肺结核患者外周血树突状细胞亚群的变化

目的 通过对肺结核患者外周血树突细胞(dendritic cell,DC)亚群数量的观察,了解DC亚群在肺结核病程中的变化情况,探讨DC亚群在肺结核发病机制中的作用及临床意义.方法 采用流式细胞术的三色分析法检测70例肺结核患者外周血的DC1及DC2亚群. 结果肺结核活动期患者外周血DC1/PBMC(外周血单个核细胞)、DC2/PBMC及DC1、DC2的绝对数均明显低于健康者(P＜0.05),DC1/DC2值明显高于健康者(P＜0.05);肺结核非活动期患者与健康者外周血DC1/PBMC、DC2/PBMC及DC1、DC2的绝对数比较均无显著性差异(P＞0.05),与健康者比较DC1/DC2值无显著性差异(P＞0.05);肺结核活动期患者外周血DC的绝对数明显低于非活动期(P＜0.05). 结论肺结核患者外周血DC1和DC2数均明显降低.提示外周血树突细胞亚群(DC1、DC2)的检测可了解肺结核患者的免疫功能状态及反映病情变化,也说明DC在结核病免疫损伤的发生发展中发挥一定作用.     

肺结核患者外周血树突状细胞和T辅助细胞水平的变化及其临床意义

目的探讨肺结核患者外周血树突状细胞（DC）与T辅助（Th）细胞水平的变化及其临床意义。方法利用流式细胞仪对73例初治肺结核患者、30名健康人外周血DCs亚群（DC1和DC2）与Th细胞亚群（Th1和Th2）按疾病分组进行检测。结果浸润性肺结核、结核性胸膜炎、粟粒型肺结核患者外周血中DC1、Th1含量均明显低于健康对照组,Th2含量均明显高于健康对照组（P〈0.05或〈0.01）。DC2含量在这3个病程中有下降趋势,前两者无显著差异（P〉0.05）,而粟粒型肺结核明显低于健康对照组（P〈0.05）。粟粒型肺结核与浸润性肺结核患者外周血中Th1、Th2含量有明显差异（P〈0.05）。糖尿病并发肺结核患者Th1含量明显低于肺结核组（P〈0.05）,Th2含量明显高于肺结核组（P〈0.05）。15例重度肺结核患者经抗结核化疗与微卡治疗3个月后,DC1、DC2、Th1水平较治疗前明显升高（P〈0.05）,而Th2水平较治疗前明显降低（P〈0.01）。结论浸润性肺结核、结核性胸膜炎、粟粒型肺结核患者存在着不同程度的免疫功能抑制,DC1、DC2表达水平调控着Th0向Th1、Th2分化,Th1、Th2的分化也间接地负反馈调节DC1、DC2表达,维持这种平衡对疾病的转归有重要意义。     

趋化因子受体CCR5及其配体在类风湿关节炎患者滑液及滑膜中的表达

目的查明趋化因子C-C亚族受体5(CCR5)及其配体在外周血、关节滑膜和滑液的表达及分布,探讨Th1细胞选择性聚集于类风湿关节炎(RA)患者关节中的机制.方法采用两色和三色免疫荧光标记、流式细胞术及激光扫描共聚焦显微技术,对15例RA患者外周血、关节液及滑膜中Th细胞亚群,以及趋化因子受体CCR5和CXCR3的表达细胞,和C-C亚族趋化因子巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1β的产生细胞,进行了测定和分析比较.结果(1)RA患者关节滑液细胞内细胞因子分泌模式明显向Th1偏移,Th1样细胞在关节内占优势.(2)RA患者滑液中T细胞受体CCR5的表达率为52%±8%,CXCR3的表达率为61%±12%,与自身及正常人(外周血单个核细胞)比较明显升高(P＜0.01).(3)RA患者滑膜组织中大量浸润的T细胞(尤其是CD4+细胞)、单核/巨噬细胞(Mo/Mac)、B细胞多表达CCR5的配体MIP-1β.结论RA患者的关节内,T细胞、B细胞、Mo-Mac产生MIP-1β、RANTERS等趋化因子,能趋化表达CCR5、CXCR3的Th1细胞选择性进入关节组织,导致Th1/Th2细胞失衡.     

