HPLC法同时测定护肝颗粒中的槲皮素、山柰素和异鼠李素的含量

目的:建立护肝颗粒中槲皮素、山柰素、异鼠李素的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法测定护肝颗粒中槲皮素、山柰素、异鼠李素的含量,色谱柱Hedera ODS-2柱(4.6 mm×200 mm,5μm),流动相为甲醇-0.4%磷酸,梯度洗脱,流速1 m L/min,检测波长360 nm,柱温为35℃。结果:槲皮素、山柰素、异鼠李素分别在0.0768~1.92μg,0.02004~0.501μg,0.021~0.525μg范围内进样量与峰面积积分值线性关系良好,r分别为0.9999、0.9998、0.9999,加样回收率分别为97.4%、98.1%、97.9%,RSD分别为1.4%、1.8%、1.3%。结论:该方法准确、稳定,可以用来同时测定护肝颗粒中槲皮素、山柰素、异鼠李素的含量。     

心脑苏提取物对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌缺血的保护作用及机制

目的:研究心脑苏提取物对大鼠心肌缺血的治疗作用,并探讨其作用机制。方法:SD大鼠,按体重随机分为6组,即正常组,模型组,阳性对照0.135 g·kg~(-1)组(麝香保心丸组0.135 g·kg~(-1)),心脑苏提取物高、中、低剂量组(0.055,0.276,1.38 g·kg~(-1)),各组n≥10。异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)尾静脉注射建立大鼠心肌缺血模型。造模第2天开始ig给予心脑苏提取物剂量(0.055,0.276,1.38 g·kg~(-1)),连续给药14 d,大鼠腹主动脉取血,测定血清乳酸脱氢酶(LDH),肌酸激酶(CK),超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)的含量。取心脏进行苏木素和伊红(HE)染色,光镜观察其组织形态学变化。通过CD34单克隆抗体进行免疫组化技术标记心脏微血管内皮细胞,计算微血管密度(MVD)。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清中CK,LDH酶活力及MDA含量显著升高,SOD活力显著降低(P0.01);与模型组比较,心脑苏提取物中、高剂量组显著降低大鼠血清中CK,LDH酶活力及MDA含量(P0.01),SOD活性显著增加(P0.01),内皮血管数及MVD显著增加(P0.01)。结论:心脑苏提取物能明显改善大鼠心肌缺血损伤,其机制可能为减轻氧化损伤、促进微血管再生。     

关于小儿外科基层医师腹腔镜培训的几点思考

目的探讨小儿外科基层医师的腹腔镜规范化培训的方式、内容和出路。方法 2009年至今,哈尔滨医科大学附属第二医院小儿外科对15名基层医师进行小儿腹腔镜技术培训,采取定期理论学习、长期模拟训练、部分临床实践等规范化操作体系。结果培训医师能够掌握小儿外科腹腔镜手术操作技术,回到基层单位可以开展小儿腹腔镜手术。结论规范化的小儿腹腔镜培训体系可以提高基层医师腹腔镜理论水平和手术技能,推动小儿外科腹腔镜技术在基层单位的应用发展。     

硫氧还蛋白对大鼠睾丸缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的 探讨硫氧还蛋白对大鼠睾丸缺血再灌注损伤的保护作用.方法 选取雄性SD大鼠60只,随机分为4组:假手术对照组(A组);睾丸扭转/复位组(B组);睾丸扭转/复位+腹腔内注射生理盐水组(C组);睾丸扭转/复位+腹腔内注射硫氧还蛋白组(D组).无菌条件下制作左侧睾丸扭转模型,扭转持续4h,复位4h后取睾丸标本(D组在复位前15 min腹腔内注射硫氧还蛋白).对标本进行病理组织学检查;检测睾丸组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量.结果 睾丸扭转/复位后可见生精小管退变,间质出现水肿及出血,腹腔注射硫氧还蛋白使睾丸扭转/复位诱发的组织学改变明显改善.B组及C组睾丸损伤评分(8.3±0.96;8±0.87)明显高于A组(0.78±0.36)(P＜0.01),而腹腔注射硫氧还蛋白可以使睾丸损伤分值(3.1±0.42)显著降低(P＜0.05).B组及C组MDA含量(4.39±0.21;4.42±0.17)升高,SOD活性(269±27.1;271±21.3)降低,与对照组(MDA:1.61±0.18;SOD:317±22.3)相比,差别具有显著性意义(P＜0.01).而腹腔注射硫氧还蛋白能有效降低MDA含量(2.03±0.03)并升高SOD活性(315±24.2)(P＜0.01).结论 本实验为硫氧还蛋白作为治疗睾丸扭转继发损害的有效物质提供了组织学及生化依据.为临床预防和治疗睾丸缺血再灌注损伤提供了理论依据.     

