黄芪总黄酮对柯萨奇B3病毒感染心肌细胞内质网应激及促凋亡信号因子作用

目的:研究黄芪总黄酮对柯萨奇B3病毒感染心肌细胞内质网应激伴侣蛋白GRP78、GRP94及促凋亡信号分子JNK、p-JNK、Caspase 12表达的影响。方法:实验分3组,对照组(正常细胞)、柯萨奇病毒感染组(正常细胞+柯萨奇B3病毒)、黄芪总黄酮组(正常细胞+柯萨奇B3病毒+黄芪总黄酮)。采用免疫组织化学方法检测培养乳鼠心肌细胞α-SMA蛋白,采用Western blotting技术检测各组心肌细胞内质网应激伴侣蛋白GRP78、GRP94、p-JNK、JNK及Caspase 12表达。结果:1与对照组比较,柯萨奇B3病毒感染组心肌细胞GRP78、GRP94表达增多(P0.01),黄芪总黄酮组心肌细胞GRP78、GRP94表达减少(P0.01)。与对照组比较,柯萨奇B3病毒感染组心肌细胞p-JNK及Caspase 12表达增多(P0.01),黄芪总黄酮组心肌细胞p-JNK及Caspase 12表达减少(P0.01)。各组心肌细胞JNK表达无差异(P0.05)。结论:柯萨奇B3病毒可引发心肌细胞内质网应激,并使促凋亡信号分子p-JNK、Caspase 12表达增多,引发心肌细胞凋亡;黄芪总黄酮抑制柯萨奇B3病毒感染心肌细胞内质网应激,并抑制心肌细胞凋亡,该实验结果可能是其对病毒性心肌炎的作用机制之一。     

Notch信号途径对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞的保护作用

目的:观察缺氧/复氧(H/R)后Notch信号途径相关分子的变化及阻断Notch信号途径对在H/R条件下乳鼠心肌细胞凋亡的影响。方法:将乳鼠心肌细胞分为常氧组和H/R组,每组再分为3组,即对照组、二甲基亚砜(DMSO)组及抑制Notch信号途径的γ分泌酶抑制剂(GSI)组。分别用实时PCR和Western blot检测Notch信号途径相关分子mRNA及其蛋白表达的水平。用原位缺口末端标记法(TUNEL)染色观察心肌细胞凋亡。用荧光探针DCFH-DA检测心肌细胞内活性氧簇(ROS)水平的变化。结果:H/R后,Notch信号途径相关分子的mRNA及其蛋白的水平、ROS水平及心肌细胞的凋亡与DMSO组相比均显著增加(P0.01)。加入GSI后,对Notch信号途径上游的配基及受体的水平没有显著的影响,但对其下游的转录因子Hes1却可以显著抑制其表达,此时ROS的水平和心肌细胞凋亡进一步增加。结论:Notch信号途径在H/R后反应性上调可能对心肌细胞具有保护作用,该作用可能与抑制ROS的水平有关。     

胰升血糖素样肽1对晚期氧化蛋白产物诱导的心肌细胞凋亡保护作用的研究

目的探讨胰升血糖素样肽1(GLP-1)对晚期氧化蛋白产物(AOPPs)诱导的心肌细胞凋亡的保护作用及机制。方法以H9C2心肌细胞为研究对象,用空白对照、RSA对照、AOPPs、GLP-1、AOPPs+GLP-1及AOPPs+GLP-1+LY294002分别干预细胞24 h。采用cck-8法检测细胞的增殖活力DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧的产生;Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡;Western blot检测细胞内p-Akt、p-Bad、Bcl-2、Bax、active-caspase-3蛋白的表达。结果 GLP-1抵抗AOPPs引起的细胞增殖活力下降[(1.409±0.099)vs(0.929±0.083),P0.01],减少AOPPs诱导的活性氧簇产生[(47.817±0.878)%vs(25.413±2.597)%,P0.01]及细胞凋亡[(15.773±3.130)%vs(9.715±0.757)%,P0.05];GLP-1能恢复被AOPPs抑制的Akt及Bad的磷酸化,增加细胞抗凋亡蛋白Bcl-2、减少促凋亡蛋白Bax及凋亡执行子active-caspase-3的表达。结论 GLP-1通过PI3K/Akt/Bad信号通路改变促凋亡及抗凋亡蛋白间的平衡,保护AOPPs诱导的H9C2心肌细胞凋亡。     

