LncRNA LINC00261下调miR-620表达调控鼻咽癌放射敏感性实验研究

目的 探讨LINC00261对鼻咽癌放射敏感性影响及其作用机制。方法 用qRT-PCR检测放射敏感、放射抵抗鼻咽癌组织中miR-620和LINC00261的相对表达水平。采用0、2、4、6、8 Gy ⁶⁰Coγ射线照射鼻咽癌细胞系6-10B、HNE-3细胞后,qRT-PCR法检测miR-620和LINC00261的相对表达水平。LINC00261过表达或沉默LINC00261表达、抑制miR-620表达后,使用X线照射4 Gy。克隆形成实验检测鼻咽癌细胞放射敏感性;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹检测Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9蛋白表达水平;荧光素酶报告实验检测LINC00261和miR-620的靶向关系;裸鼠移植瘤实验检测细胞成瘤变化。结果 相较于放射敏感组织,放射抵抗组织中LINC00261下调表达,miR-620上调表达(P<0.05)。6-10B、HNE-3细胞经不同剂量照射后LINC00261下调表达,miR-620上调表达(P<0.05)。过表达LINC00261和干扰miR-620表达后,6-10B、HNE-3细胞中Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9表达水平升高,细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞存活分数增大(P<0.05)。LINC00261靶向调控miR-620;过表达miR-620表达可减弱LINC00261过表达对鼻咽癌细胞的放射增敏及促凋亡作用。LINC00261过表达可降低裸鼠鼻咽癌成瘤重量(P<0.05)。结论 过表达LINC00261可提高鼻咽癌细胞的放射敏感性,其可能通过靶向调控miR-620发挥作用。     

MiR-129-5p靶向抑制高迁移率族蛋白B1表达增加甲状腺髓样细胞MZ-CRC-1放射敏感性的实验研究

目的 探讨miR-129-5p靶向抑制高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对甲状腺髓样细胞MZ-CRC-1放射敏感性的影响机制。方法 建立抗辐射细胞株MZ-CRC-1/R;克隆形成实验分析细胞存活分数;qRT-qPCR检测miR-129-5p在MZ-CRC-1和MZ-CRC-1/R细胞中的表达;噻唑蓝（MTT）法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光酶报告基因实验验证miR-129-5p与高迁移率族蛋白B1（HMGB1）之间的靶向关系;Western blot检测HMGB1和p-AKt的蛋白表达。结果 与MZ-CRC-1细胞相比,MZ-CRC-1/R细胞的细胞存活分数显著提高（t=3.038、4.330、4.885、4.568,P<0.05）;细胞活力增加（t=3.637、7.734、11.896、14.522,P<0.05）;与MZ-CRC-1细胞（1.00±0.06）相比,miR-129-5p在MZ-CRC-1/R细胞中的表达（0.26±0.03）显著降低（t=19.107,P<0.05）;与miR-NC-inhibitor组细胞相比,miR-129-5p-inhibitor组细胞的细胞活力显著增加（t=5.156、6.005、9.649,P<0.05）,细胞凋亡率降低（t=8.659,P<0.05）。与miR-NC组细胞相比,miR-129-5p mimic组细胞的细胞活力显著降低（t=3.118、5.034、6.005、7.488,P<0.05）,细胞凋亡率升高（t=6.362,P<0.05）;过表达miR-129-5p可抑制HMGB1及p-AKt信号通路的表达（t=9.325、10.614,P<0.05）;与miR-129-5p inhibitor组细胞相比,miR-129-5p inhibitor+si-HMGB1组细胞的细胞凋亡率显著升高（t=6.700,P<0.05）;与miR-129-5p mimic组细胞相比,miR-129-5p mimic+si-HMGB1组细胞的细胞凋亡率显著降低（t=7.073,P<0.05）。结论 miR-129-5p可靶向抑制HMGB1增加甲状腺髓样细胞MZ-CRC-1的放射敏感性。     