HGF对TGF-β1诱导尿道瘢痕成纤维细胞α-SMA及细胞外基质过度合成的保护作用

目的 探讨HGF对TGF-β1诱导尿道瘢痕成纤维细胞α-SMA及细胞外基质过度合成的保护作用.方法 收集尿道下裂术后瘢痕组织的标本,进行尿道瘢痕成纤维细胞的分离和培养.待细胞生长成单层后,以胰蛋白酶消化传代.取第四代成纤维细胞用于实验,当细胞达到80%融合时,培养液中加入TGF-β1(5ng/ml)及HGF(10～40ng/ml).培养72 h后,用RT-PCR检测各组α-SMA mRNA的变化;ELISA测定细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及纤维结合素的表达.结果 TGF-β1能显著诱导α-SMA m-RNA表达.随HGF的加入,α-SMA m-RNA的表达则明显受到抑制(P＜0.05),且随HGF浓度的升高其阻抑作用呈逐渐增强趋势.对照组、单纯TGF-β1组、加入TGF-β1与10、20、40ng/ml HGF组的Ⅰ型胶原A值分别为0.51±0.04、0.78±0.05、0.71±0.02、0.63±0.03、0.57±0.02,Ⅲ型胶原A值分别为0.12±0.01、0.29±0.02、0.21±0.02、0.14±0.01、0.08±0.01,纤维结合素A值分别为0.24±0.03、0.51±0.02、0.49±0.01、0.38±0.02、0.28土0.01.表明TGF-β1同样能诱导Ⅰ、Ⅲ型胶原及纤维结合素的表达(P＜0.01),而HGF则可以有效地阻抑其表达,其效应呈剂量依赖性(P＜0.05).结论 HGF对TGF-β1诱导的尿道瘢痕成纤维细胞α-SMA及细胞外基质过度合成具有抑制作用.这为临床预防和治疗尿道瘢痕狭窄提供了理论依据.

Abstract：

Objective To examine the inhibitory effects of HGF on TGF-β1 induced a-SMA and extracellular matrix synthesis in cultured fibroblasts derived from urethral scar. Methods Fibroblasts isolated from urethral scar were cultured ex vivo. After the fibroblasts reached confluence, cells were detached using trypsin/ethylenediamine tetra-acetic acid. All experiments were performed using the cells at the fourth passage. At 80% confluence, TGF-β1 (5 ng/ml) and HGF (10-40 ng/ml) were added to the culture medium. After 72 hours co-incubation, the mRNA of a-SMA was studied by RTPCR. The productions of collagen Ⅰ, Ⅲ and fibronectin in supernatants were also examined using ELISA. Results TGF-β1 markedly induced a-SMA mRNA expression in cultured fibroblasts. However, HGF could abrogated TGF-β1-induced a-SMA mRNA expression in a dose-dependent manner (P＜0. 05). The levels of collagen type Ⅰ were 0. 51 ± 0. 04,0. 78 ± 0. 05,0. 71 ± 0. 02,0. 63 ± 0. 03, and 0. 57 ± 0. 02 in control, TGF-β1, TGF-β1 + 10 ng/ml HGF, TGF-β1 + 20 ng/ml HGF, and TGF-β1 +10 ng/ml HGF group, respectively. The levels of collagen type Ⅲ were 0. 12 ± 0. 01,0. 29 ± 0. 02,0. 21 ± 0. 02,0. 14 ± 0. 01, and 0. 08 ± 0. 01 in control, TGF-β1, TGF-β1 + 10 ng/ml HGF, TGF-β1 +20 ng/ml HGF, and TGF-β1 + 10 ng/ml HGF group, respectively. And the levels of fibronectin were 0.24±0.03,0.51 ± 0.02,0.49 ± 0.01,0.38 ± 0.02,0.28 ± 0.01 in control, TGF-β1, TGF-β1 +10 ng/ml HGF, TGF-β1 + 20 ng/ml HGF, and TGF-β1 + 10 ng/ml HGF group, respectively. TGF-β1 significantly stimulated collagen Ⅰ, Ⅲ and fibronectin production in fibroblasts (P＜0. 01 ). However,HGF could reduced abrogated the up-regulation of collagen Ⅰ, Ⅲ and fibronectin induced by TGF-β1 in a dose-dependent manner (P＜0. 05). Conclusions HGF can effectively inhibit TGF-β1 induced aSMA and extracellular matrix synthesis in cultured fibroblasts derived from urethral scar.     