Fas/FasL系统与心肌细胞凋亡

心肌细胞凋亡是许多心血管疾病发生发展的重要机制。Fas／FasL系统作为细胞凋亡的信号传导系统也参与了心肌细胞凋亡。当表达Fas的靶细胞和活性细胞的FasL交联后，启动Fas／FasL死亡信号传导系统，分别激活神经鞘磷脂途径蛋白酶途径和DAxx途径而引起Fas表达阳性的靶细胞凋亡。大量研究表明，Fas／FasL系统参与了急性心肌梗塞、病毒性心肌炎、扩张型心肌病、风湿性心脏病、心律失常、心脏移植排斥反应和心力衰竭等心肌细胞凋亡。因此对Fas／FasL系统某一环节的干预为心血管疾病的防治开辟一个新的涂释。     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导人巨噬细胞THP-1凋亡

泛素-蛋白酶体途径是生物体内进行蛋白质选择性降解的重要途径之一，广泛参与细胞周期调控、DNA修复、细胞信号转导、细胞凋亡等多种生理过程。为了研究调控泛素一蛋白酶体途径表达对巨噬细胞THP-1凋亡和细胞内载脂蛋白B的蓄积的影响，本实验采用蛋白酶体抑制剂MG132(5／μmol／L)处理THP-1细胞，流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞内载脂蛋白B含量，用半定量逆转录一聚合酶链反应检测细胞内UPP途径相关基因的表达。结果发现：MG132可以诱导THP-1细胞凋亡；实验组细胞内载脂蛋白B蓄积增加；实验组细胞内泛素活化酶、泛素缀合酶和泛素-蛋白连接酶mRNA表达均降低，而26S蛋白酶体mRNA无显著改变。结果提示，蛋白酶体抑制荆MG132能够诱导THP-1细胞凋亡，其机制可能与MG132抑制泛素-蛋白酶体途径中泛素活化酶、泛素缀合酶和泛素一蛋白连接酶活性，使细胞内载脂蛋白B经泛素-蛋白酶体途径降解减少，在细胞内蓄积而使细胞凋亡率增加。     

Salusins：一种新的心血管活性肽

近年来研究发现salusins具有心血管活性调节作用。salusins具有降低血压、减慢心率的作用。它参与调节心肌细胞生长,具有减轻心肌细胞钙超载、抗心肌细胞凋亡的作用。此外,它还参与调节巨噬泡沫细胞的形成,进而影响了动脉粥样硬化的进程。然而,salusins的天然受体及其在细胞内的信号传导途径仍有待于进一步研究。     

荜茇酰胺对人胃癌细胞株MKN45增殖、凋亡的影响及其机制研究

背景:近年研究显示,荜茇酰胺(PL)在诸多恶性肿瘤中可通过升高活性氧(ROS)水平选择性杀伤肿瘤细胞,然而其对胃癌细胞的作用仍有待进一步研究。目的:探讨PL对人胃癌细胞株MKN45增殖、凋亡的影响及其可能机制。方法:以不同浓度PL以及caspase抑制剂、抗氧化剂单独或联合处理MKN45细胞,CCK-8法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡和细胞内ROS水平,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白XIAP、cleaved-caspase3、7、9、cleaved-PARP、p53及其下游靶基因p21、GADD45α、PUMA表达。结果:PL可剂量和时间依赖性地抑制MKN45细胞增殖,经PL处理的MKN45细胞G1期细胞比率、细胞凋亡率和细胞内ROS水平显著升高,抗凋亡蛋白XIAP表达下调,caspase依赖性凋亡途径、p53及其下游靶基因激活。抗氧化剂NAC或广谱caspase抑制剂Z-VAD-FMK预处理可逆转PL的促ROS生成以及增殖抑制和促凋亡作用。结论:PL能抑制MKN45细胞增殖,使细胞发生G1期阻滞,诱导细胞凋亡,其抗肿瘤效应的作用机制可能为升高肿瘤细胞内ROS水平,进而激活p53和caspase依赖性凋亡途径。     

