硒酸软骨多糖对K562细胞线粒体膜电位及凋亡的影响

本文研究了硒酸软骨多糖(CA-Se)对K562人慢性髓源白血病细胞线粒体膜电位的影响,及对K562细胞的凋亡诱导作用。采用MTT比色法测定CA-Se对K562细胞的增殖抑制作用;Hoechst 33342/PI染色后于显微镜下观察细胞的形态变化;罗丹明-123染色后用流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位的变化;采用免疫荧光法检测caspase-9蛋白表达水平,并用RT-PCR检测其基因的表达。结果表明:CA-Se可显著抑制K562细胞的增殖,且具有浓度依赖性和时间依赖性;经CA-Se作用后,细胞形态发生明显改变,细胞体积变小,细胞膜变得不规则,染色质固缩;对照组与CA-Se处理组的线粒体膜电位分别为96.10%和78.07%,膜电位下降;CA-Se处理后,K562细胞中caspase-9蛋白表达显著增加,其基因表达水平显著上升。说明硒酸软骨多糖可通过降低细胞线粒体膜电位,上调凋亡起始酶caspase-9的基因表达,激活caspase-9蛋白来诱导K562细胞凋亡。     

姜黄素对结肠癌细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用研究

本文研究了姜黄素对结肠癌LoVo细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用。不同浓度姜黄素作用体外培养的人结肠癌LoVo细胞后,倒置显微镜观察LoVo细胞的形态学变化,采用MTT法检测姜黄素对LoVo细胞的增殖抑制能力;RT-PCR技术检测Bax、Bcl-2和Caspase-3的mRNA表达水平;Annexin V-FITC/PI标记检测细胞凋亡率;Western blotting和免疫荧光细胞化学染色检测姜黄素作用前后c-myc蛋白表达的差异。结果表明,姜黄素可显著抑制人结肠癌LoVo细胞的増殖,具有明显的量效和时间依赖性,24、48和72 h姜黄素抑制LoVo细胞的IC50分别为(26.45±0.41)、(19.13±0.09)和(10.12±0.04)μmol/L;姜黄素可激活细胞中Bax和Caspase-3的mRNA表达,抑制Bcl-2的mRNA和c-myc蛋白的表达,姜黄素可诱导LoVo细胞发生凋亡。姜黄素通过上调Bax和Caspase-3表达,下调Bcl-2和c-myc的表达来抑制人结肠癌LoVo细胞的增殖并促使其凋亡。     

鼓槌石斛毛兰素诱导人结肠癌Caco-2细胞凋亡

目的:研究毛兰素对人结肠癌Caco-2细胞增殖的抑制作用及其诱导细胞凋亡的分子机制。方法:采用SRB法检测毛兰素对Caco-2细胞增殖的抑制作用,用Hoechst33342染色法观察细胞的形态学改变,流式细胞术检测细胞的凋亡率和细胞周期;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-3的表达水平。结果:与对照相比,毛兰素能抑制结肠癌细胞Caco-2的增殖,且抑制率随着药物浓度与时间增加,呈剂量时间效应,48 h半数抑制浓度IC50为0.845μg/m L;毛兰素能诱导Caco-2细胞凋亡,并诱导细胞周期阻滞于G_2期;Caspase-3活性裂解片段表达增高。结论:毛兰素对肿瘤细胞的增殖具有一定抑制作用且通过线粒体途径诱导Caco-2细胞凋亡。     

海带多糖对人肝癌细胞Bel-7402增殖的抑制作用及其机制

目的：探讨不同质量浓度的海带多糖对人肝癌细胞Bel-7402增殖的抑制作用。方法：分别以质量浓度为5、10、20、30 mg/mL的海带多糖处理Bel-7402细胞,48 h后观察海带多糖对细胞增殖的抑制情况,Annexin V-FITC试剂盒检测细胞凋亡状况,酶联免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法检测Caspase-3活性,Western blotting法检测细胞内Caspase-3和甲胎球蛋白（alpha-fetoprotein,AFP）表达量。结果：海带多糖对Bel-7402细胞的增殖有明显抑制作用,最佳抑制剂量为30 mg/mL;随着海带多糖质量浓度的升高,细胞凋亡率明显增加（P＜0.05）,海带多糖处理组Bel-7402细胞内的Caspase-3表达水平同正常对照组细胞相比呈上升趋势,差异具有统计学意义（P＜0.05）;AFP蛋白表达水平呈下降趋势。结论：海带多糖对人肝癌细胞Bel-7402增殖具有抑制作用,其机制可能是激活Caspase-3,引起细胞凋亡和AFP蛋白表达水平下降所致。     

