人胰岛素和胰岛素原单克隆抗体制备及分析

应用杂交瘤技术获得针对胰岛素和胰岛素原的各4株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞.其中4株分泌胰岛素单克隆抗体的细胞(NI1、NI7、NI13、NI15)所分泌的抗体亚型均为IgG1;分泌胰岛素原单克隆抗体的细胞株所分泌的抗体亚型分别为IgA(NPI1)、IgG1(NPI3、NPI5)和IgG2a(NPI9);所有抗体的轻链均为κ型.所制备的胰岛素原单克隆抗体均不与胰岛素和C肽交叉反应,但所有胰岛素单克隆抗体均与胰岛素原交叉反应.     

三聚氰胺单克隆抗体的制备及鉴定

制备了抗三聚氰胺(melamine)单克隆抗体,鉴定了其免疫学特性并建立三聚氰胺标准抑制曲线。以人工合成抗原Melamine-BSA免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术建立分泌抗三聚氰胺单克隆抗体的细胞株,以体内诱生腹水法生产三聚氰胺单抗,用硫酸钠盐析法提纯,以直接竞争ELISA法建立三聚氰胺标准抑制曲线。获得了1株能稳定分泌抗三聚氰胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株H2C6。用间接ELISA方法测定腹水单抗效价为2×10-7。经金标免疫层析实验鉴定单抗与三聚氰胺特异性结合,H2C6杂交瘤细胞株单抗对三聚氰胺的半数抑制浓度(IC50)为4.15μg/mL。除与三聚氰酸交叉反应性为72%外,与三嗪及各类抗生素等交叉反应性都小于5%。体外多次传代培养和反复冻存复苏后抗体分泌稳定。     

人参皂苷Rb1单克隆抗体的制备与鉴定

用人参皂苷Rb1分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)反应合成了交联抗原GRb1-BSA(GRb1与BSA的结合比为10∶1)和GRb1-OVA(GRb1与OVA的结合比为8∶1)。以GRb1-BSA为免疫原,分5次免疫3只BALB/C小鼠,取免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合,Hat筛选,有限稀释法克隆。建立分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞系。采用ELISA(酶联免疫吸附测定)间接法和竞争法检测抗体的特异性。结果获得了一只小鼠分泌抗体效价达1∶16000,并获得两株分泌GRb1的单克隆抗体的细胞系,分别命名为1F7和1G3,单抗检测显示在0.01~1μg/mL呈线性关系,GRb1的检测范围达50~350 ng/mL,两株单抗针对相同的抗原决定簇,制备的单克隆抗体可用于GRb1含量的检测和分离。     

抗3α-HSD单克隆抗体制备方法的初步研究

为了利用杂交瘤技术制备抗3α-HSD单克隆抗体，用表达纯化的3α-HSD作为抗原免疫Balb/c小鼠，获得针对该抗原致敏的B淋巴细胞，并用获得的B淋巴细胞与SP2/0进行细胞融合，得到杂交瘤细胞株，在ELISA间接法筛选出阳性孔的基础上，进行亚克隆，筛选出能稳定分泌抗3α-HSD单克隆抗体的杂交瘤细胞株。结果得到能分泌抗3α-HSD单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备过程中发现很多特殊的现象，如杂交瘤细胞上清与单抗腹水效价过低，但多抗血清效价较高等。文章对在单抗的制备过程中遇到的问题做了初步分析，为之后制备抗3α-HSD单克隆抗体的研究提供技术支持。     

双酚A单克隆抗体的制备

以双酚酸为起始原料,通过3碳间隔臂联接牛血清白蛋白(BSA),制备了双酚A(BPA)人工抗原1:BPA-C3-BSA。以双酚A为起始原料,在其中一个酚羟基位置通过4碳间隔臂联接BSA,制备了BPA人工抗原2:BPA-C4-BSA。分别将这两种抗原免疫Balb/C小鼠,经克隆、亚克隆后获得稳定分泌细胞株BPA1-6E3和BPA2-4C7。对细胞上清液中的抗体进行鉴定,两株细胞所分泌抗体对BPA的IC50值分别为43.76 ng/mL和3.56 ng/mL。进一步鉴定4C7的IgG亚型为IgG1,轻链亚型为κ,抗体亲和常数为6.2×10~9。抗体与双酚酸的交叉反应率为4.9%,与双酚B的交叉反应率小于0.36%。初步实验表明,该抗体与BPA人工抗原2配对,可用于开发BPA酶联免疫试剂盒。     