细胞程序性坏死与心血管疾病的研究进展

细胞凋亡是研究最为深入的细胞程序性死亡方式。但是近年发现,细胞中尚存在非凋亡性的程序性死亡机制。以往认为,细胞坏死是被动的细胞事件并且难以有效控制。新近发现的程序性坏死（necroptosis）作为一种死亡受体介导的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)非依赖性细胞死亡模式为细胞死亡机制学说带来了重大突破。许多研究报道相继表明,细胞程序性坏死同样是受细胞内信号因子严密调控的主动过程。心肌细胞的坏死和凋亡是心脏疾病的重要病理途径。本文综述了心肌缺血与心衰过程中程序性坏死的作用及其与心肌细胞凋亡的关系,并探讨了针对心肌细胞程序性坏死的潜在治疗方向。     

TNF-α介导的心肌细胞凋亡信号转导通路在心肌损伤中的作用

肿瘤坏死因子-α(TNF-α)介导心肌细胞凋亡具有双向效应,可以通过重要的三条凋亡途径促心肌细胞凋亡,同时也可通过核因子-kB、AKT等信号转导途径抑制心肌细胞凋亡,最终效应取决于局部心肌中TNF-α的浓度,现就TNF-α介导的这些重要信号转导通路及其在心肌损伤中的作用做一综述.     

促红细胞生成素对培养的乳鼠心肌细胞肥大的影响

目的:观察促红细胞生成素(EPO)对乳鼠心肌细胞肥大的影响.方法:体外分离培养乳鼠心肌细胞,用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激产生肥大的心肌细胞,加入不同浓度的EPO对肥大心肌细胞进行干预,以细胞表面积和心钠素(ANF)mRNA表达作为细胞肥大的观察指标,采用Western blot方法检测细胞内信号分子转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad2及p-Smad2蛋白表达.结果:20U/ml的EPO能有效逆转AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,低于此浓度未见明显效果;EPO能减弱促心肌细胞肥大信号分子TGF-β1、Smad2 及p-Smad2蛋白表达.结论:EPO具有抗心肌细胞肥大作用,且这一作用与TGF-β1-Smad2信号途径有关.     

白藜芦醇通过减弱线粒体损伤对高同型半胱氨酸血症大鼠所致心脏损伤的保护作用

目的探讨白藜芦醇对高同型半胱氨酸血症(HHcy)大鼠心肌细胞凋亡的逆转作用及相关分子机制。方法建立HHcy大鼠模型;超声心动图评估大鼠心功能;苏木素-伊红、Masson和TUNEL染色分析心肌细胞凋亡;TUNEL法检测细胞凋亡;Western印迹确定线粒体凋亡相关因子(NOX)4、细胞色素C和半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3表达;透射电镜观察心肌细胞线粒体形态;荧光显微镜观察细胞凋亡;Mitotracker和JC-1染色检测心肌细胞线粒体膜电位。结果 HHcy大鼠心肌细胞线粒体NOX4表达升高,细胞色素C渗漏增多,Caspase-3表达显著升高,细胞凋亡数量增多。HHcy大鼠心肌细胞线粒体膜电位显著下降,线粒体结构和功能破坏。予以白藜芦醇可明显抑制高同型半胱氨酸对心肌细胞的促凋亡和线粒体损伤作用。结论白藜芦醇可通过抑制高同型半胱氨酸对心肌细胞的线粒体相关凋亡和线粒体损伤作用,起到心肌细胞保护作用。     

从凋亡信号通路探讨热休克蛋白保护过氧化氢所致心肌细胞凋亡的机制

为探讨热休克蛋白保护过氧化氢所致心肌细胞凋亡的分子机制，采用热休克对原代培养的新生大鼠心肌细胞进行预处理，以诱导热休克蛋白的表达，观察热休克蛋白对过氧化氢所致心肌细胞凋亡的保护作用。结果发现，热休克预处理导致心肌细胞热休克蛋白70及αB-晶状体蛋白表达明显增加，同时显著抑制过氧化氢所致细胞色素C从线粒体释放，抑制Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3活化及随后的心肌细胞凋亡。以上结果提示，热休克蛋白通过抑制线粒体信号通路与死亡受体通路的活化保护过氧化氢导致的心肌细胞凋亡，为临床防治心血管疾病提供了新的信息。     