姜黄素对大肠癌细胞Caspase-3和PARP表达的影响

为了探讨姜黄素对LoVo细胞凋亡与凋亡相关蛋白Caspase-3和多聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶(PARP)表达的影响,明确其治疗大肠癌的生物学基础。用不同浓度姜黄素处理体外培养的人大肠癌LoVo细胞,采用MTT法检测姜黄素对LoVo细胞的增殖抑制作用,倒置显微镜观察姜黄素对LoVo细胞集落形成的影响;Hoechst33258染色法观察细胞凋亡;采用分光光度法检测Caspase-3酶活性;Western blotting检测姜黄素作用前后Caspase-3和PARP蛋白表达的差异。结果显示姜黄素可抑制人大肠癌LoVo细胞的生长増殖,并能抑制细胞集落的形成,降低细胞增殖生存率,激活Caspase-3的表达,呈量效和时间依赖性,20μmol/L以上浓度姜黄素能显著诱导LoVo细胞凋亡,上调Caspase-3和PARP蛋白表达。这表明姜黄素能显著抑制LoVo细胞的增殖并诱导其发生凋亡,其分子机制与调节Caspase-3和PARP的表达相关。     

麦麸结合态多酚对肝癌HepG-2细胞增殖及凋亡效应研究

目的 本文主要研究麦麸结合态多酚对肝癌HepG-2细胞的抑制效应。方法 小麦麸皮粉碎后,采用丙酮-碱消化法,获得麦麸结合态多酚物质,命名为：WBBP,用福林酚比色法测定该多酚的含量及提取得率;通过MTT法检测WBBP处理对肝癌HepG-2细胞增殖的抑制效应,倒置显微镜观察WBBP处理对HepG-2肝癌细胞形态学的影响;采用流式细胞仪检测WBBP处理对HepG-2肝癌细胞周期、凋亡情况以及线粒体膜电位的影响;利用caspases试剂盒检测WBBP作用下肝癌HepG-2细胞中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的酶活性变化。结果显示,不同浓度的WBBP通过诱导HepG-2肝癌细胞周期在S期阻滞,显著抑制了细胞增殖,且具有浓度依赖性;同时WBBP通过caspase依赖的线粒体凋亡路径诱导HepG-2肝癌细胞凋亡率以浓度依赖的方式增加。结论 麦麸结合态多酚WBBP能够通过显著抑制HepG-2肝癌细胞的增殖,并诱导细胞凋亡来发挥抗肝癌效应。     

NF-κB和Caspase-3在金雀异黄素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡中的作用研究

采用MTT法、形态学观察和琼脂糖凝胶电泳法检测了金雀异黄素(genistein,Gen)对体外培养的人胃癌SGC-7901细胞的生长和凋亡诱导作用,并采用免疫组化法和WesternBlot法检测Gen对人胃癌细胞NF-κB、Caspase-3蛋白的表达情况。结果显示:Gen可抑制肿瘤细胞生长,诱导细胞凋亡,抑制NF-κB蛋白表达,增加Caspase-3蛋白表达。结果提示:Gen抑制NF-κB蛋白表达、增加Caspase-3蛋白表达,可能是其诱导胃癌细胞凋亡的机制之一。     

莲房原花青素通过线粒体介导的内源性Caspase途径诱导HepG2细胞凋亡

研究莲房原花青素(LSPCs)诱导肝癌Hep G2细胞凋亡的机制。利用MTT法检测LSPCs对肝癌Hep G2细胞的生长抑制作用,Hochest 33258染色观察凋亡细胞的核形态,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡水平,彗星实验用来检测细胞DNA损伤,JC-1染色用来检测线粒体膜电位,Western blotting法检测细胞凋亡蛋白水平的表达。LSPCs作用细胞后,显著抑制Hep G2细胞的增殖;细胞凋亡征象明显,核染色体高度凝聚,细胞核碎裂,核固缩,染色质凝聚的细胞数从3.86%增至42.76%(p0.01);活细胞率急剧减少,而凋亡率从5.32%增至67.05%(p0.01);LSPCs诱发细胞产生DNA损伤,线粒体膜电位下降,导致Cytochromec、Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达量增加,Bax蛋白的表达量上调,Bcl-2蛋白的表达量下调,Bax/Bcl-2的比值上升。而凋亡抑制剂Z-VAD能够削弱LSPCs对Hep G2细胞增殖的抑制作用,显著下调细胞核聚缩,抑制线粒体损伤及Caspase相关蛋白的表达量,最终阻断LSPCs的致凋亡作用。由此得出结论,LSPCs可通过线粒体介导的内源性Caspase途径诱导人肝癌细胞凋亡。     

