基于网络药理学与分子对接探讨木瓜治疗膝骨关节炎的分子机制

目的:基于网络药理学探索木瓜治疗膝骨性关节炎的分子作用机制。方法:基于口服生物利用度(OB)及药物相似性(DL),通过中药系统药理学数据库(TCMSP)筛选木瓜的主要活性成分。运用GeneCards、OMIM数据库建立膝骨性关节炎靶标数据库。通过Cytoscape 3.7.1软件构建"活性成分-作用靶标-疾病"可视化交互网络;运用STRING数据库构建蛋白互作网络,分析相关蛋白互作关系;对核心靶点进行京都基因与基因百科全书(KEGG)通路及基因本体(GO)生物过程富集分析。通过Discovery Studio软件对药物活性成分与疾病靶点进行分子对接验证。结果:筛选得到木瓜活性成分3个,涉及44个作用靶点。网络分析结果表明,靶点主要涉及调节细胞代谢、凋亡等生物学过程,通过调节细胞凋亡、肿瘤坏死因子(TNF)、p53、核转录因子-κB(NF-κB)、糖基化终末产物(AGE)及其受体(RAGE)等信号通路来发挥治疗膝骨关节炎的作用。分子对接结果表明,木瓜活性成分与膝骨性关节炎的血管内皮生长因子A(VEGFA)、白细胞介素-6(IL-6)、雌激素受体1(ESR1)等靶点对接吻合度较好。结论:木瓜治疗膝骨性关节炎具有多系统、多成分、多靶点的特点;其可能的作用机制包括控制炎症,调控关节软骨代谢、生长和修复,促进细胞增殖、分化,抑制细胞凋亡和抵抗氧化应激等以达到控制疾病发生发展的目的;木瓜中槲皮素、白桦脂酸、表儿茶酸等活性成分可能是其治疗膝骨性关节炎的物质基础。     

膝痹宁对膝骨关节炎模型大鼠滑膜纤维化的影响

目的观察膝痹宁对膝骨关节炎(KOA)模型大鼠滑膜纤维化的影响。方法大鼠分为空白组、KOA组、膝痹宁组;KOA组、膝痹宁组造模。分别在膝痹宁灌胃治疗的第1、14、28、42、56天测量各组大鼠的膝关节横径;第56天处死大鼠提取滑膜组织,解剖学观察滑膜组织形态;天狼星红染色评估滑膜组织胶原沉积情况;WB和PCR检测纤维化标记物生长转化因子-β(TGF-β)、Ⅰ型胶原α1链(COL1α1)、金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)的蛋白和基因表达。结果膝痹宁用药14天,28天时,膝关节横径变化并不显著,但膝痹宁用药42天,56天时,膝关节横径则较KOA模型明显减小,差异具有统计学意义(P<0.05);用药56天后对大鼠进行膝关节解剖学观察,KOA大鼠滑膜组织较正常大鼠有一定程度的增厚、充血、欠规则;而上述表现在膝痹宁大鼠有所减轻;天狼星红染色显示膝痹宁用药大鼠滑膜组织胶原沉积较少;纤维化标记指标物TGF-β、COL1α1、TIMP1的基因和蛋白表达在膝痹宁组均较KOA组降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论膝痹宁对能有效减轻KOA滑膜纤维化,以“温经活血”立法的中药复方对组织纤维化具有良性干预效应。     

