谷氨酰胺联合维生素C对热应激致大鼠肠源性内毒素血症的预防作用

目的观察谷氨酰胺联合维生素C对肠源性内毒血症的预防作用,并初步探讨其机制。方法将160只SD雄性大鼠按随机数字表法分为谷氨酰胺联合维生素C组、谷氨酰胺组、维生素C组、高温应激组、正常对照组。用人工气候箱建立大鼠中暑内毒素血症模型,分别于1、3、7、15 d用2%的戊巴比妥钠腹腔麻醉取小肠组织并心脏采血。用试剂盒检测小肠组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及血清内毒素的含量,RT-PCR检测小肠黏膜Toll样受体2(TLR2)mRNA表达情况。结果在同时间段与正常对照组比,高温应激组SOD含量明显降低,MDA、血清内毒素、TLR2mRNA表达量明显升高(P<0.05),3种治疗组SOD、MDA含量无统计学差异(P>0.05),谷氨酰胺组、维生素C组血清内毒素及TLR2 mRNA表达量明显升高(P<0.05),但谷氨酰胺组联合维生素C组血清内毒素及TLR2 mRNA表达量无统计学差异(P>0.05)。在同时间段与高温应激组相比,3种治疗组SOD含量显著升高(除第7天谷氨酰胺组、维生素C组外);MDA、内毒素含量及TLR2 mRNA表达量明显降低(除第3天、第15天的维生素C组TLR2 mRNA表达量外)(P<0.05)。同时间段的谷氨酰胺联合维生素C组与谷氨酰胺组、维生素C组相比,其SOD含量相近,但MDA和血清内毒素含量及TLR2 mRNA表达量均显著降低(P<0.05)。结论谷氨酰胺联合维生素C可减轻高热应激对肠黏膜的损伤,保护肠黏膜屏障功能,有效的降低肠源性内毒素血症发生,可用于高热中暑的预防。     

结直肠癌组织中核干因子和增殖细胞核抗原的表达与血清叶酸水平的关系

目的 探讨核干因子(nucleostemin,NS)和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在结直肠癌组织中的表达与血清叶酸水平的关系.方法 2009年3-12月在肠镜下收集50例结直肠癌患者的组织,根据国际结直肠癌的病理分类标准分为高分化组(12例)、中分化组(17例)、低分化组(21例)和正常肠黏膜组(50例),同时取受检者静脉血5 ml;采用免疫组织化学法检测NS和PCNA结直肠癌组织和正常肠黏膜的表达,采用磁性颗粒化学发光免疫法检测血清叶酸水平.结果 NS和PCNA在结直肠癌阳性表达率分别是70.0%(35/50)和72.0%(36/50),两者在正常肠黏膜中未见表达.NS和PCNA在高分化结直肠癌阳性率为41.7%(5/12)和33.3%(4/12),分别显著低于中分化结直肠癌阳性率[76.5%(13/17)和82.4%(14/17)]与低分化结直肠癌阳性率[81.0%(17/21)和85.7%(18/21),P＜0.05].患者血清叶酸水平在结直肠癌NS和PCNA阳性组与阴性组无显著差别(P＞0.05).结论 NS和PCNA在结直肠癌组织中有表达,且与结直肠癌的恶性程度密切相关,但血清叶酸水平与NS和PCNA在结直肠癌组织中的表达无关.     

TRADD慢病毒载体构建及其对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的构建抗食管支架术后再狭窄携人TRADD基因慢病毒表达载体,并检测其对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法以购买的人TRADD基因为模板,采用PCR法扩增目的基因片段,PCR产物经回收纯化后与线性化的慢病毒表达载体pLVX-EGFP-3FLAG-Puro重组。重组质粒转化DH5α感受态细胞。菌落PCR鉴定转化子,阳性克隆测序无误后,质粒共转染293FT细胞制备慢病毒。Real-time定量PCR法检测病毒滴度。Western blot检测TRADD-GFP-FLAG融合蛋白的表达。MTT法检测TRADD基因慢病毒对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。结果菌落PCR扩增产物经凝胶电泳,阳性克隆得到1 200 bp片段,基因测序显示重组质粒中TRADD序列与GenBank中序列一致。包装产生的慢病毒转染293 FT细胞48 h后,荧光显微镜下可见大量绿色荧光,病毒滴度为3.22×108IU/ml,Western blot检测到融合蛋白TRADD-GFP-FLAG在293FT细胞中获得有效表达,MTT法证实该融合蛋白具有生物活性,能有效抑制瘢痕成纤维细胞增殖。结论成功构建并包装了pLVX-TRADD-EGFP-3FLAG-Puro慢病毒表达载体,其可明显抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖。     