关节液Th17细胞变化在类风湿关节炎免疫炎症中的作用

目的 检测类风湿关节炎（RA）患者外周血和关节液Th17细胞的变化,探讨该细胞亚群在RA免疫炎症机制中的作用。方法 采用流式细胞术检测15例RA患者外周血、关节液及15例健康对照外周血Th17细胞比例;分析RA患者关节液Th17细胞比例与临床炎症指标的相关性;通过real-time PCR检测外周血和关节液淋巴细胞维甲酸相关孤儿受体γt（RORγt）、白细胞介素（IL）-17基因表达。结果 ①活动期RA患者关节液Th17细胞比例〔（1.89±0.88）%〕高于配对外周血〔（1.03±0.57）%〕和健康对照组〔（0.35±0.18）%〕,差异有统计学意义（Pr=0.519,P=0.047）;③活动期RA患者关节液淋巴细胞RORγt、IL-17基因表达水平均高于配对外周血和健康对照组（P<0. 01）。结论 RA患者关节液中Th17细胞的变化反映了RA关节炎症和系统炎症的差异,揭示了关节损伤的机制。     

类风湿关节炎患者外周血和关节液中Foxp3+调节性T细胞的检测及意义

目的 研究Foxp3+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)在类风湿关节炎患者外周血和关节液的含量及其与临床的相关性.方法 采集91例RA患者和20例健康人外周血,常规关节穿刺术抽取RA患者关节液,采用流式细胞术检测Foxp3+Treg细胞百分含量,并研究其与RA患者病情活动程度、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)的关系.结果 RA组患者外周血Foxp3+ Treg细胞的百分含量低于健康对照组(P＜0.05),而与DAS28评分分组、ESR、CRP、RF无相关性(P＞0.05);RA组患者关节液Foxp3+ Treg细胞的百分含量高于自身外周血(P＜0.01),且与DAS28评分分组、ESR、CRP有负相关性(P均＜0.01);RA组患者糖皮质激素治疗3个月后外周血和关节液中Foxp3+ Treg细胞百分率较治疗前高(P均＜0.05).结论 Foxp3+ Treg细胞在RA发病机制上起重要作用.外周血Foxp3+ Treg细胞降低导致其负调控作用的减弱,促进了疾病的发生和发展,聚集于关节液中Foxp3 +T细胞,不能抑制疾病的发生,但在控制炎症程度发挥了一定作用.监测患者外周血Foxp3+ Treg细胞水平可作为糖皮质激素治疗的疗效判断.     

胃癌gp96多肽复合物树突状细胞疫苗对Th1/Th2平衡的影响

目的探讨gp96多肽复合物树突状细胞(dendritic cells,DCs)疫苗对Th1/Th2平衡的影响.方法从胃癌组织中提取gp96多肽复合物负载从外周血单个核细胞诱导培养的DCs,用gp96多肽复合物DC疫苗诱导同一患者Th0淋巴细胞,ELISA检测培养上清中IFN-γ和IL-10的水平;以胃癌细胞裂解物负载的DC疫苗作对照.结果gp96多肽复合物DC疫苗诱导的T细胞分泌IFN-γ的量为(2 875±177.66)pg/ml,显著高于对照组(1 765±289.07)pg/ml(P＜0.01);分泌IL-10的量为(36±6.72)pg/ml,显著低于对照组(90±11.26)pg/ml(P＜0.05),二者之间存在显著的负相关(r=-0.915,P＜0.01).结论gp96多肽复合物DC疫苗可诱导Th1/Th2平衡向Th1漂移,显示了gp96多肽复合物DC疫苗可显著提高机体的免疫能力,为临床免疫干预治疗奠定基础.     