衰老表型肝细胞外泌体对脂多糖致炎软骨细胞的影响及白芍的干预效应

目的  研究衰老表型的肝细胞外泌体对脂多糖(LPS)刺激软骨细胞的影响及白芍的干预效应。方法  提取小鼠肝原代细胞,CCK-8法筛选白芍水煎液干预肝细胞的最佳浓度。随后,肝细胞随机分为空白组、衰老组和白芍组,0.3 mmol·L-1过氧化氢诱导肝细胞衰老,检测肝细胞p16、p21、p53的基因和蛋白表达,观察肝细胞衰老及白芍的干预效应。分别提取各组肝细胞上清中的外泌体,通过电镜、粒径分析、四旋蛋白CD9、CD63、CD81鉴定外泌体。培养小鼠软骨细胞,LPS刺激以模拟KOA炎症环境,检测细胞上清液中TNF-α和IL-1β含量以验证造模成功。PHK67染色标记肝细胞外泌体并观察软骨细胞的摄入情况。将收集的各组肝细胞外泌体用于干预LPS致炎软骨细胞,检测软骨细胞基质降解合成标记物MMP3、MMP13、SOX9、ADAMTS5的基因和蛋白表达水平。结果  经CCK-8法筛选,100 μg·mL-1为白芍水煎液干预肝细胞的最佳浓度。过氧化氢干预后,衰老组中细胞衰老标记物p16、p21、p53的基因和蛋白表达均高于正常组(P < 0.05),而在白芍组则较衰老组降低(P < 0.05)。各组肝细胞所收集外泌体均呈现双层膜结构,形态大小无差异,粒径富集均满足40~120 nm区间,代表性粒径富集于116.8 nm,丰度98%,外泌体标记物四旋蛋白CD9、CD63、CD81均为阳性表达。软骨细胞上清液中,促炎因子TNF-α、IL-1β的含量均在LPS刺激后较刺激前升高(P < 0.01),PHK67染色试剂确认软骨细胞对各组肝细胞外泌体的摄入。衰老组肝细胞外泌体的干预下,软骨细胞基质降解合成标记物MMP3、MMP13、SOX9、ADAMTS5的基因和蛋白表达水平均较空白组肝细胞外泌体干预升高(P < 0.05),而白芍组肝细胞外泌体干预则较衰老组肝细胞外泌体干预降低(P < 0.05)。结论  衰老表型肝细胞外泌体可加剧LPS致炎软骨细胞的退变进程,白芍水煎剂对此环节存在良性干预。      

穴位贴敷疗法治疗膝骨关节炎疗效Meta分析

目的评价穴位贴敷疗法治疗膝骨关节炎的疗效。方法检索中国知网、维普数据库、万方数据库、PubMed和Embase中穴位贴敷疗法治疗膝骨关节炎的相关文献。试验组采用穴位贴敷疗法或联合其他疗法,对照组采用西医治疗的随机对照试验。采用RevMan5.3软件进行Meta分析。结果共纳入11个随机对照试验,涉及1 102位患者。穴位贴敷或联合其他疗法治疗膝骨关节炎疗效优于非甾体类抗炎药,差异具有统计学意义[OR=3.45,95%CI(1.52,7.83),P=0.001],而与扶他林乳胶剂、痛点封闭治疗疗效相当,在改善VAS评分[SMD=1.63,95%CI(0.38,2.89),P=0.01]和Lysholm膝关节评分[SMD=2.62,95%CI(1.30,3.95),P=0.0001]等方面优于对照组,差异具有统计学意义,而在改善WOMAC评分方面与对照组相当,差异无统计学意义[SMD=-0.65,95%CI(-1.73,0.43),P=0.24]。结论穴位贴敷或联合其它非西医疗法治疗膝骨关节炎是有效的,值得临床推广。     

基于HMGB1探讨“易层”贴敷对KOA大鼠滑膜纤维化的影响

目的 基于HMGB1研究“易层”贴敷对膝骨关节炎（KOA）大鼠滑膜纤维化的影响。方法 30只SPF级SD大鼠,随机均分为空白对照组、模型组及易层组。KOA模型通过碘乙酸钠构建,造模成功后,易层组外敷“易层”贴敷28 d。末次给药后腹主动脉采血并提取各组滑膜组织,HE染色观察滑膜炎症;ELISA检测血清中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α,抑炎因子IL-4、IL-10、TGF-β含量;Western blot和qPCR检测滑膜HMGB1及α-SMA、TIMP1、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白和基因表达量。结果 HE染色显示易层组炎性细胞浸润较模型组显著减少,排列较为规则;模型组较空白对照组IL-1β、IL-6、TNF-α含量明显升高（P<0.05）,易层组较模型组IL-1β、TNF-α含量明显降低（P<0.05）,模型组较空白对照组IL-4含量明显升高（P<0.05）,IL-10、TGF-β含量明显降低（P<0.05）,易层组较模型组IL-10含量明显升高（P<0.05）;HMGB1及α-SMA、TIMP1、CollagenⅠ、CollagenⅢ的蛋白和基因水平在模型组较空白对照组表达增加（P<0.05）,易层组较模型组表达下调（P<0.05）。结论 “易层”贴敷能够抑制滑膜纤维化,其作用机制可能与抑制HMGB1、平衡促炎因子和抑炎因子有关。      

