雌激素对去卵巢大鼠中缝核簇5-羟色胺能神经元的影响

目的:通过观察雌二醇对去卵巢大鼠中缝核簇5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)免疫阳性物质表达的影响,探讨围绝经期潮热发病机制。方法:实验于2003-09/2004-01在解放军第四军医大学神经生物研究所形态学实验室完成。成年雌性SD大鼠18只,解放军第四军医大学实验动物中心提供,体质量200～250g。清洁级动物,许可证号为SCXK(军)2002-005。采用酶联免疫吸附试验测定血清激素水平,用免疫组织化学方法和图像分析技术观察大鼠中缝核簇5-HT样阳性物质的表达。结果:5-HT样阳性反应产物在大鼠中缝背核、中缝正中核表达较多,去卵巢组大鼠中缝背核、中缝正中核5-HT样阳性细胞数(82.5±17.7)及吸光度(5.12±0.46)都低于假去势组(164.1±15.4,5.90±0.51)(P<0.05),去卵巢雌激素组大鼠中缝背核、中缝正中核5-HT样阳性神经元(149.5±13.4)及吸光度(5.80±0.41)都与假去势组类似,差异无显著性意义(P>0.05)。结论:雌激素可改变大鼠中缝背核、中缝正中核5-HT样阳性物质表达,从而影响其神经元的功能,导致绝经期潮热发生。     

IgG刺激诱发的小胶质细胞Toll样受体4表达及细胞因子分泌

目的:了解在体外培养条件下免疫球蛋白G (IgG) 刺激对小胶质细胞表达Toll 样受体4(TLR4)和分泌细胞因子的作用.方法:用不同浓度的IgG (2 mg/L、 20 mg/L、 200 mg/L)及脂多糖(LPS)(10 mg/L)刺激原代培养的大鼠小胶质细胞,24 h后以免疫荧光染色观察TLR4的表达,ELISA法检测培养上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和γ干扰素(IFN-γ)的含量.结果:IgG直接作用于体外培养的小胶质细胞后,以剂量依赖的方式引起TLR4的表达和TNF-α的分泌,但未检测到IFN-γ含量的变化.作为阳性对照的LPS引起了小胶质细胞TLR4表达,并诱导了TNF-α及少量IFN-γ的分泌.结论:同种IgG刺激可使体外培养的小胶质细胞大量表达TLR4,可能通过MyD88依赖途径导致炎性细胞因子分泌.结果提示至少在中枢神经系统的固有免疫反应中,TLR4可能发挥识别病原体之外的蛋白分子,例如IgG的作用.     

磷酸化的细胞外信号调节蛋白激酶1/2在正常小鼠脑内的免疫细胞化学定位

细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)1/2是重要的信号转导分子。现已知在正常动物的中枢神经系统内有其活化形式即磷酸化的ERK1/2(pERK1/2)分子的存在,但其在小鼠脑内的分布目前还没有全面的观察。本研究用免疫组织化学技术(ABC法)研究了pERK1/2样免疫反应阳性产物在脱臼处死的正常小鼠全脑内的分布。结果发现pERK1/2在正常小鼠脑内有广泛的表达,阳性产物主要存在于神经元,亦见于个别白质内的胶质细胞,脑膜及室管膜细胞也有表达。强阳性表达的核团主要有:岛皮质、视听皮质、边缘前皮质、扣带前皮质、海马垂直部、弓状核、蓝斑和小脑Purkinje细胞;中等阳性表达的核团主要有:感觉运动皮质、外侧隔区、内侧杏仁核、皮质杏仁核和外侧杏仁核、丘脑室旁核前部、视交叉上核、穹隆下器、终板血管器、前腹侧视前核和下丘脑背内侧核;弱阳性表达的核团主要有:视上核、下丘脑室旁核大细胞部、下丘脑后区、顶盖前区、室周灰质腹外侧柱、A5区、孤束核和延髓腹外侧网状结构等。本文结果观察到pERK1/2在正常小鼠脑内广泛存在,提示pERK1/2作为重要的信号转导分子,可能参与许多脑区在正常状态下的功能活动,揭示其分布特点为了解其在脑内的多样性功能提供了形态学依据。     

