适合于银柴胡饮片的DNA条形码分析的DNA提取方法的研究

目的:建立适合银柴胡中药饮片的DNA条形码分析的DNA提取方法。方法:本实验利用试剂盒提取法(对照)、改良高盐低pH法、改良CTAB法、改良SDS法,对银柴胡饮片样本进行总DNA提取,并对于提取结果进行紫外检测、琼脂糖凝胶电泳检测,并选取最优结果进行PCR扩增检测。结果:三种DNA提取的改良方法中,改良CTAB法效果最好,提取的DNA纯度好、含量多。结论:改良CTAB法提取获得的银柴胡DNA,经PCR扩增结果可满足后续DNA条形码鉴定。     

浓香型大曲中微生物总DNA的PCR优化

利用SDS-酶法、试剂盒法提取大曲总DNA,对粗提DNA梯度稀释稀释,同时按浓度梯度加入BSA进行PCR扩增。SDS-酶法提取总DNA的量是试剂盒法的300倍;对粗提DNA稀释50倍同时添加BSA浓度为0.6ng/μL的PCR扩增效果最佳。利用SDS-酶法能够最大量的提取曲药中总DNA,对总DNA进行稀释同时加入BSA能够有效的进行PCR扩增。     

骨胶原蛋白肽粉中DNA的提取及猪、羊源性成分的检测

目的 优化深加工骨胶原蛋白肽粉中DNA的提取方法, 鉴定检测其动物源性成分。方法 采用2种试剂盒法, 并对试剂盒部分步骤进行适度修改后提取骨胶原蛋白肽粉中的基因组DNA, 分别用猪、羊引物和探针对提取的DNA片段进行实时荧光PCR扩增检测。结果 只有DNeasy Blood & Tissue Kit提取试剂盒法提取的DNA纯度较好, A260/A280比值为1.73, 浓度为8.2 ng/μL, 并且经18S rDNA片段的PCR扩增结果表明样品中含有哺乳动物DNA, 且DNA中不含抑制PCR反应物质。检测结果表明该骨胶原蛋白肽粉中含有猪源性成分。 结论 采用试剂盒法提取深加工骨胶原蛋白肽粉中DNA时, 需对部分步骤做修改后才可进行。     

猪肉类罐头食品中总DNA提取方法的比较

以7种猪肉类罐头食品为研究对象,比较了EE101-02 DNA提取试剂盒、SDS法、CTAB法和异硫氰酸胍法对猪肉罐头食品DNA的提取效果。以4种方法提取的总DNA为模板,根据猪线粒体基因组(mt DNA)16s r RNA基因和Cyt b基因,利用3对通用引物分别扩增片段大小为244 bp(16s r RNA)、376 bp(Cyt b)、472 bp(Cyt b)的目的片段,以评价不同方法提取的总DNA的效果。结果表明:不同提取方法提取效果差异明显——异硫氰酸胍法提取效果最好,其提取的7种罐头的总DNA均可利用16s r RNA和Cyt b通用引物分别有效扩增出244bp、376 bp目的 DNA片段,CTAB法和SDS法次之,EE101-02 DNA提取试剂盒提取效果最差。另外绝大多数猪肉类罐头样品中未能扩增获得472 bp大小的目的片段,表明猪肉类罐头产品中DNA降解严重。     

奶粉中DNA提取方法的比较

为选择适合奶粉DNA的提取方法,文章以市售奶粉为材料,采用异硫氰胍提取法、滤膜法和磁珠法3种方法提取奶粉DNA。再利用DNA浓度测试、琼脂糖凝胶电泳及PCR扩增3种手段比较DNA提取的效果。结果显示:磁珠法提取的奶粉中DNA质量较好,适合用于提取奶粉DNA,而异硫氰胍法的杂质含量高、重现度低,滤膜法的提取量少。但3种方法提取的基因组DNA均达到PCR实验的要求。     

氨基化二氧化硅颗粒应用于大豆油DNA提取研究

建立了以氨基化二氧化硅为载体提取大豆油DNA并进行转基因成分检测的方法。结果表明：利用氨基化二氧化硅法富集提取大豆毛油中的DNA质量浓度高于国标法;以氨基化二氧化硅法提取的大豆毛油DNA为模板成功扩增出了大豆内源基因、外源基因片段和转基因调控元件,而精炼油DNA未扩增出。氨基化二氧化硅法只适用于大豆毛油DNA的提取,而不适用于精炼油。     

