工程蝇蛆体内活性物质体外抗肿瘤作用的研究

对工程蝇蛆体内活性物质及体外抗肿瘤作用进行了研究。选用SephadexG-50初步分离蝇蛆体内活性物质;采用MTT法测定K562细胞的生长抑制率;通过倒置显微镜观察K562细胞的形态变化。实验结果表明:峰1组分半致死浓度IC50为100μg/mL,峰2组分半致死浓度IC50为80μg/mL。随所添加活性物质浓度的增大,肿瘤细胞受抑制作用增强;活性物质作用于K562细胞前后其细胞形态发生明显变化,受抑制细胞由一个完整细胞变为多个凋亡小体,因此可以说明工程蝇蛆体内活性物质在体外对K562细胞具有抑制生长的作用。     

蒜头果蛋白的纯化鉴定及分析

采用粉碎、磷酸盐缓冲溶液浸提、硫酸铵沉淀、疏水色谱层析等分离手段,从蒜头果种仁中分离纯化蒜头果蛋白,并对其相对分子质量、氨基酸组成、等电点、中性糖含量、自由巯基含量、细胞活性等进行分析。结果表明:蒜头果蛋白是一种糖蛋白,含有18种氨基酸,等电点为4. 6,相对分子质量为61 875 Da,由A、B 2条链通过二硫键连接而成,蒜头果蛋白对Hela和Vero细胞具有强烈的细胞毒性。蒜头果蛋白作为一种新的蛋白质,有较好的药用价值。     

罗非鱼头长链碱的分离纯化及抗肿瘤活性

目的：探讨罗非鱼头长链碱（tilapia head long chain bases,TH-LCB）的提取纯化方法及其体外抗肿瘤 活性。方法：以罗非鱼头为原料,采用有机溶剂提取法,提取纯化得到TH-LCB;采用四甲基偶氮唑盐法、细胞 凋亡率和细胞周期的测定和蛋白免疫印迹等方法,探讨了TH-LCB对人白血病K562细胞的增殖抑制作用和凋亡诱 导作用。结果：TH-LCB可显著抑制人K562细胞的增殖,TH-LCB作用24、48 h后的半数抑制浓度分别为42.207、 39.494 μg/mL;随着TH-LCB质量浓度的增加,细胞凋亡率逐渐增加,sub-G0/G1峰（凋亡峰）也随之升高,表明 TH-LCB通过诱导细胞凋亡来抑制K562细胞增殖;Western blot结果表明,TH-LCB可提高细胞内Caspase-3的蛋白 表达量,呈剂量依赖效应。结论：TH-LCB可通过诱导K562细胞凋亡抑制其增殖,这一过程可能与Caspase-3的 激活有关。     

硒酸软骨多糖对K562细胞线粒体膜电位及凋亡的影响

本文研究了硒酸软骨多糖(CA-Se)对K562人慢性髓源白血病细胞线粒体膜电位的影响,及对K562细胞的凋亡诱导作用。采用MTT比色法测定CA-Se对K562细胞的增殖抑制作用;Hoechst 33342/PI染色后于显微镜下观察细胞的形态变化;罗丹明-123染色后用流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位的变化;采用免疫荧光法检测caspase-9蛋白表达水平,并用RT-PCR检测其基因的表达。结果表明:CA-Se可显著抑制K562细胞的增殖,且具有浓度依赖性和时间依赖性;经CA-Se作用后,细胞形态发生明显改变,细胞体积变小,细胞膜变得不规则,染色质固缩;对照组与CA-Se处理组的线粒体膜电位分别为96.10%和78.07%,膜电位下降;CA-Se处理后,K562细胞中caspase-9蛋白表达显著增加,其基因表达水平显著上升。说明硒酸软骨多糖可通过降低细胞线粒体膜电位,上调凋亡起始酶caspase-9的基因表达,激活caspase-9蛋白来诱导K562细胞凋亡。     

苦瓜渣蛋白提取工艺优化及其体外抑制K562细胞增殖作用研究

采用单因素结合均匀设计优化了苦瓜渣蛋白盐溶法提取工艺,并对蛋白粗提物进行了体外抑制K562细胞增殖能力测定。结果表明,最优工艺条件为:盐浓度0.25mol/L、时间3.59h、pH为9、液料比10.36:1(mL/g)、温度25℃、提取2次。该条件下实际提取率为9.28%。在试验浓度范围内,苦瓜渣粗蛋白对K562细胞生长具有明显的抑制作用,并呈量效关系。     