表没食子儿茶素没食子酸酯诱导细胞凋亡蛋白酶途径依赖的人胃癌细胞株MKN45凋亡

背景：表没食子儿茶素没食于酸酯（EGCG）可诱导人胃癌细胞株MKN45凋亡，但其凋亡信号的传导途径尚不清楚。目的：研究EGCG诱导人胃癌细胞株MKN45凋亡的作用是否通过细胞凋亡蛋白酶（caspsse-3）依赖途径，为其临床应用提供进一步的理论依据。方法：采用四甲摹偶氮唑蓝（MTT）比色法检测EGCG和caspase-3抑制剂z-DEVD-fmk作用后MKN45细胞的存活率：采用Annexin V-FITC＋PI双染色法检测EGCG和caspase-3抑制剂作用后MKN45细胞的凋亡率：采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测EGCG和caspase-3抑制剂作用后MKN45细胞内caspase-3活性的改变。结果：EGCG可诱导MKN45细胞凋亡，且细胞内caspase-3活性显著升高。而caspase-3抑制剂干预后，EGCG抑制MKN45细胞生长的作用明显减弱，细胞凋亡率下降，caspase-3活性显著下降。结论：EGCG可诱导MKN45细胞凋亡，该作用可被caspase-3抑制剂显著抑制，提示EGCG诱导MKN45细胞凋亡的作用是通过caspase-3依赖途径的。     

血管紧张素(1-7)抑制异丙肾上腺素诱导的H9c2心肌细胞凋亡

目的观察血管紧张素(1-7)[Ang(1-7)]对心肌细胞凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。方法应用异丙肾上腺素(ISO)处理H9c2心肌细胞12 h建立心肌细胞凋亡模型,Ang(1-7)或PI3K抑制剂LY294002与H9c2心肌细胞共处理12 h观察对ISO诱导的心肌细胞凋亡的影响。显微镜下观察H9c2心肌细胞生长情况,采用MTS法检测各组细胞的相对细胞活性,TUNEL法检测各组细胞凋亡率。JC-1荧光探针检测线粒体膜电位,Western blot检测cleaved Caspase-3、p-Akt及Akt蛋白的表达量。结果 ISO呈浓度依赖性抑制H9c2心肌细胞的相对细胞活性,Ang(1-7)呈浓度依赖性逆转ISO诱导的H9c2心肌细胞相对活性的降低;与对照组比较,ISO组细胞凋亡率及cleaved Caspase-3蛋白表达量显著增加,线粒体膜电位和p-Akt蛋白表达量显著降低;Ang(1-7)可抑制ISO诱导的H9c2心肌细胞凋亡率的增加,减少cleaved Caspase-3蛋白的表达,增加线粒体膜电位和p-Akt蛋白表达量。LY294002预处理后Ang(1-7)对ISO诱导的H9c2心肌细胞的保护作用明显减弱,表现为心肌细胞凋亡率及cleaved Caspase-3蛋白的表达量明显增加,p-Akt蛋白表达量减少。结论 ISO能诱导H9c2心肌细胞线粒体途径的细胞凋亡,而Ang(1-7)能抑制ISO诱导的线粒体途径的细胞凋亡。PI3K/Akt信号通路可能在Ang(1-7)抑制ISO诱导的H9c2心肌细胞凋亡中起到关键作用。     

钙在CVB_3诱导大鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的　探讨细胞内游离钙 [Ca2 ]i在柯萨奇病毒 B3(CVB3)诱导培养心肌细胞凋亡中的作用。方法　 DNA裂点检测法 (3′-末端标记 )及透射电镜检测细胞凋亡。 Fluo3- AM负载心肌细胞 ,共聚焦显微镜观察[Ca2 ]i荧光强度变化。结果　感染 2 4h心肌细胞内 CVB3滴度达峰值。感染 10 h未见凋亡的心肌细胞 ,17、2 4和 36 h凋亡细胞分别为 5 %、6 0 %和 90 % ,感染 17h心肌 [Ca2 ]i浓度达峰值。电镜结果提示 CVB3感染组存在典型的凋亡心肌细胞。结论　 CVB3可诱导培养心肌细胞的凋亡过程。细胞内 Ca2 参与凋亡细胞的信息传导过程 ,并在凋亡早期发挥重要作用     