雌性大鼠下丘脑5-羟色胺1A和2A受体亚型的定位分布

本研究应用免疫细胞化学技术观察了雌性成年SD大鼠下丘脑内5-HT1A受体亚型(5-HT1AR)和5-HT2AR免疫阳性结构的分布。结果显示:5-HT1AR免疫阳性神经元在视前区大细胞核、视前室周核、视上核和下丘脑外侧前核等核团内密集分布。在内侧视前核、外侧视前区、下丘脑室周核、下丘脑外侧区、背内侧核、腹内侧核、结节核、结节乳头体核、乳头体内侧核和乳头体外侧核等结构内也有较多的分布;而在正中视前核、视交叉上核、下丘脑室旁核、下丘脑背侧核、弓状核、乳头体上核和乳头体前核等部位有散在的分布。与5-HT1AR不同,5-HT2AR免疫阳性反应产物主要见于纤维和终末,阳性胞体少且染色淡。5-HT2AR阳性胞体见于下丘脑室旁核、视上核、腹内侧核、结节核、视前内侧区、外侧区、外侧前核、下丘脑背内侧核等处。另外,在视前区前内侧视前核、视交叉上核背侧和外侧可见围绕血管分布、密集成团簇状、带有大小不同膨体的阳性神经纤维缠结。本文结果提示5-HT1AR阳性结构广泛地分布于大鼠下丘脑,而5-HT2AR在下丘脑分布较为局限。二者不同的分布特点,提示它们可能介导5-HT在下丘脑的不同生理功能。     

大鼠双侧海马伞离断对脂多糖诱导的下丘脑催产素能神经元功能活动的影响

为观察去海马传入对免疫应激时下丘脑室旁核、视上核催产素能神经元功能活动的影响 ,以探索海马调控外周免疫反应的脑内环路 ,本研究预先切断大鼠双侧海马伞 ,2 8d后腹腔内注射细菌内毒素脂多糖 (lipopolysaccharide,LPS,75 0μg/kg) ,用免疫组织化学双标记方法 ,以 F os蛋白作为神经元功能活动的标记物 ,观察下丘脑催产素能神经元中即刻早期基因的表达变化。结果显示 :双侧海马伞离断后 ,下丘脑室旁核中因腹腔脂多糖刺激而发生活化的催产素能神经元活化百分率显著下降 ;而视上核中催产素能神经元的活化未受明显影响。上述结果表明 ,海马对下丘脑 -垂体 -肾上腺轴以及免疫系统的抑制作用部分是通过其支配的下丘脑室旁核的催产素能神经元来完成的。     

雌激素、黄体酮受体在正常及曲张的大隐静脉中的表达

目的 研究在正常及曲张的大隐静脉壁上雌激素（E）和黄体酮（P）受体的表达。方法 采用29名健康人群的大隐静脉及32名静脉曲张患者的曲张和正常静脉标本，经固定处理后运用抗雌激素和抗黄体酮受体的抗体染色，再进行核染色密度和范围积分计数。结果 在男性和女性的血管中膜、内膜核区均检测到了两种激素的受体。在血管外膜，仅在曲张 血管核区检测到两种激素的受体。在曲张血管的非扩张部，其雌激素的表达低于正常人的正常血管。在同一曲张血管中，尤其是女性，扩张区雌激素表达水平远远高于非扩张区。而黄体酮受体水平在曲张静脉非扩张区部分女性高于男性。结论 性激素是静脉曲张形成的一种重要因素。     

Ets-1在链脲左菌素诱导的糖尿病大鼠模型视网膜内表达增强

目的:阐明Ets-1是否参与了实验性糖尿病视网膜病变过程.方法:腹腔注射链脲左菌素(STZ)来诱导糖尿病.STZ注射后4 wk,分离各组视网膜内总RNA和总蛋白,分别进行Northern blot和Western blot分析.结果:实验性糖尿病视网膜内Ets-1在mRNA水平和蛋白水平均明显高于对照组(P＜0.001).结论:实验结果表明Ets-1参与了实验性糖尿病视网膜的病理过程.进一步研究需要阐明Ets-1和VEGF关系.     