蒜头果种仁的营养成分分析

测定了蒜头果种仁的蛋白质含量、粗脂肪含量及蒜头果种仁油脂肪酸组成和矿质元素含量,并采用氨基酸自动分析仪测定蒜头果种仁的氨基酸组成,对其氨基酸营养价值进行评价。结果表明：蒜头果种仁蛋白质含量为21.02%,粗脂肪含量为61.05%,蒜头果种仁油中共检出17种脂肪酸,包括5种饱和脂肪酸和12种不饱和脂肪酸,其中神经酸的含量最高,为45.04%;蒜头果种仁含有17种氨基酸,其中7种为必需氨基酸,其氨基酸比值系数分（SRC）为77.25,营养价值较高;蒜头果种仁中含有K、P、Mg、S、Ca、Fe、Mn等矿质元素。蒜头果种仁营养成分丰富,可进一步加强其资源化利用。     

鱼头多糖对K562细胞增殖抑制作用的初步研究

主要研究鱼头多糖对K562细胞的抑制作用。通过MTT法检测鱼头多糖对K562细胞的增殖抑制率,HE染色法观察K562细胞形态学的变化,流式细胞仪检测K562细胞的凋亡情况。结果表明,MTT法测定在药物浓度≤200μg/m L时,鱼头多糖对K562细胞增殖有明显抑制作用,其抑制率与时间、浓度呈正相关。HE染色显示多糖作用于K562细胞后出现了明显的凋亡和坏死同时发生的现象,且表现出时间依赖性。流式细胞仪检测多糖对K562细胞周期分布有显著影响,且凋亡现象明显,并伴有明显的坏死现象。在多糖作用72 h后,凋亡细胞的比例高达细胞21.28%。因此,提示鱼头多糖对K562细胞的增殖抑制作用明显。     

蒜头果油微胶囊制备工艺优化及性质分析

以阿拉伯胶和麦芽糊精为复合壁材,采用喷雾干燥法制备蒜头果油微胶囊。通过单因素试验,考察固形物含量、乳化剂添加量、壁材比、芯壁比、进风温度、进料量对蒜头果油微胶囊包埋率的影响,采用Box-Behnken设计响应面试验优化蒜头果油微胶囊的制备工艺,并采用扫描电子显微镜（SEM）、粒度分析仪、热重分析仪和体外模拟消化等对蒜头果油微胶囊的性质进行了分析。结果表明：蒜头果油微胶囊最佳制备工艺条件为乳化剂添加量1%、阿拉伯胶与麦芽糊精质量比4∶ 3、芯壁比1∶ 4、固形物含量16%、进风温度160 ℃、进料量4 mL/min,在最佳条件下蒜头果油微胶囊的包埋率为76.92%;蒜头果油微胶囊呈较光滑球形,其结构完整、粒径均一,且具有良好的流动性、热稳定性、分散性;体外模拟胃肠道消化后,微胶囊芯材几乎完全释放。蒜头果油微胶囊化有利于保护蒜头果油的有效成分,提高其消化吸收效果,扩大其应用范围。     

蒜头果种子中水溶性蛋白的提取及其抗氧化性

采用饱和(NH4)2SO4法对蒜头果种子中水溶性蛋白进行逐级分离,并测定其体外抗氧化活性。结果表明:60%⁸0%饱和度的(NH4)2SO4对蒜头果种子中水溶性蛋白的分离效果最好,同时各级盐析蛋白组分均对超氧阴离子(O2-·)、二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)和羟自由基(·OH)有不同程度的清除能力,其中以40%80%饱和度的(NH4)2SO4对蒜头果种子中水溶性蛋白的分离效果最好,同时各级盐析蛋白组分均对超氧阴离子(O2-·)、二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)和羟自由基(·OH)有不同程度的清除能力,其中以40%⁶0%、60%60%、60%⁸0%和80%80%和80%¹00%3个(NH4)2SO4饱和度段的效果最为明显。结合十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)图谱分析,分子质量为30.0 kDa和60.0 kDa左右的2种蛋白可能在蒜头果种子水溶性蛋白的抗氧化反应中发挥着重要作用。     

蒜头果油微波辅助提取及脂肪酸成分分析

以蒜头果果仁为原料,研究了利用微波辅助提取蒜头果油的工艺条件,通过单因素试验和正交试验,探讨了溶剂种类、微波功率、提取时间、料液比对蒜头果油得率的影响.结果表明,最佳工艺条件为:提取溶剂为石油醚(60～90℃),料液比1:8(m/V),提取时间150 S,微波功率600 W.与传统的索氏提取法相比,微波提取法的得率提高了2.1%,且微波提取时间仅为索氏提取的1/280.利用气相色谱-质谱联用技术对蒜头果油的脂肪酸组成进行了分析,共分离出15种成分,鉴定了其中的11种,已被鉴定的成分占总量的90.67%.     