牛布鲁氏杆菌杂交瘤细胞株的筛选及其单克隆抗体鉴定

采用牛型A544布鲁氏杆菌膜蛋白为抗原,筛选出BBH—C_9杂交瘤细胞株。所分泌免疫球蛋白亚类为IgG_1,染色体数为105.1±3.3,培养液抗体滴度为1:100,小白鼠腹水抗体滴度为1:12800;单克隆抗体亲积力为4.5×10~8L/M,分子量重链5.6×10~4道尔顿,轻链为2.4×10~4道尔顿。用免疫亲和层析法和辛酸——硫酸铵法纯化抗体导致其蛋白质含量和抗体活性分别为15％、30.03％和55％、75％。     

胶体金免疫层析法快速诊断禽流感

建立了一种简便、快速、准确检测动物禽流感病毒(AIV)的胶体金免疫层析法(GICA).具体内容包括制备胶体金标记抗AIV单克隆抗体和羊抗AIV抗体,结合垫和样品垫的处理,组装免疫层析试纸条.检测动物AIV,进行敏感性和特异性评定.结果表明:测试条灵敏度可达10 ng/ml.与进口禽流感胶体金免疫层析试剂条比较,符合率达100%.本方法具有特异性强、灵敏度高、简便快速的特点,可用于禽流感的早期诊断.     

人APOBEC3G基因克隆、表达、纯化及多克隆抗体制备

为了获得人APOBEC3G蛋白及其多克隆抗体,从H9细胞中提取总RNA,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术获得人APOBEC3G基因.将测序鉴定过的APOBEC3G基因克隆到原核表达载体pET-32a上,以包涵体的形式在E.coli BL21(DE3)中高效表达,由于APOBEC3G蛋白C端融合了6×His标签,有助于对蛋白的纯化及鉴定.应用酶切技术、SDS-PAGE及Western Blot等方法确保基因片段的正确性和蛋白的特异性.纯化后的APOBEC3G蛋白用来免疫日本大耳白兔,用间接ELISA法测定兔多克隆抗体滴度,获得了纯度超过80%的APOBEC3G融合蛋白,抗APOBEC3G多克隆抗体滴度高达1:102 400.     

H5N1禽流感病毒蛋白对1F1TM基因家族转录的影响

干扰素诱导的跨膜蛋白(Interferon induced transmembrane protein,简称IFITM)通过抑制病毒进入细胞来保护细胞,使其免受多种病毒的感染。为了鉴定H5N1病毒本身和结构蛋白是否作为IFITM基因的新调节因子,通过试验探讨了H5N1病毒和结构蛋白对IFITM基因家族转录的影响。结果显示,H5N1病毒的NS1、M1、NP和PB2蛋白在A549细胞中增加了IFITM1、IFITM2和IFITM3表达,对HEK293T细胞没有影响,在HEK293T细胞和A549细胞上,没有发现H5N1病毒的HA和NA蛋白影响IFITM基因家族表达。即在H5N1禽流感病毒感染期间,NS1、M1、NP和PB2蛋白的过表达可以直接刺激IFITM1、IFITM2和IFITM3的上调,而呼吸系统的上皮细胞可能首先被影响,特别地,NP和NS1显示对IFITM基因家族的表达显示更显著的作用。     

荧光RT-PCR与常规RT-PCR检测禽流感病毒比较研究

采用目前公认的2种敏感特异的检测方法———荧光RT-PCR和常规RT-PCR———检测标准毒株禽流感病毒H9亚型(鸡胚尿囊液)及部分待检样品,进行灵敏度、特异性、安全性等方面的比较.结果表明:荧光RT-PCR方法在4 h内就能得出结果,检测尿囊液的禽流感病毒灵敏性达到10-7;RT-PCR方法6 h出结果,其灵敏度为10-5,且荧光RT-PCR不需电泳,不接触EB,更安全.因此,荧光RT-PCR比常规RT-PCR更灵敏、快速和安全.     

