、酶解温度54.4℃、pH6.5、底物质量分数30%,该条件下制备的泥鳅蛋白酶解产物的ACE抑制率为88.92%。     

酶法水解牦牛皮蛋白制备抗氧化肽工艺的优化

以牦牛皮为原料,用碱性蛋白酶水解牦牛皮蛋白制备抗氧化肽。以水解度和牦牛皮蛋白水解物对DPPH自由基清除率的IC₅₀值为评价指标,在单因素实验的基础上,结合响应面（Box-Behnken）试验设计筛选出牦牛皮抗氧化肽的最佳制备工艺。结果表明,最佳制备工艺为:水解温度51 ℃,酶用量10890 U/g,水解时间10.6 h,pH8.5,底物浓度5%,此时水解度为41.39%±0.69%,牦牛皮抗氧化肽清除DPPH·、ABTS+·、·OH的IC₅₀值分别为2.884、2.110、2.523 mg/mL。综上,该制备工艺下的牦牛皮抗氧化肽对自由基有良好的清除能力,且有较强的还原能力,说明牦牛皮抗氧化肽有望作为天然抗氧化剂得到开发利用。