葡萄籽提取物原花青素诱导人食管癌细胞ECA109凋亡

目的：探讨葡萄籽提取物原花青素（grape seed proanthocyanidins extract,GSPE）诱导人食管癌细胞ECA109凋亡的效果及机制。方法：ECA109细胞用0、25、50、100、200、400 μg/mL GSPE干预24 h,噻唑蓝法检测并计算不同质量浓度GSPE对ECA109细胞的活性抑制情况,选取半数抑制浓度（50 μg/mL）作为干预剂量;流式细胞技术检测细胞凋亡情况;酶联免疫吸附检测法测定炎性因子及Bax/Bcl-2表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction,qPCR）、Western blot检测核因子κB（nuclear factor-kappa B,NF-κB）通路和凋亡相关蛋白Caspase-3的表达情况。结果：不同质量浓度GSPE作用24 h均可抑制ECA109细胞的增殖,细胞凋亡率由54.44%增加到82.80%;酶联免疫吸附检测结果显示,相比于空白对照组,GSPE和NF-κB抑制剂BAY11-7082可显著抑制细胞内炎性因子前列腺素E2（prostaglandin E2,PGE2）的产生以及C型反应蛋白（C reactive protein,CRP）的分泌（P＜0.05）;qPCR和Western blot结果表明GSPE和BAY11-7082处理使Caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量显著升高（P＜0.05）,NF-κB信号通路中IκB、p65、p50 mRNA表达量显著降低（P＜0.05）,p-IκB、p65、p50相对表达量显著下降（P＜0.05）。结论：GSPE可通过抑制PGE2、CRP的产生诱导ECA109细胞凋亡,其机制可能与抑制NF-κB通路、活化Bax有关。     

鱼头多糖对K562细胞增殖抑制作用的初步研究

主要研究鱼头多糖对K562细胞的抑制作用。通过MTT法检测鱼头多糖对K562细胞的增殖抑制率,HE染色法观察K562细胞形态学的变化,流式细胞仪检测K562细胞的凋亡情况。结果表明,MTT法测定在药物浓度≤200μg/m L时,鱼头多糖对K562细胞增殖有明显抑制作用,其抑制率与时间、浓度呈正相关。HE染色显示多糖作用于K562细胞后出现了明显的凋亡和坏死同时发生的现象,且表现出时间依赖性。流式细胞仪检测多糖对K562细胞周期分布有显著影响,且凋亡现象明显,并伴有明显的坏死现象。在多糖作用72 h后,凋亡细胞的比例高达细胞21.28%。因此,提示鱼头多糖对K562细胞的增殖抑制作用明显。     

红毛藻多糖对H2O2诱导的Caco-2细胞氧化损伤的保护作用

目的：研究红毛藻多糖（Bangia fusco-purpurea polysaccharide,BFP）对H2O2诱导的人结肠腺癌（Caco-2）细胞氧化应激损伤的保护作用。方法：构建过氧化氢（H2O2）诱导的Caco-2细胞氧化损伤模型,通过形态学观察和测定细胞裂解液中的抗氧化物水平及相关酶活力,评价BFP对Caco-2细胞氧化损伤的保护作用。结果：BFP可明显提高H2O2诱导氧化损伤的Caco-2细胞活力,降低细胞内活性氧生成水平,提高细胞内超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活力以及还原型谷胱甘肽水平,减少丙二醛生成,并通过抑制Caspase-3和Caspase-9活性来改善氧化应激损伤引起的细胞凋亡。结论：BFP对H2O2诱导氧化应激损伤的Caco-2细胞具有保护作用,可通过增强细胞内源性抗氧化酶活力、提高非酶类抗氧化物水平和抑制细胞凋亡明显缓解H2O2诱导的Caco-2细胞氧化应激损伤。     