临床常用指标在辅助诊断COVID-19中的价值

目的探讨临床常用指标在新型冠状病毒肺炎(COVID-19)辅助诊断中的价值。方法选取COVID-19确诊患者53例,按病情严重程度分为普通型组(24例)和重型组(29例)。收集所有对象的临床资料(性别、年龄、基础疾病比例、就诊间隔时长),并检测血常规[白细胞(WBC)计数、淋巴细胞百分比(LYMPH%)、淋巴细胞绝对数(LYMPH#)、中性粒细胞百分比(NEUT%)、中性粒细胞绝对数(NEUT#)]、C反应蛋白(CRP)、乳酸脱氢酶(LDH)及淋巴细胞亚群[淋巴细胞总数、CD3⁺细胞计数、CD3⁺细胞百分比(CD3⁺%)、CD4⁺细胞计数、CD4⁺细胞百分比(CD4⁺%)、CD4⁺/CD8⁺比值]。采用非条件多因素Logistic多元回归分析评估重型COVID-19发生的危险因素。结果普通型组与重型组之间WBC计数、LYMPH%、NEUT%、NEUT#、LDH、CD4⁺%、CD4⁺/CD8⁺比值差异均有统计学意义(P<0.05),LYMPH#、淋巴细胞总数、CRP、CD3⁺%、CD3⁺细胞计数及CD4⁺细胞计数差异均无统计学意义(P>0.05)。非条件多因素Logistic回归分析结果显示,基础疾病、就诊间隔时长、淋巴细胞总数是重型COVID-19的危险因素[风险比(HR)分别为116.47、1.24、9.83,95%可信区间(CI)分别为4.83~2805.89、1.04~1.48、1.91~466.20]。结论WBC计数、NEUT#、NEUT%、LYMPH%、LDH、CD4⁺%、CD4⁺/CD8⁺比值在COVID-19的辅助诊断中有一定的价值。     

多发性骨髓瘤全凝集血型处理及输血实践

目的:对多发骨髓瘤全凝集病例进行血清学及分子生物学定型,并探讨其输血实践。方法:初检血型呈全凝集者,红细胞37℃生理盐水洗涤3遍,正定型检测仍有凝集时,56℃水浴箱热放散1 min,再次洗涤后做正定型;血浆用多人份O型洗涤红细胞4℃进行吸收4 h,离心取上清做反定型,结果不理想者复做一次;仍未能判读者取上清置37℃水浴30 min再次如上方式进行反定型检测。经上述处理结果仍然不理想时,进一步应用二硫苏糖醇(DTT)处理检测红细胞或患者红细胞。同时采用中和抑制试验测定患者唾液中和血型物质及PCR扩增1～7外显子测序佐证血型。结果:血型全部得以确认;唾液中和试验与基因定型结果与血清学结果一致;配血试验血红蛋白均有提升。结论:全凝集患者血型定型正确,输血效果良好。     

循环miR-143水平在宫颈癌患者同步放化疗后肿瘤残留的早期预测

目的 探讨血清miR-143水平结合MRI在预测宫颈癌同步放化疗(CCRT)早期反应的价值。方法 收集 85例经病理证实的宫颈癌患者,在CCRT前均行常规MRI、腔内非相干运动扩散加权成像(IVIM-DWI)和动态增强MRI (DCE-MRI),并收集患者的活检组织和血清样品。应用微阵列芯片分析活检组织中miRNA差异性表达。采用qRT-PCR分析血清样品中miR-143水平。根据术后MRI表现,将患者分为非残留肿瘤组和残留肿瘤组。对两组患者术前临床因素、MRI参数和miR-143进行单因素和多因素分析,绘制受试者工作曲线(ROC)曲线,估计治疗后残留肿瘤发生的最佳阈值和预测性能。结果 CCRT完成后1个月,无残留组 52例,残留组 33例。残留组肿瘤的国际妇产科联合会分期、表观扩散系数、D和V^e明显高于非残留组(P<0.05),K^trans明显低于非残留组(P<0.001)。miRNA阵列分析显示两组间有16个miRNAs表达差异(P<0.05),其中miR-143的升高在残留组患者中最为显著。与残留组相比,非残留组的血清miR-143表达显著下调(P=0.002)。与Siha细胞相比,SiHa-R细胞的miR-143表达明显上调(P<0.05)。多因素分析显示只有miR-143、D、K^trans和V^e是独立的预后因素。ROC曲线分析显示MRI-miR-143组合参数的曲线下面积最高(AUC=0.975),敏感性为84.8%,特异性为96.2%。结论 治疗前MRI参数与血清miR-143的结合进一步提高了CCRT后残留肿瘤的预测性能,有助于宫颈癌的个性化治疗。     