不同热处理方法对鲤鱼DNA的影响及不同DNA提取方法的比较

目的研究不同加热方法处理后鲤鱼基因组DNA长度和含量的变化,并对4种DNA提取方法进行比较。方法用电磁炉和微波炉将鲤鱼背部肌肉加热煮沸1、2、3 h取出,再分别用酚氯仿法、Wizard试剂盒法、磁珠法和离心柱法提取处理前后鲤鱼基因组DNA,利用琼脂糖凝胶电泳对处理前后的总DNA长度进行比较,再用实时荧光定量PCR法检测所得DNA样品中内参基因β-actin含量的变化。结果琼脂糖凝胶电泳结果显示,处理后DNA片段明显降解。生鱼肉提取β-actin的量为1 070 213.39拷贝/μl,电磁炉处理1、2、3 h的浓度分别为143 309.6、441 350.43和256 994.16拷贝/μl,微波炉处理1、2、3 h的浓度分别为269 121.17、267 371.16和134 649.97拷贝/μl。酚氯仿法、Wizard试剂盒法、离心柱法和磁珠法提取的平均DNA浓度分别为718 944.93、737 945.64、26 751.22和2 934.06拷贝/μl。结论加热煮沸导致DNA降解,因此加工食品中DNA的检测应当选择较短的目标片段。4种DNA提取方法比较,Wizard试剂盒法和酚氯仿法提取的D...     

黄酒麦曲微生物总DNA提取方法比较

为得到高质量提取麦曲总DNA的方法,采用SDS法、氯化苄法、CTAB法、超声波法、Soil DNA kit法、SDS高盐法及SDS-CTAB法对黄酒麦曲中总DNA的提取效果进行了比较,通过凝胶电泳、PCR、紫外分光光度计及Real-time PCR对不同方法提取产物进行分析得出7种方法中SDS-CTAB法对于提取麦曲总DNA效果最好,蛋白、多糖及小分子等污染较少,DNA提取的质量浓度达到149.6 ng/μL,相对于SDS法,细菌和真菌模板数分别达到其2.343倍和1.753倍。     

基于简单加权分析的花椒果皮DNA快速提取方法比较研究

目的 开发和探究适用于花椒基因组DNA的快速提取方法。方法 选取8种不同品种的花椒,分别利用3种不同的DNA提取方法,包括一管式植物DNA抽提试剂盒、基于载体的纤维素滤纸提取法和无菌拭子浸入法,进行花椒果皮基因组DNA快速提取,比较不同DNA提取方法在花椒果皮基因组提取中的效果。其中纤维素滤纸提取法和无菌拭子浸入法均通过载体转移进行DNA的快速提取,基于十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyl trimethyl ammonium bromide, CTAB)和十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate, SDS)两种不同的裂解液,在3 min以内即可提取DNA并得到聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增体系。通过简单加权(simple additive weighting, SAW)分析,基于PCR扩增能力、提取时间、提取成本、试剂安全性、程序简单性等方面进行综合评分。结果 所选的快速提取试剂盒不适用于花椒果皮这类含次生代谢物较多的实验材料,而无菌拭子、纤维素滤纸两种载体提取得到的花椒果皮DNA均可以进行后续的PCR操作,...     

6 种食用香辛料基因组DNA提取方法比较

采用TIANGEN植物基因组DNA提取试剂盒法、TIANGEN DNAsecure新型植物基因组DNA提取试剂盒法、QIAGEN DNeasy plant kit法、Nucleospin? Food kit法、改良十六烷基三甲基溴化铵（cetyltrimethylammonium bromide,CTAB）法和十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate,SDS）-CTAB法6 种方法对来自植物根、茎、叶、花蕾、果实及种子的19 种常见食用香辛料的DNA进行提取,并比较各方法的提取效果。结果表明,QIAGEN DNeasy plant kit法和TIANGEN植物基因组DNA提取试剂盒法所得DNA的聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增成功率最高,但QIAGEN DNeasy plant kit法提取的DNA质量浓度低,不利于后续研究。本研究建议将TIANGEN植物基因组DNA提取试剂盒法作为食用香辛料基因组DNA提取的优选方法,并用该方法进行市售香辛料粉的DNA提取。结果显示,所有市售香辛料粉的DNA质量浓度、纯度及PCR扩增效率均符合实验要求。表明TIANGEN植物基因组DNA提取试剂盒法适合食用香辛料DNA提取,而对于皮类及坚硬的食用香辛料应增加样品量及裂解时间。     

