氯膦酸二钠脂质体清除肝内巨噬细胞对CCl4诱导的慢性肝损伤大鼠门脉高压的影响*

目的 观察氯膦酸二钠脂质体清除肝内巨噬细胞对CCl₄诱导的慢性肝损伤大鼠门脉高压的影响。方法 随机将48只Wistar大鼠分为对照组和模型组,每组24只。采用皮下注射橄榄油和四氯化碳(CCl₄)法制备肝损伤模型。在实验d₇₀,再将每组分为2个亚组,分别经尾静脉注射磷酸盐缓冲液脂质体(PL)或氯膦酸二钠脂质体(CL)处理。在实验d₁₀₅,使用BL-420F生理机能实验系统测定大鼠肝脏在体门静脉压力,采用ELISA法检测血sCD163水平,采用免疫组化法检测肝组织CD163和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达。结果 在对照组内,CL处理大鼠血清sCD163水平为(798.6±61.9) pg/L,显著低于PL处理组[(848.3±26.2) pg/L,P＜0.05];在模型组内,CL处理大鼠肝脏指数和门静脉压力分别为(4.7±0.8)和(10.6±2.0) mmHg,显著低于PL处理组[分别为(5.6±1.3)和(12.4±2.7) mmHg,P＜0.05];模型组CL处理大鼠血清ALT、AST和sCD163水平分别为(69.9±21.4) U/L、(202.8±14.2) U/L和(980.1±122.3) pg/L,与PL处理大鼠比,均有显著性差异[分别为(97.8±39.6) U/L、(290.6±168.1) U/L和(1083.2±97.2) pg/L,P＜0.05];免疫组化结果显示,CL处理大鼠肝组织CD163和iNOS蛋白阳性表达较PL处理大鼠有不同程度的减弱。结论 巨噬细胞参与门脉高压的发生和发展。清除巨噬细胞可降低门静脉压力。     

黄芪活性成分抗衰老作用机制的网络药理学研究

目的:运用网络药理学方法探讨黄芪抗衰老的作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获得黄芪化学成分,以生物利用度(OB)、类药性(DL)为条件筛选主要活性成分;利用TCMSP和PharmMapper数据库预测黄芪活性成分靶点;在OMIM数据库和GeneCards数据库中输入关键词"aging",搜索与衰老相关的疾病靶点;借助Cytoscape 3.2.1软件构建"药物-疾病-靶点"的可视化网络;通过STRING网站构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,并筛选核心靶点;通过CB-Dock网站对成分与靶点进行分子对接验证;应用DAVID数据库对靶点进行基因本体(GO)分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析。结果:筛选得到黄芪24个活性成分,对应385个作用靶点;筛选出衰老相关靶点23 997个,取交集得到黄芪与衰老相关靶点377个,其中核心靶点为蛋白激酶B1(Akt1)、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、Jun、白细胞介素-6(IL-6)、MAPK8、表皮生长因子受体(EGFR)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、表皮生长因子(EGF)、骨髓细胞瘤病毒癌基因同源物(MYC)和白细胞介素-8(CXCL8);分子对接结果显示,黄芪活性成分与靶蛋白Akt1和MAPK1的结合能力较好;GO功能显著富集在氧化应激反应、活性氧代谢等生物过程;KEGG富集信号通路161条。结论:黄芪中黄酮和皂苷类化合物可能是其抗衰老的物质基础;黄芪可通过Akt1等靶点调节糖基化终末产物及其受体(AGE-RAGE)、缺氧诱导因子-1(HIF-1)等信号通路发挥其抗衰老作用,为其深入研究提供参考。     

