益气活血法对舒张性心力衰竭大鼠心肌细胞钙稳态的影响

目的 研究不同比例益气活血药对舒张性心力衰竭(DHF)大鼠的疗效,探讨其对心肌细胞钙稳态的影响机制.方法 采用改良缩窄腹主动脉术制备压力负荷致DHF大鼠模型.将大鼠分为假手术组、模型组、益气组(黄芪3 g、党参1.5 g)、益气活血1:1组(黄芪3 g、党参1.5 g、丹参3g、三七1g)、益气活血2:1组(黄芪6g、党参3g、丹参3g、三七1g),每组20只,连续干预12周.治疗4、12周进行心功能检测,测量舒张期左室前壁厚度、舒张期左室后壁厚度、舒张期左室内径、左室射血分数和左室短轴缩短率及舒张早期跨二尖瓣血流速度(E)与舒张早期二尖瓣环运动幅度(e)比值(E/e);12周进行血流动力学检测,分别在静息状态和盐酸多巴胺负荷状态下记录左室压力下降速率、左室舒张末期压力(LVEDP)以评价左室舒张功能,记录左室压力上升速率,左室收缩压力(LVESP)以评价左室收缩功能,并记录心率及颈动脉压力;12周后处死大鼠,检测心肌细胞舒缩功能及钙转运情况,测量心肌细胞的收缩速率、舒张速率、收缩50％时间(CT50)和舒张50％时间(RT50);测定钙释放速率、钙回摄速率、钙释放50％时间(CaT50-on)和钙回摄50％时间(CaT50-off),分析钙瞬态数据;Western blot法检测钙转运相关蛋白钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)、蛋白激酶A(PKA)、16-丝氨酸位点磷酸化受磷蛋白(PLBS16)、17-苏氨酸位点磷酸化受磷蛋白(PLBT17)表达水平.结果 干预12周后,全部治疗组均改善大鼠舒缩功能LVEDP、RT50、CT50,益气活血2:1组改善舒张早期二尖瓣血流速度E峰/舒张早期二尖瓣环纵向运动速率e峰(E/e)比值、多巴胺负荷下LVEDP和逆转心室重构(降低左室前壁和后壁厚度).在细胞水平,全部治疗组均缩短心肌细胞CT50、RT50、CaT50-on和降低CaMKⅡ表达,两组益气活血治疗组还可降低PKA过表达,益气活血2:1组可降低CaT50-off和改善PLBS16低磷酸化.结论 益气和活血药物以2:1比例配伍比1:1配伍治疗DHF具有更好的疗效,其作用机制可能与调节钙转运有关.     

黄芪多糖对缺血再灌注损伤脐静脉内皮细胞抗氧化应激机制探讨

目的:探讨黄芪多糖对缺血再灌注损伤脐静脉内皮细胞氧化应激的影响。方法:将培养至5代的脐静脉内皮细胞随机分为正常对照组、模型组、模型+黄芪多糖组、模型+美托洛尔组,观察黄芪多糖对缺血再灌注损伤脐静脉内皮细胞活性、ROS、LDH、MDA含量、线粒体膜电位的影响。结果:与正常对照组比较,缺血再灌注损伤脐静脉内皮细胞ROS、MDA含量、LDH漏出率均显著升高,线粒体膜电位、细胞活性下降;黄芪多糖干预后,缺血再灌注损伤脐静脉内皮细胞ROS、MDA含量、LDH漏出率降低,线粒体膜电位、细胞活性升高。结论:黄芪多糖可能通过抑制自由基、脂质过氧化产物的生成,减少氧化应激而保护缺血再灌注损伤内皮细胞。     

黄芪党参对心肌梗死后心衰小鼠心肌复极时间的干预研究

目的研究益气药黄芪、党参对心肌梗死(myocardial infarction,MI)后心衰小鼠心肌细胞复极时间的干预作用。方法通过冠脉结扎术复制MI后心衰小鼠模型,采用随机数字表分为假手术组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、益气组[黄芪1.2g/(kg·d)+党参0.9g/(kg·d)配方颗粒溶液]、西药组[美托洛尔溶液8mg/(kg·d)]。术后灌胃干预4周。检测小鼠超声心动及心电图,分离心肌细胞,使用全细胞膜片钳技术记录分析心肌细胞动作电位。结果黄芪、党参可改善MI后心衰小鼠左室射血分数(P0.05),缩短MI后心衰小鼠QT间期(P0.01)及校正QT间期(P0.05),减少室性心律失常发生率,缩短MI后心衰小鼠心肌细胞复极时间(P0.05),并且缩短心肌细胞复极时间效果优于美托洛尔(P0.05)。结论益气药黄芪、党参可提高MI后心衰模型心肌复极速度,减少室性心律失常发生率,改善心功能和远期预后。     