虾青素保护PC-3细胞免受H2O2氧化应激的作用机制

目的：研究虾青素对过氧化氢诱导PC-3细胞氧化应激的保护作用,探索其信号通路机制。方法：建立H2O2 氧化应激模型,采用不同浓度虾青素预处理PC-3细胞,检测细胞存活率、细胞凋亡、活性氧（reactive oxygen species, ROS）水平、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2-associated X protein,Bax）、 活化半胱天冬酶-3表达及丝裂原活化蛋白激酶-核因子E2相关基因2-血红素氧合酶1（mitogen-activated protein kinases nuclear factor erythroid-2-related factor 2-heme oxygenase 1,MAPK-Nrf2-HO-1）通路的变化。结果：20 μmol/L虾青 素预处理显著提高H2O2所降低的细胞存活率、降低ROS水平（P＜0.05）,同时通过抑制Bcl-2/Bax比率下降及半胱 天冬酶-3的激活,从而使细胞凋亡率从51.4%降低至14.8%,进一步研究发现虾青素能够促进Nrf2磷酸化,并促进 HO-1的表达,呈现浓度依赖性。通过细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases,ERK）抑制剂 （U0126）和Akt抑制剂（LY294002）预处理,发现当ERK和磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B（phosphoinositide 3-kinase/ protein kinase B,PI3K/Akt）通路被抑制后,Nrf2表达降低,表明HO-1上调受上游ERK和胞内PI3K/Akt通路的调 控。在对MAPK途径对细胞毒性影响的研究中,ERK通路被抑制后细胞存活率显著下降,而c-Jun氨基末端激酶 （c-Jun N-terminal kinase,JNK）和p38 MAPK通路被抑制后并不影响其保护作用,表明虾青素抑制细胞存活率下降 是通过MAPK途径中的ERK通路,而不是JNK和p38通路。结论：虾青素预处理PC-3细胞可以减轻H2O2诱导的氧化 应激,维持细胞生理活性。     

草苁蓉多糖对氧化应激所致血管内皮细胞凋亡的抑制作用

目的：研究草苁蓉多糖（Boschniakia rossica polysaccharides,BRPS）对氧化应激所致血管内皮细胞凋亡 的抑制作用。方法：利用叔丁基过氧化氢（tert-butyl hydroperoxide,tBHP）损伤人脐静脉血管内皮细胞制备细胞 氧化应激损伤模型,采用四甲基偶氮唑盐（methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT）比色法检测细胞存 活率,分光光度法检测细胞内丙二醛（malondialdelyde,MDA）水平、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）活力和还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）水平。采用二氯荧光乙酰乙酸盐（dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA）法检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平,采用JC-1荧光染色法观察 细胞线粒体跨膜电位（mitochondrial membrane potentials,ΔΨm）水平,采用Hoechst染色和原位末端标记（TdTmediated dUTP nick end labeling,TUNEL）法观察细胞凋亡情况。Western blot法检测细胞Bax、Bcl-2、细胞色素c （cytochrome c,Cyt c）、Bid片段（truncated Bid,tBid）、Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白的表达情况。 结果：BRPS提高tBHP损伤的内皮细胞存活率,降低细胞ROS水平,减少MDA生成,提高SOD活性与GSH水 平,升高ΔΨm水平,抑制细胞凋亡。Western blot结果显示,BRPS降低胞浆Cyt c、线粒体tBid水平,减小细胞 Bax/Bcl-2比值,抑制Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的活化。结论：BRPS对氧化应激所致血管内皮细胞凋亡具有 抑制作用,机制可能与线粒体凋亡途径和死亡受体途径均有关。     

姜黄素抑制Cu~(2+)诱导的转APP_(695)基因SH-SY5Y细胞氧化损伤和凋亡作用

目的:研究Cu~(2+)诱导的转β-淀粉样前体蛋白(amyloid-β precursor protein,APP)基因SH-SY5Y(SHSY5Y-APP_(695))细胞氧化损伤、凋亡及姜黄素的抑制作用。方法:在姜黄素预保护和无姜黄素预保护条件下,50 μmol/L Cu~(2+)处理细胞24 h,测定细胞存活率、胞外乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平、胞内活性氧(reactive oxygen,ROS)水平、线粒体膜电位、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3、caspase-8和caspase-9活力,蛋白免疫印迹法测定核转录NF-E2相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)Ser40位点磷酸化(p Ser40-Nrf2)水平以及血红素加氧酶(heme oxygenase,HO)-1蛋白表达水平。结果:与空白对照相比,Cu~(2+)损伤组细胞存活率降低,胞内ROS水平和胞外LDH活性升高,线粒体膜电位下降,caspase-9和caspase-3活性明显升高,p Ser40-Nrf2和HO-1含量增加,而姜黄素保护组细胞存活率升高,胞内ROS水平和LDH释放水平降低,线粒体膜电位恢复升高,caspase-9和caspase-3活性明显降低,p Ser40-Nrf2和HO-1表达量减少。结论:姜黄素在一定程度上减弱了Cu~(2+)诱导的氧化损伤和细胞凋亡作用。     

