疏风宣肺方和解表清里方体外干预甲型流感病毒H1N1诱导炎性细胞因子分泌作用的研究

目的：研究疏风宣肺方和解表清里方对甲型流感病毒H1 N1感染的人肺腺癌上皮细胞（A549）中炎性细胞因子的影响。方法培养 A549,甲型流感病毒 H1N1感染 A549后,分为细胞对照组、H1V1感染组、奥司他韦对照组、疏风宣肺组及解表清里组。采用实时定量聚合酶链式反应（RT －PCR）和Western blotting 法检测各组细胞中炎症相关的白细胞介素（IL）1、肿瘤坏死因子α（TNF －α）、IL －6、IL －10、单核细胞趋化蛋白1（MCP －1）、调节活化正常 T 细胞表达和分泌的趋化因子（RANTES）的 mRNA 及蛋白表达的变化。结果基因芯片结果提示,与细胞对照组比较,H1N1感染组差异表达基因 Il1β、Thf、Ccl5、Il10、Il6、Ccl2明显上调。与 H1N1感染组比较,奥司他韦组、疏风宣肺组和解表清里组差异基因 Thf、Il1β、Ccl5、Il10、Il6、Ccl2表达显著下调。 RT －PCR 结果显示,与细胞对照组比较,H1N1感染组 IL －1、TNF －α、IL －6、IL－10、MCP －1、RANTES 的 mRNA 表达均显著升高（P ＜0．01）。与 H1N1感染组比较,疏风宣肺组 IL －1、TNF－α、IL －6、IL －10、MCP －1的 mRNA 表达均明显降低（P ＜0．01,P ＜0．05）,解表清里组 IL －1、TNF －α、IL －6、MCP －1的 mRNA 表达均明显降低（P ＜0．01,P ＜0．05）。 Western blotting 结果显示,H1N1感染组 IL －1、TNF －α、IL －6、IL －10、MCP －1、RANTES 蛋白表达较细胞对照组显著升高（P ＜0．05）;与 H1N1感染组比较,疏风宣肺组及解表清里组 IL －1、TNF －α、IL －6、IL －10、MCP －1、RANTES 蛋白表达均显著降低（P ＜0．05,P＜0．01）。结论疏风宣肺方和解表清里方均可抑制流感病毒感染后炎性细胞因子 IL －1、TNF －α、IL －6、MCP －1的 mRNA 过表达及蛋白分泌,减轻炎症反应,并恢复机体免疫功能的稳定和平衡。     

白首乌苷对二乙基亚硝胺诱发实验性肝癌大鼠细胞因子产生的影响

目的:观察白首乌苷对二乙基亚硝胺诱发实验性肝癌模型大鼠细胞因子产生功能的影响。方法:二乙基亚硝胺诱发大鼠发生实验性肝癌后,应用不同剂量的白首乌苷进行治疗,观察其产生白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)、白细胞介素-2(IL-2)和γ干扰素(interferon-gamma,IFN-γ)的能力。结果:白首乌苷剂量在25mg/kg体质量时可增加大鼠腹腔巨噬细胞产生IL-1的能力;剂量在50mg/kg体质量时可增强大鼠脾脏淋巴细胞产生IL-2和IFN-γ的能力。结论:白首乌苷对二乙基亚硝胺诱发实验性肝癌大鼠细胞因子的产生具有明显的改善作用。     