以防治大鼠失眠焦虑心肾不交证量效优选交泰丸制备工艺

摘要：目的:根据不同提取方法制备的交泰丸治疗大鼠失眠焦虑心肾不交证的量效关系,筛选最佳工艺。方法:采用每天随机束缚3 h且每周分别随机3次禁食禁水（24 h/次）,连续21 d,建立大鼠失眠焦虑心肾不交证模型。d22动物分组,灌胃给予梯度剂量8种不同工艺交泰丸(1.86～186.7 mg·kg-1·d-1,k=1.77),连续10周; d77采用戊巴比妥钠睡眠协同实验检测睡眠时间,高架十字迷宫（EPM）和旷场实验（OFT）观察焦虑相关行为学变化; d102处死动物,苏木精-伊红（HE）染色观察海马CA3区病理变化,形态计量神经元细胞个数; ELISA检测血清五羟色胺（5-HT）、去甲肾上腺素（NE）含量; Graphpad Prism 5软件非线型可变斜率回归不同制剂工艺交泰丸的半数有效剂量(ED50)。结果:不同工艺制备的交泰丸治疗后,可不同程度延长大鼠睡眠时间,缓解焦虑行为,升高血清5-HT,降低NE水平,减轻海马CA3区病理改变;其量效曲线呈"S"型。优选出交泰丸最佳提取工艺为:黄连、肉桂水提两次（4 h/次）,药液合并后减压干燥。结论:本实验通过治疗失眠焦虑心肾不交证量效实验,优选了交泰丸制备工艺,为后续药物研发与临床应用提供了依据。     

LC-MS/MS鉴定木兰花碱在大鼠体内外主要代谢产物

目的 研究木兰花碱在大鼠体内外的主要代谢产物及代谢途径。方法 SD大鼠ig木兰花碱（50 mg/kg）,收集0~24 h尿液和粪便,0~6 h胆汁以及1、2、4、6、8 h血浆;体外代谢采用肝微粒体温孵系统和肠菌培养液。利用LC-MS/MS对生物样品中的原型药及代谢产物进行鉴定。采用Agilent TC-C₁₈色谱柱（150 mm×4.6 mm,5 μm）,以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,柱温30℃。质谱采用电喷雾电离源（ESI）,正离子采集模式;扫描范围m/z100~1 000。根据药物体内代谢规则,结合木兰花碱的色谱保留时间和多级质谱碎片离子特征,推测其代谢产物的结构。结果 给药后生物样品中共鉴定出12个代谢产物,其中Ⅰ相代谢产物8个,Ⅱ相代谢产物4个。主要的代谢途径为羟基化、去甲基化、脱氢作用、酮基化、葡萄糖化、葡萄糖醛酸化及硫酸酯化。结论 木兰花碱在体内可发生Ⅰ相和Ⅱ相代谢,肠道菌群和肝药酶可催化木兰花碱发生Ⅰ相代谢转化,Ⅱ相代谢存在于肠道以外部位,最有可能的部位是肝脏。     

响应面法优化水提醇沉玄参多糖工艺及其含量分析

目的:优化水提醇沉法提取纯化玄参多糖的工艺条件,建立多糖酸水解、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化高效液相色谱法(HPLC)测定玄参多糖单糖组成和含量的方法。方法:在单因素试验基础上,选择溶媒量(A)、提取时间(B)和醇沉浓度(C)为考察因素,应用Box-Behnken响应面中心组合法进行三因素三水平设计,以多糖含量为指标,优化玄参多糖的提取工艺;玄参多糖用三氟乙酸(TFA)水解后,以PMP对水解单糖进行衍生化,并建立6种单糖的HPLC分离和含量测定方法。结果:玄参多糖的最佳提取工艺条件为50倍溶媒量,提取时间1 h,醇沉浓度90%;玄参多糖由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖组成;各单糖的平均质量比为0.48∶1.40∶1.00∶69.80∶93.00∶2.20;玄参多糖平均质量分数为16.80%。结论:优选的玄参多糖水提醇沉提取纯化工艺可将玄参中的多糖提取完全,用于后续分析;PMP柱前衍生化HPLC单糖测定法的精密度、重复性和准确性良好,适用于玄参多糖的组成及含量测定。