Banach代数中的行列式理论

探讨了 Banach 代数中的行列式理论.给出了具有单位元的迹 Banach 代数具有行列式的充要条件.     

FMS中加工质量故障预报的新方法

对引起加工质量故障的原因进行了研究,建立了用于加工中心加工质量故障分析的与/或故障树,提出了隐加工质量故障(FMQF)的概念和由·FMQF 找出制造系统故障的决策树方法.本文在模糊理论基础上,提出了隐加工质量故障识别的新方法,用这种方法可以根据控制图的变化进行设备状态估计.基于以上研究,建立了可用于柔性制造系统隐加工质量故障预测和预报的专家系统.     

立方准晶的反平面问题与Ⅲ型裂纹问题

发展了立方准晶材料的断裂理论 .通过应用Fourier分析和对偶积分方程理论 ,得到了立方准晶材料Ⅲ型裂纹问题的精确解析解 ,并由此确定了位移与应力场 ,应力强度因子和应变能释放率 .结果表明 ,应力强度因子与材料常数无关 ,而应变能释放率依赖于所有的材料常数 .这些为研究此新固体材料的变形和断裂提供了重要的信息 .     

非织造布滤料性能及过滤过程的研究进展

对近年来非织造布滤料的研究进展做了简要综述,介绍了内部结构的研究及表征、过滤性能及其影响因素、过滤过程的计算机模拟,指出进一步发展所需要解决的问题。     

高师物理专业人才培养与基础教育衔接问题的研究

分析了当前高师物理专业人才培养与基础教育人才需求存在的问题,结合调查情况,提出了高师物理专业在培养目标、课程设置、教学内容、教学方法及实践教学环节方面的改革措施。     

JOURNAL OF BEIJING INSTITUTE OF TECHNOLOGY TOTAL CONTENTS(Vol.23)

正~~     

鞋面织物染整过程节能减排技术方法

鞋面织物染整是纺织工业中一个特殊分支,公司通过采用先进染色技术和工艺,可以从源头上达到节能和减少废水产生量的效果,废水产生后经过处理达标排放,部分经深度处理后回用。公司经长期实践后已经达到吨织物染整用水125m~3/t_(产品),吨织物排放废水79.2 m~3/t_(产品),水回用率达37.8%,吨产品蒸汽耗量从9t/t_(产品)下降到7 t/t_(产品),均达到国内国际先进水平。     

一种面向对象的超媒体系统的设计与实现

介绍了一种面向对象的 NBO(node-block-object)超媒体数据模型.该模型利用面向对象的方法,将多媒体信息和链接功能封装于一体,成功地实现了交叉链接和双向链接,大大增强了系统的灵活性,并实现了超媒体系统中的前、后向双向查找功能.在链接关系上,还实现了条件约束,从而大大方便了时间相关媒体信息的处理和多种媒体对象相互协作的操作.     

一类摩擦非线性系统的PID控制和摩擦补偿控制的实验比较研究

研究一类高度非线性摩擦特性影响下的控制系统的定位控制问题 .针对负载扭矩变化而造成摩擦特性的变化 ,采用PID控制和摩擦补偿控制对阀控液压马达控制系统的定位控制进行实验对比分析 .实验结果表明 ,常规比例控制由于受摩擦的影响产生较大的稳态误差 ,而积分控制的引入可减小稳态误差 ,但却引起系统产生极限环振荡和较长的调节时间 ;简单的定摩擦补偿在恒定的负载扭矩下可以有效地减小稳态误差 ,但是当负载扭矩大范围变化时 ,稳态定位精度将大大降低 ;基于误差和误差变化的动态摩擦补偿 ,在负载扭矩大范围变化的条件下均获得了高精度的定位控制 .     

Towards Excellence in Science Chinese Academy of Sciences

<正>May 26,2014,BeijingScience is a human enterprise in the pursuit of knowledge.The scientific revolution that occurred in the 17th Century initiated the advances of modern science.The scientific knowledge system created by human beings,the tremendous productivity brought about by science,and the spirit,methodologies and norms formulated in scientific practice since the 17~(th)Century have long become essential elements of