白首乌总苷与环磷酰胺合用对荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的 探讨白首乌总苷与环磷酰胺(CY)合用对荷瘤小鼠免疫功能的影响.方法 选择小鼠H22肝癌、S180腹水瘤制备肿瘤模型;按计划给药10 d后,称重计算胸腺指数, MTT比色法检查脾脏T、B淋巴细胞的增殖能力.结果 白首乌总苷单独使用无明显抗肿瘤作用,但可增加荷瘤小鼠的胸腺指数(和模型组比较P<0.05)及T、B淋巴细胞的增殖能力(和模型组比较P<0.001).白首乌总苷与CY联合使用,可明显增加CY治疗的荷H22小鼠胸腺指数(和CY组比较P<0.05)及T、B淋巴细胞增殖能力(和CY组比较P<0.001);可明显增加CY治疗的荷S180小鼠的体重及胸腺指数(和CY治疗组比较P<0.05), 明显增强其B淋巴细胞增殖能力(和CY组比较P<0.01).结论 通过本实验证明白首乌总苷与常用化疗药CY合用可改善化疗后小鼠细胞免疫和体液免疫的功能,对常用化疗药有一定减毒作用.     

毒热平注射液对FM1流感病毒感染小鼠的抗病毒作用研究

目的 观察毒热平注射液对FM1流感病毒致小鼠感染的抗病毒作用.方法 采用FM1流感病毒感染小鼠作为模型,测定其对感染小鼠死亡保护率及平均生活日的影响;测定其对感染小鼠体重及肺指数的影响;通过对肺脏标本进行HE染色,光镜观察感染小鼠肺部不同的病理改变;测定其对感染小鼠肺脏匀浆中的病毒滴度的影响,观察其直接杀伤病毒的能力.结果 在观察的时间内,毒热平注射液中剂量组与模型组比较,可显著延长其存活率(P<0.05);与模型组相比,毒热平可显著延长动物平均生存时间,中剂量组(P<0.05),大剂量组(P<0.05);显著降低小鼠的肺指数, 大剂量组(P<0.01),中剂量组(P<0.001);毒热平中、小剂量组体重较模型组有显著性差异(P<0.05);对肺脏进行大体及光镜下观察,均可发现模型组病变最为严重,毒热平不同剂量组对病毒感染小鼠的肺脏病变均有不同程度的改善作用;毒热平注射液中剂量组可明显降低肺匀浆中病毒滴度,与模型组比较(P<0.05).结论 毒热平注射液在体内可有效抑制病毒增殖,减轻受试动物肺部病变,降低肺指数,提高存活率,从而发挥抗病毒治疗的作用,为其临床应用提供了实验依据.     

黄芩苷对FM1肺炎小鼠肺损伤的作用机制研究

目的研究黄芩苷对甲型流感病毒性肺炎小鼠肺组织炎性损伤的作用机制。方法将96只ICR鼠随机分为正常对照组、模型组、利巴韦林组(100 mg.kg-1),黄芩苷组(1 500、750、375 mg.kg-1)[5],每组16只。用流感病毒亚甲型鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1)感染小鼠,制备小鼠流感病毒性肺炎模型,用不同剂量黄芩苷溶液灌胃治疗后,观察肺组织H-E染色切片病理变化,采用RT-PCR测定肺组织c-jun、c-fos mRNA表达,采用Western blot测定肺组织c-jun、磷酸化c-jun蛋白表达,应用ELISA检测肺匀浆炎性细胞因子TNF-α、IL-1β的含量。结果黄芩苷750、375 mg.kg-1剂量均能明显减轻肺组织炎性损伤;明显降低c-jun、c-fosmRNA的表达(P<0.05,P<0.01),明显降低c-jun、磷酸化c-jun蛋白表达(P<0.01);明显抑制TNF-α、IL-1β的分泌(P<0.01)。结论黄芩苷能够缓解甲型流感病毒诱导的炎性病理损伤,其可能通过抑制流感病毒感染引起的转录因子AP-1高表达而降低炎性细胞因子的分泌水平,从而发挥抗流感病毒感染的作用。     