肝细胞生长因子对大鼠内侧副韧带损伤后愈合的影响

[目的]观察肝细胞生长因子对大鼠内侧副韧带(medial collateral ligament,MCL)损伤愈合后组织学及生物力学特性恢复的作用。[方法]成年雄性SD大鼠46只,随机分为实验组和对照组,每组23只。制备右膝关节MCL断裂模型,实验组每只大鼠在伤口局部注入5μg肝细胞生长因子,然后以5-0可吸收线褥式缝合;对照组注入等量生理盐水后缝合伤口。至术后第4周,无损伤情况下将实验组及对照组愈合处韧带取下,进行组织学检查、电镜检查及生物力学特性检查。[结果]HE染色见实验组胶原纤维排列较整齐,而对照组胶原纤维排列紊乱。电镜观察见实验组胶原纤维直径较对照组明显增粗,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组愈合的MCL极限负荷和刚度均大于对照组,差异有显著意义(P<0.01)。[结论]肝细胞生长因子可以在组织学及生物力学特性方面促进内侧副韧带损伤愈合。本实验可以为内侧副韧带损伤后优质愈合提供一种新方法及理论依据。     

钒酸盐促进大鼠内侧副韧带损伤后组织学及生物力学特性恢复的研究

[目的]观察钒酸盐对大鼠内侧副韧带(medial collateral ligament,MCL)损伤愈合后组织学及生物力学特性的影响。[方法]选择40只成年雄性SD大鼠,随机分2组进行实验。制备右膝关节MCL断裂模型。在MCL断裂模型制备前1周至术后6周,实验组大鼠每日给予钒酸盐25mg灌胃1次,对照组给予等量生理盐水,至术后第6周,无损伤情况下将实验组及对照组愈合处韧带取下,进行Ⅰ型胶原免疫组织化学染色及生物力学特性检查。[结果]钒酸盐组愈合处韧带Ⅰ型胶原表达有明显增加,与对照组比较,差异有显著性意义(P0.05)。钒酸盐组愈合的MCL极载负荷和刚度均大于对照组,差异有显著意义(P0.01)。[结论]钒酸盐可以有效的改善愈合后韧带的组织学及生物力学特性。因此,本实验可以为将来临床治疗韧带损伤提供一种新的途径及理论依据。     

肛门狭窄并肛管脐尿管瘘1例

患儿，男，8个月，生后排便困难，粪便细，3个月前开始出现从脐部排便，经肛门排便较少，患儿无呕吐、发热，未经过任何治疗。入院查体：一般状态好，无发热，心肺无异常，腹部略膨隆，无压痛，未触及包块，脐部发红，有少量渗出物。肛诊肛门狭窄，距肛缘0．5cnl处可触及一瘘口，     

转流术治疗小儿精索静脉曲张

目的 采用转流术治疗小儿精索静脉曲张，重新建立精索静脉通道，使静脉回流受阻立即得到改善，消除因睾丸淤血而造成的损害，以利睾丸的正常发育。方法 对28例30侧(左侧26例，双侧2例)精索静脉曲张与腹壁下静脉进行吻合，通过腹壁下静脉，髂静脉转流，手术在放大镜下应用显微外科技术进行，其中28侧用精索静脉主干，2侧结扎一条属支，用另一条静脉进行吻合。结果 通畅率为100％。术后扩张迂曲静脉团消失，阴囊下坠感消失。术后随访24例，时间为3个月-10年。除1例二次手术证实为一条静脉属支漏扎而复发外，另23例全部治愈。结论 精索静脉曲张转流术效果明显优于结扎术，可减少因睾丸淤血对其造成的进一步损害，且术后复发率低。