Graves病患者外周血中树突状细胞及相关细胞因子的变化

目的检测Graves病人外周血细胞因子和树突状细胞(DCs)不同亚群的数量和表达情况,初步探讨DCs细胞亚群在疾病中的作用。方法利用流式细胞仪检测30例Graves病患者和30名健康体检者的外周血树突状细胞亚群数量,同时利用ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)及IL-6等细胞因子的水平。结果测得Graves组髓样树突状细胞(p DC)和浆细胞样树突状细胞(m DC)值均高于正常对照组。ELISA检测细胞因子发现,Graves患者血清中TNF-α、IFN-γ、IL-6水平均高于正常对照组,其中TNF-α显著升高(P<0.01),而IL-2水平显著低于对照组(P<0.01)。结论 Graves病人中p DC和m DC水平升高,细胞因子分泌失调,Th1/Th2失衡,从而导致机体自身免疫反应的产生。     

2型糖尿病患者NK细胞活性降低及其临床意义

目的 探讨2型糖尿病患者NK细胞活性降低及其临床意义.方法 采用免疫荧光标记和流式细胞仪技术对40例2型糖尿病患者及40例健康人的外周血单个核淋巴细胞亚群表面标记物的表达及NK细胞百分比的检测,用ELISA法测定单个核细胞培养上清液中的IFN-γ,IL-2,IL-6、可溶性白介素-2受体(sIL-2R)水平,并对结果 进行分析.结果 CD3 ,CD4 /CD3 ,CD4 /CD8 ,CD56 CD16 /CD3-与正常对照组比较有显著性降低(P＜0.05或P＜0.01).CD19 ,CD8 /CD3 ,CD18 /CD8 显著升高(P＜0.01).CD2 ,CD28 /CD8 ,两组比较无明显改变(P＞0.05).T2DM组IFN-γ,IL-2较对照组显著性降低(P＜0.01).sIL-2R水平较对照组显著性升高(P＜0.01).IL-6两组间无明显变化(P＞0.05).结论 2型糖尿病患者NK细胞活性降低,使T细胞免疫功能、细胞因子分泌及受体水平异常,造成2型糖尿病患者免疫功能障碍.     

再生障碍性贫血患者外周血T细胞亚群及Th1/Th2细胞分析

目的通过分析再生障碍性贫血(再障)患者外周血T细胞亚群及Th1和Th2细胞,进一步探讨再障的免疫发病机制。方法①流式细胞术检测再障患者外周血T细胞亚群和T细胞HLADR抗原的表达;②用流式细胞术检测经体外刺激后再障患者外周血单个核细胞(PBMNC)中Th1、Th2细胞。结果①再障患者CD3 CD4 细胞、CD3 CD8 细胞、CD8 HLADR 细胞百分率及CD4 /CD8 比值分别为(35.05±9.47)%,(36.29±6.81)%,(18.36±2.07)%,1.0±0.33;对照组为(52.84±4.03)%,(24.69±3.90)%,(11.13±1.14)%,2.14±0.24;再障患者CD3 CD4 细胞和CD4 /CD8 比值显著低于对照组(P<0.01);CD3 CD8 细胞、CD8 HLADR 细胞显著高于对照组(P<0.01);而CD3 细胞与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。②再障患者外周血中Th1细胞百分率和Th1/Th2比值分别为(20.62±2.98)%和14.63±4.81,均显著高于对照组(11.13±1.48)%和9.33±2.82(P<0.01);而Th2细胞百分率与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。③Th1细胞与CD3 CD8 细胞呈正相关(r为0.678,P<0.01),与网织红细胞相对值、中性粒细胞绝对值(ANC)呈负相关(r分别为-0.590和-0.503,P值均<0.05)。结论再障患者的T淋巴细胞亚群失衡,Th1细胞增多可能是导致再障造血衰竭的重要环节。     