尖紫蛤糖胺聚糖抑制肿瘤细胞生长作用的研究

采用四氮唑蓝还原法(MTT法)研究了尖紫蛤糖胺聚糖对人宫颈癌细胞(Hela细胞)、人鼻咽癌细胞(CNE-2Z细胞)、慢性髓性白血病细胞(K562细胞)的体外抗肿瘤活性。结果显示:尖紫蛤糖胺聚糖对三种肿瘤细胞具有较强的抑制能力,并存在一定的量效关系;尖紫蛤糖胺聚糖与阳性药物(5-Fu)合用呈单纯相加作用或增强、协同作用。     

VB2联合五氟对结肠癌细胞C26及Balb/c荷瘤小鼠的协同抗肿瘤活性作用

探究五氟尿嘧啶(5-FU)联用VB_2对其体内和体外抗结肠肿瘤活性的协同作用。体外,通过MTT和Chou-Talalay Method法定量分析二者联用指数(CI)(CI=1加和作用;CI1协同作用;CI1拮抗作用);采用Westernblot、细胞流式研究联用对凋亡蛋白PARP切割以及细胞周期的影响。体内,以结肠癌Balb/c荷瘤小鼠实验探究两药联用对小鼠肿瘤生长和免疫生理功能的影响。结果显示,5-FU与VB_2联用,C26细胞抑制率50%及90%时相应的CI值分别为0.52和0.13,具有协同效应。联用组较5-FU和VB_2单用组的PARP蛋白切割条带增强显著,周期实验联用组G1期比例为75.12%较5-FU单用组64.02%明显提高,且差异具有统计学意义(p0.05)。体内,5-FU与VB_2联用后小鼠肿瘤抑制率从51.53%提高至76.18%,瘤体比指数从0.16下降为0.071,且差异均具有显著性(p0.001);脾脏指数联用组与5-FU单用组相比显著降低;肝肾指数以及血尿尿素氮和血浆肌酐含量各组并无统计学差异;与5-FU治疗组血浆尿酸含量108.50μmol/L相比,联用组尿酸含量仅为59.75μmol/L,显著下降(p0.001)。因此,5-FU与VB_2联用对结肠癌细胞C26和Balb/c荷瘤小鼠具有协同抗肿瘤活性,且与细胞G1期阻滞有关。     

野生蓝莓总花青素生物活性研究

从野生蓝莓中提取总花青素,并采用XAD-7大孔树脂进行纯化,用超氧阴离子和双氧水自由基清除进行体外抗氧化、小白鼠耳肿足肿模型进行抗炎、Alamar Blue法进行体外抗肿瘤等生物活性评价。结果表明:野生蓝莓花青素抗氧化能力显著,与浓度梯度呈正相关关系;在浓度800μg/m L时对超氧阴离子的清除率达到86.86%,浓度为100μg/m L时对双氧水自由基的清除率达到73.93%;并且具有良好的抗炎能力,在100μg/g剂量灌胃时,对耳廓肿胀抑制率为47.04%,足肿抑制在第4小时达到最大作用;体外抗肿瘤活性也十分显著,对白血病细胞K562增殖抑制的IC50为79.01μg/m L,以上结果表明野生蓝莓具有多种生物活性,为其深入研究和开发利用提供了理论依据。     

蒜头果中3-酮酯酰-CoA合酶基因克隆与表达分析

以蒜头果(Malania oleifera)为实验材料,基于转录组数据分析,采用RT-PCR方法获得蒜头果3-酮酯酰-CoA合酶(KCS)基因的cDNA序列,命名为MoKCS1,GenBank登录号为MK210592。序列分析显示MoKCS1基因cDNA全长为1 539 bp,编码512个氨基酸,属于KCS家族。序列比对分析显示Mo KCS1拥有KCS家族特有的3个功能保守结构域,与榴莲(Durio zibethinus) KCS的蛋白序列同源性为80. 66%;与已知超长链KCS蛋白进行系统进化分析显示,MoKCS1独立形成一个分支。荧光定量PCR分析表明,MoKCS1在蒜头果果实膨大期的表达量最高,而在叶中几乎不表达。     

刺玫果多酚对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

通过ox-LDL诱导的兔胸主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC),建立体外细胞模型,研究刺玫果多酚对VSMC增殖及VSMC分泌NO能力的影响。研究结果表明:刺玫果多酚具有抑制VSMC的异常增殖和提高NO生成量的功效,其作用机制可能与预防动脉粥样硬化的功能有关。     