冠心病相关细胞凋亡及中药抗凋亡机制的研究进展

综述冠心病相关细胞凋亡及中药抗凋亡机制,提示冠心病的发生发展与心肌细胞、血管内皮细胞、血管平滑肌细胞和巨噬细胞等的异常凋亡密切相关。在细胞凋亡的过程中,线粒体、死亡受体和内质网应激介导的途径是细胞凋亡的3个主要方式,其受B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)家族多种凋亡因子及其下游信号通路的调节。中药复方或提取物能通过调控细胞凋亡的3条途径,或调节凋亡途径中的关键因子、信号通路或靶基因等,发挥显著的心肌或血管保护作用。     

机械刺激与心肌细胞肥大

本文综述了近年来对机械信号在心肌细胞肥大过程中的作用以及机械信号传导途径方面的进展，如机械信号的感知、细胞内传导和细胞内效应。     

AKAP1过表达腺病毒载体构建及其在心肌细胞中的功能初步研究

目的 利用AdEasy腺病毒载体系统构建A激酶锚定蛋白（AKAP）1重组腺病毒载体,初步探索AKAP1在心肌细胞中的功能。 方法 以正常小鼠心肌细胞cDNA为模板,利用PCR获取AKAP1基因,构建腺病毒重组质粒pAdEasy-AKAP1。用293A细胞,包装重组腺病毒Ad-AKAP1颗粒,并用荧光蛋白标记法测定其滴度。用Western blot检测重组腺病毒感染原代小鼠心肌细胞和糖尿病心肌病细胞模型后AKAP1、Caspase-3的表达情况,用流式细胞仪检测原代小鼠心肌细胞内ROS生成水平及AKAP1对高糖状态下心肌细胞凋亡的影响。 结果 构建了携带AKAP1基因的过表达腺病毒载体,并获得5×1010 pfu/ml的高滴度重组腺病毒。重组腺病毒可感染原代心肌细胞和糖尿病心肌病模型H9c2细胞并介导AKAP1过表达（P<0.05）。与阴性对照组相比,过表达AKAP1可抑制高糖高脂状态下心肌细胞内ROS的生成（P<0.05）,可抑制高糖状态下心肌细胞的凋亡和Caspase-3活化（P<0.01）。 结论 过表达AKAP1对高糖高脂状态下的心肌细胞具有潜在保护作用,对心肌功能发挥具有重要作用。其机制可能与AKAP1抑制心肌细胞内ROS生成、抑制Caspase-3活化、抑制细胞凋亡有关。     

激活Notch信号途径对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用

目的 观察激动Notch信号途径抗心肌细胞缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）损伤的作用及其可能的机制。 方法 将心肌细胞分为4组:常氧+OP9-GFP（OP9为稳转细胞系;GFP:green fluorescent protein为绿色荧光蛋白）组,常氧+OP9-Dll1（Dll1:Delta-like 1为Notch的配体）组,H/R+OP9-GFP组,H/R+OP9-Dll1组。用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,并应用荧光探针DCFH-DA检测细胞内活性氧簇（reactive oxygen species,ROS）水平的变化。 结果 H/R后心肌细胞的凋亡水平增高（P<0.01）;与表达Dll1的OP9细胞系共培养,则可显著抑制心肌细胞的凋亡（P<0.01）;H/R增高的心肌细胞ROS水平（P<0.05,P<0.01）可以被共培养的OP9细胞系生成的Dll1显著降低（P<0.05,P<0.01）;应用百草枯可促进ROS的生成,而显著抑制Dll1激活心肌Notch信号途径的抗H/R凋亡效应（P<0.01）。 结论 激活Notch信号途径,具有抗H/R后心肌损伤的作用,该作用可能与降低ROS水平有关。     

肝脏死亡受体介导的细胞凋亡

死亡受体通过细胞内信号传导途径诱导细胞凋亡，与机体的生长、发育、病变和死亡有关。现对新近研究发现的死亡受体的种类、结构特征及其诱导细胞凋亡的机理进行综述，并探讨这些死亡受体在肝脏中的生理学和病理生理学作用。