同型半胱氨酸诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α

探讨同型半胱氨酸是否可诱导人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白 1α ,使培养的人脐静脉内皮细胞暴露于不同浓度的同型半胱氨酸 ,采用逆转录聚合酶链反应和免疫细胞化学方法观察其巨噬细胞炎性蛋白 1α的表达。结果发现 ,培养的人脐静脉内皮细胞可表达巨噬细胞炎性蛋白 1α。暴露于同一浓度 (0 .1mmol L)同型半胱氨酸 ,分别孵育 4、8和 16h ,其巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA表达水平分别是对照组的 2 .0 8倍、3.2 6倍和 3.35倍 ;免疫细胞化学发现 ,上述各组巨噬细胞炎性蛋白 1α蛋白表达的平均吸光度值分别是 0 .0 71± 0 .0 0 6、0 .0 81± 0 .0 0 6和 0 .12 8± 0 .0 0 9,均显著高于对照组 (0 .0 4 9± 0 .0 0 5 ,P <0 .0 1)。暴露于不同浓度 (0 .1mmol L、0 .5mmol L和 1mmol L)的同型半胱氨酸 ,孵育 8h后 ,各组巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA表达水平分别是对照组的 2 .0 8倍、4 .35倍和 4 .5 7倍 ,巨噬细胞炎性蛋白 1α蛋白表达的平均吸光度值分别是 0 .0 81± 0 .0 0 6、0 .110± 0 .0 0 9和 0 .118± 0 .0 0 8,均显著高于对照组 (0 .0 4 9± 0 .0 0 5 ,P <0 .0 1)。结果提示 ,同型半胱氨酸可诱导人脐静脉内皮细胞表达高水平的巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA和蛋白。     

天然及氧化型极低密度脂蛋白诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α

为探讨天然及氧化型极低密度脂蛋白能否诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白 1α ,使内皮细胞分别暴露于上述脂蛋白后 ,用原位杂交、逆转录聚合酶链反应及免疫细胞化学法分别检测各组细胞的巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA和蛋白的表达。原位杂交发现 ,培养的内皮细胞能表达巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA ,两脂蛋白组内皮细胞的积分吸光度值明显高于对照组 (P <0 .0 1)。逆转录聚合酶链反应发现 ,两脂蛋白组内皮细胞的巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA的积分吸光度值分别为对照组的 15 .4倍和 14 .2倍。免疫细胞化学发现 ,两脂蛋白组内皮细胞胞浆的巨噬细胞炎性蛋白 1α蛋白表达 (棕色颗粒 )的积分吸光度值显著高于对照组 ,方差分析表明 ,组间差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。结果提示 ,天然及氧化型极低密度脂蛋白均可诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达高水平的巨噬细胞炎性蛋白 1αmRNA和蛋白 ,通过促进单核细胞迁入内膜在动脉粥样硬化发生中起重要作用     

脂质过氧化损伤诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达细胞间粘附分子1

为探讨脂质过氧化损伤能否诱导血管内皮细胞表达细胞间粘附分子 1,用胰酶消化法分离人脐静脉内皮细胞进行原代培养 ,内皮细胞用不同浓度联胺作用相同时间或同一浓度联胺作用不同时间 ,使之发生脂质过氧化损伤 ,逆转录聚合酶链反应检测内皮细胞细胞间粘附分子 1mRNA表达 ,细胞酶链免疫吸附实验测定内皮细胞细胞间粘附分子 1蛋白表达。逆转录聚合酶链反应结果发现 ,不同浓度联胺 (1μmol L、5 μmol L和 10 μmol L)作用 8h ,内皮细胞细胞间粘附分子 1对 β actin吸光度比值依次为 0 .5 35、0 .90 8和 1.186 ,分别是对照组 (0 .185 )的 2 .89倍、4 .91倍和 6 .4 1倍 ;而同一浓度联胺 (5 μmol L)作用 4h和 2 4h ,吸光度比值依次为 0 .5 98和 1.2 92 ,分别是对照组 (0 .185 )的 3.2 3倍和 6 .98倍。细胞酶链免疫吸附实验结果发现 ,经 1μmol L、5 μmol L和 10 μmol L联胺作用 4h后 ,内皮细胞细胞间粘附分子 1蛋白表达的吸光度值依次为 0 .1387、0 .1775和 0 .2 32 6 ,分别是对照组 (0 .10 35 )的 1.34倍、1.71倍和 2 .2 5倍 (P <0 .0 1)。结果表明 ,联胺诱导的内皮细胞细胞间粘附分子 1的表达在一定作用时间和浓度范围内呈时间和剂量依赖性。提示联胺诱导的脂质过氧化损伤可能上调细胞间粘附分子 1mRNA和     