麦芽糊精基因组DNA不同提取方法的比较

采用不同方法对麦芽糊精基因组DNA进行提取,从中选取满足麦芽糊精材料进行分子标记检测的最好的DNA提取方法。以市售麦芽糊精为材料,分别采用CTAB、SDS和异硫氰酸胍3种方法提取基因组DNA,比较不同方法的提取效果。光密度检测结果显示,异硫氰酸胍法的提取量和纯度均优于SDS法和CTAB法;琼脂糖凝胶电泳检测结果显示异硫氰酸胍法提取的基因组DNA谱带清晰、重复性好,SDS法和CTAB法提取的基因DNA观察不到谱带;3种方法提取的麦芽糊精基因组DNA都能够满足PCR分析的需要。结果表明,3种方法均能有效地从麦芽糊精中获得DNA,然而异硫氰酸胍法优于SDS法和CTAB法。     

豆奶粉基因组DNA不同提取方法的比较

以三种市售不同品牌的豆奶粉为材料,利用CTAB法和SDS法提取豆奶粉基因组DNA,探索从豆奶粉中获得高质量DNA的提取方法。结果表明:CTAB法提取的三种豆奶粉DNA的OD260/OD280值在2.01~2.05,因组DNA纯度较高,符合要求。琼脂糖凝胶电泳检测结果显示利用CTAB法获得的三种豆奶粉基因组DNA的电泳条带均清晰明亮,而且比SDS法获得的电泳条带更明亮,无弥散拖尾。因此,CTAB法是提取豆奶粉基因组DNA的更好更有效的办法,是理想的提取豆奶粉基因组DNA的一种方法,为进一步开展豆奶粉食物掺假、转基因成分测定奠定基础。     

PCR法检测大豆加工食品中的转基因成分

通过分子生物学手段,以聚合酶链式反应(PCR)技术为基础,建立了检测大豆加工食品中转基因成分的方法。实验分别采用CTAB法和试剂盒(Kit)法对大豆锅巴、豆浆、豆奶粉、豆腐、豆腐丝等五种大豆加工食品中的DNA进行了提取,用内标基因Lectin对此两种方法的提取效果进行了比较,并以提取的DNA为模板,利用不同的引物分别对目标基因35S和NOS进行了PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳检测。结果表明:Kit法的DNA提取效果优于改良CTAB法,上述五种大豆加工食品中均检测出35S启动子和NOS终止子,且均含有转基因成分。     

玉米包衣对种子鉴定过程中PCR扩增的影响

目的探讨玉米包衣内含有的杀虫剂、杀菌剂是否影响种子检测过程中的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增效果及检测结果。方法利用紫外吸收法、凝胶电泳法以及PCR.扩增法对提取的包衣玉米DNA浓度和纯度进行测定,考察PCR扩增效果并对检测结果进行判定。结果不同清洗时间所提取的包衣玉米DNA与未包衣种子提取的DNA质量相比几乎没有差异,浓度和纯度均很好,DNA溶液OD_(260)/OD_(280)比值均在1.7~2.0之间,其DNA质量符合国家种子检测标准要求。玉米包衣对PCR扩增效果及检测结果没有影响。结论包衣玉米样品的种子进行检测时可不作清洗而直接进行DNA提取和PCR扩增,仍可得到准确可靠的结果,从而节约人力和物力并缩短检测时间。     

普洱茶发酵过程中微生物总DNA提取方法的比较

为了快速提取普洱茶发酵过程中微生物总DNA,便于分析微生物群落的多样性及演替情况,对比研究了总DNA提取的四种方法-酶法、试剂盒法、超声波法和变性剂法,以16S rRNA区域通用引物(27F和1492R)和18S rRNA区域通用引物(NS1和NS8)对四种方法提取的总DNA分别进行扩增,根据总DNA提取的大小、产量、纯度和PCR扩增产物进行评估。综合各项指标来看,总DNA提取方法以变性剂法为优,其次是试剂盒法、超声波法和酶法。     