芪归银方对耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药作用的影响

目的观察芪归银方体外逆转耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药的作用。方法采用血清药理学方法制备芪归银方含药血清;常规肉汤培养耐亚胺培南铜绿假单胞菌(1643菌株),分为含药血清组(M-H肉汤培养基0.8ml+含药血清0.2ml)、空白血清组(M-H肉汤培养基0.8ml+空白血清0.2ml)、阳性对照组(M-H肉汤培养基1ml),各组分别传代干预至第8代,用二倍稀释法测定细菌对亚胺培南的最小抑菌浓度(MIC),并比较抑菌环直径;耐亚胺培南铜绿假单胞菌冻融离心,收集酶粗提液,以头孢噻吩为底物,分为含药血清组(0.1mmol/L头孢噻吩95μl+3μl含药血清+2μl酶粗提液)和空白血清组(0.1mmol/L头孢噻吩95μl+3μl空白血清+2μl酶粗提液),测定耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶水解速率。结果含药血清组耐亚胺培南铜绿假单胞菌对亚胺培南的MIC为8μg/ml,空白血清组与阳性对照组均为16μg/ml;含药血清组抑菌环直径显著大于阳性对照组(P<0.05);含药血清组β-内酰胺酶水解速率显著低于空白血清组(P<0.05)。结论在芪归银方含药血清作用下,耐亚胺培南铜绿假单胞菌对亚胺培南的敏感性一定程度上得到了恢复,并且可以减慢β-内酰胺酶的水解速率,提示抑制β-内酰胺酶水解可能是芪归银方干预耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药的机制之一。     

三硝基苯磺酸诱导Balb/c小鼠结肠炎的实验研究

目的建立三硝基苯磺酸(TNBS)小鼠结肠炎模型。方法采用不同剂量的TNBS给♀Balb/c小鼠灌肠后制备结肠炎模型。观察动物的存活率、疾病活动度指数、结肠肉眼观和组织学变化,并检测结肠组织中髓过氧化物酶(MPO)的活力及小鼠脾T淋巴细胞增殖情况。结果随着TNBS剂量的提高,模型组小鼠存活率下降。存活的多数小鼠疾病活动度指数及MPO活力升高,病理切片显示结肠固有层及粘膜下层有大量淋巴细胞、单核巨噬细胞以及中性白细胞浸润,伴有肠腺扭曲、减少,杯状细胞丢失,隐窝脓肿,血管增生,肠壁增厚等病理改变,表明均建立了慢性结肠炎模型。结论每只小鼠给予1.5mgTNBS灌肠,动物死亡较少,并能够成功制备小鼠结肠炎模型。     

清热化痰法对慢性阻塞性肺疾病急性加重期痰热证大鼠气道黏液高分泌的影响

目的：研究循清热化痰法组方的蒌芩止嗽煎通过影响慢性阻塞性肺疾病急性加重（ AECOPD）大鼠气道黏液高分泌,提高抗生素在肺内的药物浓度的机制。方法50只Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、氨溴索组、二陈汤组、蒌芩止嗽煎组,每组各10只。用熏吸香烟加气管内注射内毒素及鼻腔滴入金黄色葡萄球菌,合并风热刺激的方法建立大鼠AECOPD痰热证模型。模型建立后,氨溴索组腹腔内注射氨溴索6 mg／（kg· d）,二陈汤组及蒌芩止咳煎组分别灌胃相应的中药3．33 g／（kg· d）,共7 d。 AB-PAS染色,镜下观察杯状细胞酸性黏蛋白的分泌;病理组织使用Image-Pro Plus 6．0软件计数每个视野下杯状细胞总数,计算杯状细胞占所有上皮细胞比例;ELISA法检测支气管灌洗液中肺组织黏蛋白（ MUC5AC）含量及血清中中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）含量。结果与模型组比较,各药物组杯状细胞分泌的MUC5AC及气道杯状上皮细胞计数均明显降低（P＜0．05）,且蒌芩止嗽煎组NE及MUC5AC降低更为明显（P＜0．05）,而其余各组无明显差异。结论蒌芩止嗽煎提高抗生素在肺组织内转运能力的机制,可能是通过减少黏蛋白和气道杯状上皮细胞数量,降低血清NE和灌洗液中MUC5AC,减少气道黏液分泌,减轻气道阻塞,促进抗生素在肺组织内的正相扩散作用而实现的。