第1跖骨远端Chevron截骨联合软组织松解术治疗拇外翻

目的 :探讨第1跖骨远端Chevron截骨联合软组织松解术治疗轻、中度拇外翻的临床疗效。方法:自2015年6月至2017年6月,采用第1跖骨远端Chevron截骨联合软组织松解术治疗拇外翻32例(40足),其中男3例3足,女29例37足;年龄22～80岁,平均57.57岁;病程2～32年,平均14年;轻度9足,中度31足。术前患者合并拇囊炎,伴有第1跖趾关节周围疼痛并存在负重行走时疼痛加重。手术前后拍摄足负重正侧位片,比较拇外翻角(hallux valgus angle,HVA),第1、2跖骨间角(intermetatarsal angle,IMA),并采用美国足踝外科协会拇外翻评分(AOFAS)评价临床疗效。结果:32例患者获得了随访,时间12～24个月,平均15.2个月。术后切口均愈合良好,无感染、跖骨头坏死等并发症发生。术前HVA、IMA分别由(32.08±5.59)°、(11.63±2.24)°减小至术后12个月的(10.31±4.36)°、(5.02±2.34)°,差异有统计学意义(P0.05)。AOFAS评分由术前的56.75±6.42提高至术后12个月的88.80±3.99 (P0.05)。结论:第1跖骨远端Chevron截骨联合软组织松解术治疗轻、中度拇外翻畸形可获得较好的临床效果,为拇外翻治疗提供了更多的选择。     

环形对口引流技术联合中药治疗骨与软组织感染9例

目的:评价环形对口引流技术应用于治疗骨与软组织感染的临床疗效。方法:回顾2012年9月至2017年2月在本科住院、采用环形对口引流技术联合中药治疗的骨与软组织感染患者9例:男3例,女6例;年龄35～81岁,中位数53岁。结果:9例患者感染均获得治愈。结论:环形对口引流技术操作简单、疗效可靠、护理便捷,适用于骨与软组织感染的治疗。     

从燮理肝脾肾治疗绝经后骨质疏松症探讨

绝经后骨质疏松症(PMPO)是发生于女性绝经期的代谢性骨病,又称Ⅰ型原发性骨质疏松症,以腰背疼痛无力、脊柱驼背变形、易于跌倒骨折为主要临床表现。属中医“骨痿” “骨枯”范畴。从中医整体观出发分析本病的发生与肝脾肾失调相关,病理机制有:肾虚为本,先天亏虚; 脾虚失用,后天乏源; 肝郁血虚,枢机不利; 血瘀为标,瘀虚互生。其病机为本虚标实证,本虚在于肝脾肾精气亏虚、骨失濡养; 标实责之肝郁血瘀、骨络失和。治疗大法应当标本同治、扶正祛邪,燮理肝脾肾; 经验方补肾活血健骨方从“补肾填髓、健脾益气、疏肝理气、活血祛瘀”立法,契合PMOP病机,获得一定临床疗效。     

基于TRP离子通道谈“以痛为枢、截断扭转”理论诊治膝骨关节炎的分子机制

疼痛是膝骨关节炎最为常见临床表现,不仅严重影响患者生活质量,也是骨关节炎病情进展的危险因素。南京中医药大学附属医院骨科经过长期实践形成了"以痛为枢、截断扭转"的治疗理念,以膝痹宁内服、易层膏剂外用为主要治疗手段,临床疗效显著。瞬时感受器电位通道是一种跨膜的非选择性阳离子通道,能被冷刺激及机械刺激激活,与膝骨关节炎疼痛及病理改变密切相关。从瞬时感受器电位通道角度探讨"以痛为枢、截断扭转"理论诊治膝骨关节炎的分子机制,以期为膝骨关节炎的治疗提供新的思路与方法。