伴刀豆球蛋白A刺激高胆固醇血症兔的单核细胞释放高水平的生长因子

复制高胆固醇血症（ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ，ＨＣ）兔模型，取共血液分离单核细胞（ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ ＭＣ），培养于含或不含伴刀豆球蛋白Ａ（ｃｏｎｃａｎａｖａｌｉｎ Ａ，ＣＯｎＡ）的无血清ＤＭＥ／Ｆ１２培养基中，惧要不同条件的ＭＣ条件培养基（ＭＣ－ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ ｍｅｄｉｕｍ，ＭＣ－ＣＭ）并检测其促有丝分裂活性。结果表明经Ｃｏｎ Ａ激活的ＨＣ兔的ＭＣ－ＣＭ刺激＾３Ｈ－ＴｄＲ掺     

平滑肌细胞源性生长因子的部分纯化

本文用超滤和肝素亲和层析法对培养的兔主动脉平滑肌细胞的无血清条件培养基进行纯化。用３Ｈ－ＴｄＲ掺入细胞ＤＮＡ法检测层析所得各组分对ＮＩＨ３Ｔ３纤维母细胞的致有丝分裂活性。用ＮａＤｏｄＳＯ４－聚丙烯酰胺凝胶电泳及等电聚焦电泳检测其分子量及等电点。结果表明，该条件培养基经肝素亲和层析，被１．０～１．６ｍｏｌ·Ｌ＇ＮａＣｌ洗脱下来的蛋白质成分对３Ｔ３细胞有致有丝分裂活性，其分子量范围为２３．０～２６．９ｋＤａ，等电点约为４．６。这些生物化学特性不同于ＰＤＧＦ、ＩＧＦ及ＦＧＦ，提示这种致有丝分裂蛋白质可能是一种独立的生长因子。     

对乳腺导管内增生性病变临床病理的评估

目的 探讨乳腺导管内增生性病变的临床病理特点，评价其应用的可行性。方法 依据WHO（2003）乳腺导管内增生性病变的分类标准，应用HE、免疫组化染色技术对894例乳腺导管内增生性病变重新诊断、分类及与原病理诊断进行对比分析，并观察各级导管内增生性病变与浸润性癌的关系。结果 894例乳腺导管内增生性病变中普通导管增生（UDH）650例，导管上皮内瘤变（DIN）1A36例、1B46例、1C57例，DIN254例、DIN351例。随着DIN级别的增高，其细胞形态和组织结构的异型性逐渐明显，乳腺浸润性癌的危险性逐渐增高，部分免疫标记逐渐丢失；达到DIN 1C时，CK5和CK34 βE12几乎完全丢失。根据细胞和组织学形态特点，结合免疫组化染色，重新诊断与原病理诊断的符合率达82％以上。结论 WHO（2003）乳腺导管内增生性病变的分类同时采用DIN分类和传统分类系统。分类主要根据细胞核的间变程度，同时考虑病变大小、有，无微灶钙化、坏死、组织结构和免疫表型等。它的诊断标准明确，比较容易掌握，具有较强的实用性，而且对临床预后和治疗具有指导意义。     

白细胞介素-1β上行调节兔血管平滑肌细胞极低密度脂蛋白受体mRNA的表达

为了研究血管平滑肌细胞是否表达极低密度脂蛋白受体ｍＲＮＡ，采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析法检测培养兔主动脉平滑肌细胞表达极低密度脂蛋白受体ｍＲＮＡ的情况。结果发现，培养兔主动脉平滑肌细胞可以表达极低密度脂蛋白受体ｍＲＮＡ；而且，细胞因子白细胞介素－１β能使表达增强约２倍。提示极低密度脂蛋白受体有可能参与动脉平滑肌细胞源性泡沫细胞；白细胞介素－１β上行调节平滑肌细胞表达极低密度脂蛋白受体ｍＲＮＡ     

伴刀豆球蛋白A刺激高胆固醇血症兔的单核细胞释放高水平的生长因子

复制高胆固醇血症（ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ，ＨＣ）兔模型，取其血液分离单核细胞（ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ，ＭＣ），培养于含或不含伴刀豆球蛋白Ａ（ｃｏｎｃａｎａｖａｌｉｎＡ，ＣｏｎＡ）的无血清ＤＭＥ／Ｆ１２培养基中，收集不同条件的ＭＣ条件培养基（ＭＣ－ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄｍｅｄｉｕｍ，ＭＣ－ＣＭ）。并检测其促有丝分裂活性。结果表明，经ＣｏｎＡ激活的ＨＣ兔的ＭＣ－ＣＭ刺激３Ｈ－ＴｄＲ掺入ＮＩＨ３Ｔ３     

平滑肌细胞源性趋化因子所致单核细胞迁移的钙依赖性研究

本文以培养的兔主动脉平滑肌细胞条件培养基作为趋化因子的来源，用改良的Ｂｏｙｄｅｎ小室微孔滤膜法进行单核细胞的迁移试验，并观察戊脉胺和细胞外Ｃａ２＋对其影响。用Ｆｕｒａ－２检测单核细胞胞液游离钙浓度，并观察上述条件培养基及戊脉胺对其影响。结果表明，该条件培养基对单核细胞有明显趋化作用并被戊脉胺所抑制；它也能明显地升高单核细胞胞液游离钙浓度，并被戊脉胺所抑制。细胞外Ｃａ２＋也能影响单核细胞的迁移。以上结果提示，单核细胞迁移对细胞内、外Ｃａ２＋均有依赖性。