石斛基因组DNA提取方法比较研究

目的：比较3种基因组DNA提取试剂盒对提取富含多糖多酚类物质的铁皮石斛和霍山石斛鲜叶及冻叶的提取效果。方法：对提取的DNA进行纯度及产率检测、电泳质量分析及ITS2 PCR扩增效率检测。结果：市售基于蛋白酶K消化法的试剂盒不适用于石斛DNA提取；基于改良CTAB法的试剂盒更适用于需要较高DNA模板量的石斛鲜叶的DNA提取；基于改良SDS法的试剂盒更适用于石斛冻叶的DNA提取，该法提取的鲜叶DNA完整性最佳，更适用于对DNA完整度要求较高的DNA大片段的分析研究。结论：基于改良CTAB法和改良SDS法的试剂盒提取的石斛鲜叶及冻叶的基因组DNA均适用于常规分子检测。     

苹果汁中DNA提取方法的比较及RAPD扩增研究

目的获得一种提取苹果汁饮料中高质量DNA的高效方法.方法以不同加工工制备的澄清苹果汁和果肉型苹果汁为试材,采用简易法、试剂盒法和改良试剂盒法提取苹果汁DNA,分别对所提取DNA的浓度、纯度及DNA扩增效率进行了比较.结果3种方法提取的澄清苹果汁DNA经PCR扩增后的条带均比果肉型苹果汁的清晰,其中,改良试剂盒法提取的澄清苹果汁DNA OD260/OD280的比值均在1.8左右,纯度最好.可用于RAPD扩增.结论试剂盒法和改良试剂盒法均适用于苹果汁饮料DNA的提取.其中试剂盒法对果肉型果汁的扩增效率较好,该方法为采用分子生物技术对果汁进行真伪鉴别提供技术参考.     

传统发酵牦牛酸乳宏基因组DNA三种提取方法比较研究

微生物区系复杂,自然环境中约95%是无法用常规的培养方法获得的,为了对未能培养或不可培养的微生物进行研究,本实验选用传统发酵牦牛酸乳,分别采用CTAB-SDS-冻融法、液氮研磨法、玻璃珠吸附法来提取宏基因组DNA,然后测得三种方法所提取的DNA的浓度、纯度和片段分布状况,并对总DNA进行16S r RNA基因片段PCR扩增。实验结果表明,本实验所采取的三种DNA提取方法均能提取到适于后续研究质量的DNA,但其中液氮研磨法同时具有提取的总DNA质量较好和步骤简单、成本低的优点,是提取牦牛酸乳宏基因组DNA最合适的方法。     

动物组织DNA提取前处理方法的优化研究

为优选拍击式均质法提取动物组织DNA的影响因素,开发一种简便快速的动物组织DNA提取前处理方法。研究采用L25(56)正交设计试验,以猪肉组织为对象,对拍击式均质法提取DNA前处理过程中不同的稀释倍数、拍击时间、拍击次数、取样量和消解时间进行工艺优化,按照优化后的前处理方法对8种生鲜肉或加工肉进行DNA提取,并进行定量PCR扩增验证。结果表明:当稀释倍数为1:2和1:3(g/g)、拍击时间为1 min、拍击次数为10次/s、取样量为100 mg,消解时间为1.5 h时,拍击式均质法提取的猪肉组织DNA质量最好,采用最佳优化条件对8种生鲜肉或加工肉提取的DNA与液氮研磨法提取的DNA定量PCR扩增,2种前处理方法提取DNA结果扩增曲线和Ct值均无差异,所开发的拍击式均质法提取动物组织DNA科学可行。     

晋西北酸粥发酵过程中微生物基因组DNA提取方法的比较

为了找到一种简单高效的晋西北酸粥发酵过程中微生物基因组DNA提取方法,本文采取对提取的微生物基因组DNA进行浓度测定的方法,比较了溶菌酶-SDS-蛋白酶K法、改良CTAB法和改良CTAB-溶菌酶法三种方法的提取效果。结果表明:溶菌酶-SDS-蛋白酶K法效果最好,可以获得质量较高的微生物基因组DNA,DNA浓度为1657.53 ng/μL;改良CTAB-溶菌酶法比溶菌酶-SDS-蛋白酶K法效果差,DNA浓度为1308.08 ng/μL;改良CTAB法对微生物基因组DNA的提取效果比溶菌酶-SDS-蛋白酶K法更差,DNA浓度为1098.36 ng/μL。以提取到的微生物基因组总DNA为模板,进行16S r DNA基因的PCR扩增,在回收产物中目的条带清晰,表明提取到的微生物基因组DNA含量高、结构完整。整体实验结果表明,溶菌酶-SDS-蛋白酶K法对于提取晋西北酸粥发酵过程中微生物基因组DNA效果最好。