外周血淋巴细胞和CD4+T细胞在类风湿关节炎中的表达和意义

目的 研究外周血淋巴细胞亚群绝对数量及CD4⁺T细胞亚群绝对数量在类风湿关节炎患者中的表达机制及临床意义。方法 入组137例RA患者和50例健康人用流式细胞技术检测外周血淋巴细胞亚群及CD4⁺T细胞亚群绝对计数,并收集临床资料包括性别、年龄、病程、DAS28评分等;比较早期RA患者(病程≤2年)与非早期RA患者(病程>2年)淋巴细胞亚群及CD4⁺T细胞亚群绝对计数,评估不同病程RA患者的免疫功能;比较初治(初发患者)、复治患者(使用DMARDs≥6个月)与健康人CD4⁺T细胞亚群绝对计数,评估治疗与未治疗对RA患者免疫状态的影响;按DSA28评分分层,比较不同疾病活动组与健康对照组Th17、Treg细胞绝对计数及Th17/Treg比值的不同。结果 RA患者Th细胞明显高于健康对照组、 NK细胞明显低于健康对照组, 差异均有统计学意义(P<0.05); Th1、 Th2、 Treg、 Th1/Th2、 Th17/Treg与健康对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);非早期RA患者总T、Th17细胞明显低于早期RA患者,差异有统计学意义(P<0.05);初治组、复治组与健康对照组CD4⁺T细胞亚群比较,Th1、Th2、Th1/Th2、Th17/Treg差异均有统计学意义(P<0.05);在RA不同疾病活动分层中,Treg细胞绝对数均低于健康对照组,Th17细胞绝对数高于健康对照组。其中3.2相似文献   

p53基因在5-aza诱导小鼠胚胎干细胞向心肌样细胞分化中表达的研究

目的 检测p53基因及其蛋白在5-aza诱导C3H10T1/2向心肌样细胞分化过程中的变化,进而探讨p53基因及其蛋白在胚胎早期心肌分化过程中发挥作用的条件.方法 以10 μmol/L的5-aza诱导C3H10T1/2向心肌样细胞分化,分别选取诱导后1周、2周、3周、4周这4个时间点进行样品收集.Tr-izol法提取诱...     

猫角膜内皮细胞与人脉络膜色素瘤细胞共培养后增殖能力的变化

目的观察猫角膜内皮细胞(CEC)与人脉络膜黑色素瘤细胞(OCM-1)共培养后增殖能力及细胞周期的变化。方法将角膜内皮细胞分别与肿瘤细胞OCM-1、兔角膜基质细胞在Transwell体系中共培养,通过流式细胞术观察内皮细胞增殖能力及细胞周期的变化。结果与空白对照组角膜内皮细胞周期比较,肿瘤细胞组与基质细胞组角膜内皮细胞S期细胞比例增加,G1期细胞比例下降,肿瘤组增加幅度高于基质细胞组的。肿瘤细胞组角膜内皮细胞S期细胞比例比空白对照组的平均增加近19%,增殖能力显著提高。结论与肿瘤细胞OCM-1共培养能促进角膜内皮细胞增殖。     

妇科肿瘤患者CD_3AK细胞和LAK细胞杀瘤活性比较

为比较CD3AK细胞和LAK细胞的杀瘤特性，观察了妇科肿瘤患者CD3AK细胞和LAK细胞对卵巢癌细胞系（3AO）的杀伤活性。结果表明：良性肿瘤组LAK细胞杀瘤活性高峰在培养第1、2周，显著高于同期培养的CD3AK细胞（P＜0．05，P＜0．01），第3周则较低，而CD3AK细胞的杀瘤活性高峰在培养第3、4周，显著高于LAK细胞（P＜0．05）；恶性肿瘤组，LAK细胞杀瘤高峰在培养第1周，显著高于同期培养的CD3AK细胞（P＜0．05），而CD3AK细胞杀瘤高峰在培养第2、3周，显著高于同期培养的LAK细胞（P＜0．05）。提示：妇科恶性肿瘤组LAK细胞和CD3AK细胞杀瘤活性高峰均较妇科良性肿瘤早1周左右；CD3AK细胞杀瘤活性高峰较LAK细胞延迟1～2周。说明CD3AK和LAK细胞的杀瘤活性在不同培养阶段表现不同，LAK细胞宜短期培养，CD3AK细胞宜长期培养。     