莫沙必利对模拟急性高原暴露大鼠小肠动力的改善作用

目的观察莫沙必利对高原缺氧大鼠小肠动力及黏膜屏障的保护作用,初步探讨其对肠道急性缺氧损害的预防作用。方法将90只SD雄性大鼠按随机数字表法分为正常对照组、高原缺氧组、高原莫沙必利组;低压氧舱模拟海拔6 000 m,氧分压(9.31±0.05)kPa,氧含量(19.6±0.2)%,建立大鼠急性缺氧模型,高原莫沙必利组采用莫沙必利灌胃,3次/d,每天剂量0.27 mg/kg。分别于10、24、48、72、168 h取小肠组织。检测急性高原缺氧应激后小肠组织一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)的含量变化;墨汁灌胃实验计算推进距离,检测小肠动力;RT-PCR检测小肠黏膜闭锁连接蛋白1(ZO-1)mRNA的表达情况。结果与同时间段正常对照组比,高原缺氧组NO、NOS含量增高,24、48、72、168 h NO含量差异明显(P<0.05,P<0.01),48、72、168 h NOS含量差异明显(P<0.05,P<0.01);ZO-1 mRNA表达量降低,48、72、168 h差异明显(P<0.05,P<0.01);高原莫沙必利组NO、NOS含量较正常对照组增高,仅48 h NO含量增高明显(P<0.05);高原缺氧组与高原莫沙必利组(168 h除外)各时间点小肠推进距离均较正常对照组明显降低(P<0.05,P<0.01)。各时间点高原莫沙必利组NO、NOS含量较高原缺氧组降低,72 h NO,72、168 h NOS含量差异明显(P<0.05);各时间点高原莫沙必利组小肠推进距离及ZO-1 mRNA的表达量较高原缺氧组增高,48、72、168 h的小肠推进距离及72、168 hZO-1 mRNA的表达量差异明显(P<0.05)。结论莫沙必利可有效促进小肠动力,减轻高原缺氧应激引起的小肠动力障碍及肠道黏膜屏障的损伤,可用于高原缺氧肠道损害的预防。     

谷氨酰胺联合维生素C对军事训练中暑及内毒素血症的预防作用及机制研究

目的 观察谷氨酰胺联合维生素C对中暑及肠源性内毒素血症的干预作用,初步探讨其作用机制.方法 对48例在高热环境下进行军事训练的士兵按照区组随机化法分为预防组(24例)和对照组(24例),预防组士兵在常规口服补液的基础上加服谷氨酰胺联合维生素C预防中暑,对照组采用相同的常规补液加服安慰剂.比较2组中暑发生率,训练前后氧化应激指标、血浆内毒素、十二指肠粘膜超微结构及十二指肠粘膜热休克蛋白70(HSP70)表达变化.结果 药物预防组和对照组中暑的发生率分别为8.3%(2/24)和33.3%(8/24),差异具有统计学意义(P<0.01);药物预防组较对照组血清超氧化物歧化酶(SOD)水平升高,血清丙二醛(MDA)及血清内毒素降低,差异均有统计学意义(P<0 01);透射电镜观察药物预防组十二指肠粘膜微绒毛、细胞器、内质网基本正常,对照组十二指肠粘膜多数微绒毛紊乱,细胞器、内质网均有肿胀,免疫组化结果表明药物预防组HSP70表达较对照组明显升高.结论 谷氨酰胺联合维生素C可为小肠修复提供能量来源,提高热休克蛋白对小肠粘膜的保护作用,同时减轻氧化应激反应,从而保护小肠的屏障功能,降低肠源性内毒素血症发生.可用于中暑的预防性治疗.