山楂原花青素对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨山楂原花青素提取物、表儿茶素和原花青素B2对人肝癌SMMC-7721细胞增殖及凋亡的影响。方法：体外培养SMMC-7721细胞,噻唑蓝法检测不同质量浓度山楂原花青素对细胞增殖的影响;4’,6-二脒基-2-苯基吲哚染色法观察细胞凋亡,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白的表达;检测每组细胞中过氧化氢酶（catalase,CAT）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）、Na＋K＋-ATP酶活力和丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量。结果：山楂原花青素提取物、表儿茶素和原花青素B2呈时间和质量浓度依赖性地显著抑制SMMC-7721细胞的增殖（P＜0.05）,促进细胞凋亡;与对照组相比,SMMC-7721细胞中SOD、CAT、GSH-Px、Na＋K＋-ATP酶活力降低,MDA含量升高;细胞凋亡相关蛋白半胱天冬酶-8、半胱天冬酶-3、Bcl-2相关X蛋白表达量和多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶片段化增加,Bcl-2表达量降低。结论：山楂原花青素可通过影响抗氧化酶活力和细胞凋亡相关蛋白来抑制SMMC-7721细胞增殖,促进细胞凋亡。     

N-乙酰-半胱氨酸干预壬基酚对小鼠Sertoli TM4细胞的损伤作用

目的：研究N-乙酰-半胱氨酸（N-acetyl-cysteine,NAC）对壬基酚（nonylphenol,NP）诱导的小鼠Sertoli TM4细胞氧化损伤及凋亡的干预作用。方法：以Sertoli TM4细胞为对象,实验分为对照组、NP组（20 μmol/L NP处理）、NP＋NAC组（5 mmol/L NAC预处理4 h后20 μmol/L NP处理24 h）、NAC组（5 mmol/L NAC处理4 h后换正常培养基培养）,采用噻唑蓝法检测细胞存活率;流式细胞术检测活性氧（reactive oxygen species,ROS）含量和细胞凋亡情况;试剂盒法检测超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活力、过氧化氢酶（catalase,CAT）活力、丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量及Caspase-3相对活力;Western blot法检测细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）和c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）磷酸化情况。结果：与对照组相比,20 μmol/L NP处理24 h能显著降低细胞存活率（P＜0.05）,同时诱导细胞内ROS生成,下调SOD和CAT活力,增加MDA含量,诱导Sertoli TM4细胞凋亡,增加Caspase-3相对活力,促进ERK、JNK蛋白磷酸化激活;与NP组相比,NAC预处理能够明显削弱NP引起的细胞内ROS生成,使SOD、CAT活力下调,MDA含量增加,Sertoli TM4细胞凋亡,Caspase-3相对活力增强,激活ERK、JNK信号通路。结论：NAC具有干预NP对小鼠Sertoli TM4细胞损伤的作用,这可能与NAC抑制NP诱导的细胞氧化应激和凋亡以及阻断ERK、JNK信号通路的激活相关。     

香叶醇联合冬凌草甲素对MCF-7细胞协同抗癌作用及其机理

目的:探讨香叶醇(geraniol,GOH)联合冬凌草甲素(oridonin,ORI)对人乳腺癌MCF-7细胞活力、细胞凋亡、细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量、线粒体膜电位及细胞周期的影响.方法:细胞分为对照组、GOH组(102.81 μg/mL)、ORI组(4.32 μg/m...     

Tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand expression and activity in hen granulosa cells

Tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand (TRAIL) represents one of several cytokine members of the tumor necrosis factor superfamily reported to initiate apoptosis in a wide range of transformed, but not most normal, cell types. The present studies were conducted to evaluate the potential for TRAIL to promote apoptotic cell death in differentiated granulosa cells collected from hen preovulatory follicles. While mRNA encoding critical components (including TRAIL) required for a functional extrinsic cell death pathway are expressed in granulosa cells, TRAIL treatment by itself fails to induce either caspase-3 activity or a decrease in cell viability. On the other hand, preculture of cells with the conventional chemotherapeutic, cisplatin, or the 20S proteosome inhibitor, Z-LLF-CHO, sensitizes granulosa cells to TRAIL as evidenced by enhanced caspase-3 activity after 4 h of culture and loss of cell viability after 24 h when compared with either cisplatin or Z-LLF-CHO treatment alone. Moreover, the sensitizing effect of Z-LLF-CHO on TRAIL-induced loss of cell viability is prevented by the selective caspase-8 inhibitor, Z-IETD-FMK. Interestingly, TRAIL mRNA expression is elevated both in prehierarchal follicles undergoing spontaneous atresia and in prehierarchal follicles induced to undergo atresia for 6 h in vitro. In summary, the data demonstrate the presence of a functional TRAIL signaling pathway in hen granulosa cells, and are consistent with the possibility that TRAIL signaling may directly or indirectly participate in the process of follicle atresia in vivo.