EPCs在MSCs向肝样细胞转化中作用的初步探讨

目的：探讨内皮前体细胞(endothelial precursor cells, EPCs)在间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)向肝样细胞转化中的作用。方法：分离培养SD大鼠MSCs和EPCs,取第3代MSCs向肝样细胞转化培养,培养过EPCs的无血清及因子的培养基(endothelial progenitor cell-conditioned medium, EPCs-CM)、无血清的α-最低必需培养基(alpha minimal essential medium, α-MEM)分别与肝细胞转化培养基按1∶1比例配置,作为实验组和模型对照组,正常α-MEM培养基为空白对照组,分别观察细胞形态及数量变化;在培养3、5、7、9 d时应用免疫荧光检测甲胎蛋白(alpha fetoprotein, AFP)、清蛋白(albumin, ALB)的表达。结果：空白对照组MSCs形态无明显变化;实验组与模型对照组细胞均出现肝样细胞形态。空白对照组未见AFP、ALB表达,模型对照组和实验组在3、5、7、9 d AFP、ALB表达水平均增高,其中实验组比模型对照组AFP、ALB水平增高明显。结论：EPCs在MSCs向肝样细胞转化中可能起一定的促进作用。     

免疫性肝损伤大鼠枯否细胞对肝星状细胞增殖的影响及芍药苷的作用

目的探讨芍药苷(Pae)通过免疫性肝损伤大鼠枯否细胞(KC)影响肝星状细胞(HSC)的增殖能力。方法用卡介苗加脂多糖诱导大鼠肝损伤模型,肝脏原位灌流分离大鼠KC和HSC,观察共培养的形态学改变,观察Pae作用后的KC培养上清对HSC增殖的影响。结果免疫性肝损伤大鼠KC能明显促进HSC的增殖,在Pae作用后,KC培养上清能抑制HSC的增殖。结论KC是Pae发挥作用的靶细胞之一,Pae可通过作用于KC抑制HSC的增殖。     

子痫前期产妇外周血中树突状细胞、Th1Th2细胞含量检测

目的：研究子痫前期产妇外周血中Th1Th2细胞含量以及树突状细胞表型。方法：将在本院确诊的60例子痫前期产妇纳入观察组,将同期进行产检的60例正常妊娠产妇纳入对照组,采用流式细胞仪检测外周血中Th1细胞、Th2细胞的含量以及树突状细胞表型,采用real-time PCR的方法检测外周血中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）的mRNA含量,采用酶联免疫吸附法检测外周血中TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-10的蛋白含量。结果：观察组的Th1细胞含量、Th1/Th2细胞比例以及Th1类细胞因子TNF-α、IFN-γ的含量均高于对照组,Th2细胞含量以及Th2类细胞因子IL-6、IL-10的含量低于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;树突状细胞表型：外周血中CD83＋、CD80＋以及CD86＋阳性的树突状细胞比例均高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：子痫前期产妇外周血中Th1细胞功能增强、Th2细胞功能减弱,且成熟树突状细胞的数目增多。     