藻蓝色素蛋白下调RIPK1表达并抑制肺癌A549细胞的增殖和迁移

以非小细胞肺癌A549细胞为模型,探究藻蓝蛋白抑制其增殖和迁移的调控机制。采用MTT法、克隆形成试验、流式细胞术、划痕试验等方法检测藻蓝色素蛋白对细胞增殖、迁移的影响。采用转录组学测序分析筛选关键基因:受体相互作用蛋白激酶1(Receptor interacting proteinkinase1,RIPK1),通过体外转染小干扰RNA沉默RIPK1,利用荧光定量PCR、免疫印迹技术检测沉默效率,验证沉默RIPK1后细胞增殖机制及体外迁移能力的变化。结果表明,藻蓝蛋白降低了细胞的存活率、生长速率、集落形成能力以及体外迁移能力。细胞转染RIPK1 siRNA后,RIPK1的表达受到显著抑制,同时,细胞生长速率、集落形成能力以及体外迁移能力也降低,并且细胞周期出现G1期阻滞,这与藻蓝蛋白处理A549细胞的表型一致。本研究证实了藻蓝蛋白能够通过下调RIPK1表达抑制肺癌A549细胞的增殖和迁移,为利用新型抗癌功能性食品着色剂奠定了基础,同时也对非小细胞肺癌的安全性治疗提供了理论依据。     

葛仙米藻蓝蛋白和藻红蛋白的体外抗炎和抗紫外活性比较研究

目的:对葛仙米藻蓝蛋白和藻红蛋白的抗炎和抗紫外活性进行体外比较研究。方法:通过Lipopolysaccharide(LPS)诱导RAW264.7细胞分泌NO和TNF-α,比较葛仙米中藻蓝蛋白和藻红蛋白的抗炎活性;通过Ultraviolet radiation B(UVB)辐照诱导NIH-3T3成纤维细胞损伤,考察藻蓝蛋白和藻红蛋白的抗紫外损伤活性。结果:体外抗炎结果显示LPS能极显著诱导RAW264.7细胞分泌NO和TNF-α(P<0.01),藻蓝蛋白和藻红蛋白均能极显著抑制LPS诱导RAW264.7分泌的NO和TNF-α的含量水平(P<0.01),其中藻红蛋白抑制NO分泌能力高于藻蓝蛋白,藻蓝蛋白对TNF-α的分泌抑制作用高于藻红蛋白。体外抗紫外损伤结果显示UVB 4000 mJ/cm2可以成功诱导NIH-3T3细胞的紫外损伤,但是藻蓝蛋白和藻红蛋白对NIH-3T3细胞的紫外损伤并无明显保护作用。结论:葛仙米中藻蓝蛋白和藻红蛋白具有很好的体外抗炎活性,但两者对UVB诱导的细胞损伤并无明显保护作用。     

蒜头果渣中蛋白质的提取工艺研究

以提油脂后的蒜头果渣为原料,测定了蒜头果渣中蛋白质含量。通过单因素实验和正交实验优化蛋白质提取的工艺条件。结果表明,蒜头果渣的蛋白质含量为31.07%,蛋白质提取的优化工艺条件为:提取温度为室温,提取溶剂为磷酸盐缓冲液(pH7.5),提取时间为3h,料液比(W/V)为1:25。在此优化条件下,蛋白质提取率为86.01%。     

甘草查尔酮B及其衍生物的制备及抗宫颈癌活性

目的 提取新疆胀果甘草中的总黄酮, 分离纯化甘草查耳酮B, 合成三甲氧查耳酮B, 对比研究其体外抗宫颈癌活性。方法 采用超声辅助乙醇提取法提取总黄酮; 结合聚酰胺与大孔吸附树脂法纯化总黄酮; 通过薄层法从总黄酮中分离纯化单体查耳酮B(化合物I); 同时, 以取代苯乙酮和取代苯甲醛为原料, Claisen-Schmidt碱催化方法合成三甲氧查尔酮B(化合物II); 以人宫颈癌SiHa和HeLa细胞为体外药理实验模型, 以顺铂为阳性对照, 用噻唑蓝比色法对比测定2个单体化合物对宫颈癌细胞增殖的抑制活性。结果 在浓度为1~100 μg/mL时, 化合物I对SiHa和HeLa细胞作用24、48、72 h时的抑制率为2.99%~75.39%; 而化合物II在此浓度范围内的抑制率为0.76%~86.14%。结论 超声辅助乙醇回流提取法联用聚酰胺和大孔树脂柱层析法是制备含量较高的胀果甘草总黄酮的可行方法; 甘草查尔酮B的甲氧基化修饰可显著提高其抗宫颈癌活性。     

NF-κB和Caspase-3在金雀异黄素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡中的作用研究

采用MTT法、形态学观察和琼脂糖凝胶电泳法检测了金雀异黄素(genistein,Gen)对体外培养的人胃癌SGC-7901细胞的生长和凋亡诱导作用,并采用免疫组化法和WesternBlot法检测Gen对人胃癌细胞NF-κB、Caspase-3蛋白的表达情况。结果显示:Gen可抑制肿瘤细胞生长,诱导细胞凋亡,抑制NF-κB蛋白表达,增加Caspase-3蛋白表达。结果提示:Gen抑制NF-κB蛋白表达、增加Caspase-3蛋白表达,可能是其诱导胃癌细胞凋亡的机制之一。