单纯发泡治疗阴虚火旺型失眠39例临床观察

失眠历代医家称“目不瞑”“不得眠”“不得卧”“不寐”“无眠”“少睡”“少寐”等。是一种睡眠障碍，全球每10～12人中就有1人患失眠，且患病率仍在继续攀升。目前西医治疗失眠，虽有一定疗效，但长期服药易产生耐受性、成瘾性及戒断性反应等副作用，因此寻求非药物治疗失眠是临床工作中现实而迫切的需要。笔者自2003年1月至2006年6月门诊收集中医辨证属阴虚火旺型失眠39例，采用单纯发泡疗法治疗取得满意疗效，现报告如下：     

雌激素对去卵巢大鼠中缝核簇5-羟色胺能神经元的影响

目的：通过观察雌二醇对去卵巢大鼠中缝核簇5-羟色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)免疫阳性物质表达的影响，探讨围绝经期潮热发病机制。方法：实验于2003—09／2004—01在解放军第四军医大学神经生物研究所形态学实验室完成。成年雌性SD大鼠18只，解放军第四军医大学实验动物中心提供，体质量200—250g。清洁级动物，许可证号为SCXK(军)2002—005。采用酶联免疫吸附试验测定血清激素水平，用免疫组织化学方法和图像分析技术观察大鼠中缝核簇5-HT样阳性物质的表达。结果：5-HT样阳性反应产物在大鼠中缝背核、中缝正中核表达较多，去卵巢组大鼠中缝背核、中缝正中核5-HT样阳性细胞数(82．5&;#177;17．7)及吸光度(5．12&;#177;0.46)都低于假去势组(164．1&;#177;15．4，5．90&;#177;0．51)(P&;lt;0．05)，去卵巢雌激素组大鼠中缝背核、中缝正中核5-HT样阳性神经元(149．5&;#177;13．4)及吸光度(5．80&;#177;0．41)都与假去势组类似，差异无显著性意义(P&;gt;0．05)。结论：雌激素可改变大鼠中缝背核、中缝正中核5-HT样阳性物质表达，从而影响其神经元的功能，导致绝经期潮热发生。     

重组肌腱蛋白-R不同功能片段的表达、纯化和生物学功能

目的 将肌腱蛋白-R不同功能片段在原核中表达、纯化、并研究其初步的生物学功能。方法 将编码肌腱蛋白-R不同功能片段的表达质粒pGEX-EGFL,pGEX-EGFS,pGEX-FN1-2,pGEX-FN6-8,pGEX-FG及空载pGEX-KG转化入E.Coli JM109中,用IPTG诱导表达,以谷胱甘肽琼脂糖为填充料进行亲合层析,纯化所表达的融合蛋白。以纯化的融合蛋白作为培养液成分,GST为对照,观察纯化的肌建蛋白-R各功能片段对体外培养脊髓细胞活性及突丰收生长的影响。结果 肌腱蛋白R的5个片段在大肠杆菌中都有表达,通过谷胱甘肽琼脂糖亲合层析,都得到了初步纯化。通过对培养细胞进行MTT染色,NSE染色后图像分析,结果表明,EGFL,FN1-2促进神经元的存活,EGFL,EGFS和FN6-8对突起的生长有明显的促进作用。结论 肌腱蛋白-R的不同功能片段可以通过大肠杆菌表达,经纯化获得蛋白,肌腱蛋白-R不同的片段对体外培养的脊髓细胞有不同的作用。