胚胎干细胞来源的内皮细胞构建内皮化血管支架

目的探索胚胎干细胞定向分化为血管内皮细胞,并用于构建内皮化血管支架,为临床心血管疾病治疗提供实验基础。方法采用改良后单层分化体系,血管内皮生长因子（VEGF）作为独立诱导因子定向诱导胚胎干细胞分化为血管内皮细胞,用RT-PCR法检测分化时程各时间点内皮特异性标志的表达,用免疫荧光法检测分化体系中的内皮细胞蛋白标志。将分化成熟的内皮细胞种植于支架表面,构建内皮化血管支架。结果胚胎干细胞全能性分子标志Oct3／4,早期内皮标志Flk-1,Tie-2,PECAM-1,以及成熟内皮标志VE-cadherin在胚胎干细胞分化体系中呈现一定的转录时序性;免疫荧光结果显示分化细胞Flk-1,VE-cadheiin阳性,血管支架被表达VE-cadherin的内皮细胞覆盖。结论我们改良了胚胎干细胞分化为血管内皮细胞的方法,并用于探索内皮化血管支架的构建。     

高纯度少突胶质前体细胞改良培养方法的建立

目的对传统培养方法进行改良,以获得更高纯度的少突胶质前体细胞（OPCs）。方法新生1～2d Sprague-Dawley（SD）大鼠的大脑皮质混合胶质细胞原代培养8d后,采用恒温摇床振荡分离法、差速贴壁法和胰酶消化法结合条件限定培养基纯化培养细胞,台盼蓝染色光学显微镜观察细胞形态;纯化培养2d后进行A2B5和DAPI免疫荧光染色鉴定和细胞纯度分析。结果光学显微镜观察发现纯化培养细胞的胞膜完整,细胞无损伤;免疫荧光染色后细胞纯度分析显示,A2B5染色阳性细胞占DAPI染核细胞的百分比为98.14%。结论通过对传统的混合胶质细胞培养及振荡分离和纯化方法的改进,能够培养出高纯度的OPCs。     

高纯度少突胶质前体细胞改良培养方法的建立

目的 对传统培养方法进行改良,以获得更高纯度的少突胶质前体细胞(OPCs)。方法 新生1~2 d Sprague-Dawley（SD）大鼠的大脑皮质混合胶质细胞原代培养8 d后,采用恒温摇床振荡分离法、差速贴壁法和胰酶消化法结合条件限定培养基纯化培养细胞,台盼蓝染色光学显微镜观察细胞形态;纯化培养2 d后进行A2B5和DAPI免疫荧光染色鉴定和细胞纯度分析。结果 光学显微镜观察发现纯化培养细胞的胞膜完整,细胞无损伤;免疫荧光染色后细胞纯度分析显示,A2B5染色阳性细胞占DAPI染核细胞的百分比为98.14%。结论 通过对传统的混合胶质细胞培养及振荡分离和纯化方法的改进,能够培养出高纯度的OPCs。     

妇科恶性肿瘤患者CD_3AK细胞和LAK细胞表型特征动态比较

CD3AK细胞和LAK细胞均为异质细胞群，为了比较妇科恶性肿瘤患者LAK细胞和CD3AK细胞在体外培养过程中的表型特征，采用间接免疫荧光法动态观察CD3AK细胞和LAK细胞的CD_3~＋，CD_4~＋，CD_8~＋细胞率。结果表明：①培养第1周，CD3AK细胞的CD_3~＋，CD_4~＋，CD_8~＋细胞率分别为61．36％，54．23％和52．96％，显著高于LAK细胞组（P＜0．01）；③培养第2，3周，CD3AK细胞的CD_3~＋，CD_4~＋和CD_8~＋细胞率高于LAK细胞，但无统计学差异（P＞0．05）；③随着培养时间延长，CD3AK细胞CD_3~＋，CD_4~＋，CD_8~＋细胞率均不同程度下降，尤以CD_3~＋细胞率下降最快，而LAK细胞在培养第2周，CD_3~＋，CD_4~＋，CD_8~＋细胞率均有所升高，但第3周时又开始下降；④CD3AK细胞的CD_3~＋，CD_4~＋和CD_8~＋细胞率在培养第1周最高，而LAK细胞在培养第2周最高。提示：CD3MAb和IL－2激活CD3AK细胞和LAK细胞的途径不同，致使CD3AK细胞和LAK细胞向不同的表型特征分化。