安罗替尼对胶质瘤放疗的增敏作用及其机制

目的观察安罗替尼对胶质瘤的放疗增敏作用并探讨其作用机制。方法(1)培养胶质瘤细胞人脑胶质母细胞瘤系(U87MG),对照组,置于6MV-X射线照射,安罗替尼组,将安罗替尼加入U87MG联合6MV-X射线照射,细胞克隆法绘制生长曲线,比较两组的放疗敏感性,蛋白质印迹法(Western blot)法检测小窝蛋白(Caveolin-1)蛋白及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)表达。(2)建立U87MG动物模型,随机数字表法分为4组,对照组,不处理;单放组,6MV-X射线照射,安罗替尼组,安罗替尼灌胃,联合组,安罗替尼灌胃联合6MV-X射线照射,记录瘤重,计算抑瘤率,检测凋亡表达,Caveolin-1蛋白表达。采用t检验和方差分析。结果细胞实验,对照组的细胞存活分数(sF2)、终斜率的倒数(Do)、准阈剂量(Dq)值分别为0.64、1.83 Gy、1.34 Gy;安罗替尼组的sF2、Do、Dq值为0.47、1.25 Gy、0.92 Gy;增敏比(SER)值为1.47,差异有统计学意义(t=2.066,P<0.05)。Western blot检测安罗替尼组Caveolin-1蛋白水平,丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化水平低于对照组。动物实验发现单放组、安罗替尼组及联合组小鼠肿瘤体积低于对照组,瘤重分别为(6391.89±114.06)、(3367.19±60.61)、(4763.02±71.65)、(2982.77±54.30)mg,差异有统计学意义(F=331.631,P<0.05)。流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡,单放组、安罗替尼组及联合组比高于对照组细胞凋亡率,凋亡率分别为(8.92±0.53)%、(26.75±1.19)%、(24.43±0.79)%、(17.64±0.65)%,差异有统计学意义(t=6.873,P<0.05)。免疫组织化学染色法检测单放组、安罗替尼组及联合组小鼠肿瘤Caveolin-1表达率低于对照组。结论体内外实验发现安罗替尼对胶质瘤有放疗增敏作用,Caveolin-1表达下降调控MAPP磷酸化通路改变可能是其作用机制之一。     

ABO基因c.2T>C突变致GTA翻译异常引起的A_xB表型一例及机制分析

目的:对1例ABO正反定型不一致患者的血标本进行鉴定,并探索其潜在的分子机制。方法:血清学标准方法鉴定ABO血型,并进行血浆总体A糖基转移酶(glucanotransferase,GTA)活性测定。对ABO基因7个外显子及其侧翼序列行PCR扩增、直接测序或克隆后测序分析。结果:本例血清学鉴定为A_xB亚型;血浆总体GTA活性明显下降(效价为±);ABO基因外显子1的第2位核苷酸存在TC错义突变。结论:ABO基因c.2TC突变导致翻译起始位点被跨膜结构域或茎区域中的Met替代,从而形成N端截短的GTA的表达,进而引起此例患者A_xB表型。