益气复脉合剂抗心律失常作用机制研究

目的利用膜片钳技术阐述益气复脉合剂抗心律失常作用机制。方法采用胶原酶法急性分离大鼠左心室肌细胞,利用膜片钳技术,记录心室肌细胞动作电位。结果异丙肾上腺素(Iso)灌流前,中药组动作电位时程(APD)、APD50、APD90较空白对照组明显延长(P0.05);Iso灌流后,空白对照组与中药组APD较灌流前显著延长(P0.05或P0.01),空白对照组APD50、APD90较灌流前亦显著延长(P0.01);给Iso后,中药组APD、APD50、APD90较空白对照组显著缩短(P0.01)。结论益气复脉合剂可以缩短Iso引起的APD的延长,可能与抑制平台期Ca2+电流和复极后期K+电流有关。     

消瘀降脂胶囊对载脂蛋白E基因敲除小鼠颈动脉粥样硬化的干预作用

目的探讨消瘀降脂胶囊对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^-/-)小鼠血脂、颈动脉粥样硬化程度及斑块的影响。方法ApoE^-/-小鼠采用高脂饲料饲养,建立颈动脉粥样硬化模型。将ApoE^-/-小鼠按体重分为模型组、阿托伐他汀组及消瘀降脂胶囊低、高剂量组,每组22只。以12只C57BL/6Cnc小鼠为对照组,采用普通饲料喂养。阿托伐他汀组灌胃阿托伐他汀混悬液1.3 mg/kg,消瘀降脂胶囊低、高剂量组灌胃消瘀降脂胶囊混悬液325、975 mg/kg,对照组和模型组灌胃等体积的蒸馏水。按0.1 ml/10 g小鼠体重灌胃,1次/d,每周记录小鼠体重。连续灌胃12周后,检测小鼠血脂水平、肝脏指数。采用油红O染色和Van Gieson胶原纤维染色观察颈动脉病理学改变。结果与模型组比较,消瘀降脂胶囊高剂量组小鼠体重降低(P<0.05),血清TC[(25.92±4.21)mmol/L比(30.39±4.67)mmol/L]、LDL-C[(7.97±2.14)mmol/L比(10.26±1.97)mmol/L]水平降低(P<0.05),消瘀降脂胶囊低、高剂量组HDL-C[(0.31±0.07)mmol/L、(0.34±0.13)mmol/L比(0.26±0.09)mmol/L]水平升高(P<0.05)。病理结果显示,阿托伐他汀组及消瘀降脂胶囊高剂量组颈动脉脂质沉积阻塞比例低于模型组(P<0.05),且尚未形成血管斑块。结论消瘀降脂胶囊可降低ApoE^-/-小鼠血清LDL-C、TC水平,升高HDL-C水平,改善高血脂症状,减轻颈动脉狭窄程度,减缓颈动脉斑块生成。     

去甲乌药碱与6-姜酚对心肌细胞的正性肌力作用

目的:研究去甲乌药碱(higenamine)与6-姜酚(6-gingerol)单体及其配伍在正常心肌细胞的正性肌力作用.方法:急性分离成年SD大鼠左心室肌细胞,分别使用不同单体和单体间不同浓度的相互配伍作用于心肌细胞,使用Ion Optix单细胞收缩与离子测量系统检测细胞的最大收缩舒张速率(±dp/dt)、收缩幅度(ph/bl)、50％收缩舒张时间常数(T50S,T50D)的变化.结果:0.03 ～1 μmol·L-1去甲乌药碱能够浓度依赖性增强心肌收缩力和最大收缩舒张速率,起效浓度为0.1μmol·L-1,1 μmol·L-1能到最大效应,其使收缩幅度增加为234％,最大收缩速率增加为219％,最大舒张速率增加为272％,其对50％收缩舒张常数无影响,EC50约为0.205 μmol·L-,＞1 μmol·L-1即产生心肌毒性作用.3～30μmol· L-16-姜酚对心肌细胞收缩功能无显著影响,大于30 μmol·L-使心肌细胞产生不节律收缩.相互配伍不能增强去甲乌药碱的强心作用.结论:去甲乌药碱具有强心作用,与6-姜酚配伍不能显著增强去甲乌药碱的强心作用.     

芪参桃红颗粒对心力衰竭小鼠心肌重构的干预作用及对自噬相关miRNA的影响

目的：观察芪参桃红颗粒对压力负荷心力衰竭模型小鼠不同时期胸主动脉缩窄(Transverse Aortic Constriction，TAC)术后2周、4周心肌重构的干预作用及对自噬和相关微RNA（miRNA）的影响。方法：将90只C57小鼠随机分为：模型组(M组)、芪参桃红颗粒组(后简称QSTH，T组)、QSTH+雷帕霉素组(TR组)、QSTH+3-甲基腺嘌呤组(T3M组)、依那普利组(E组)，假手术组(S组)。于术后2周、4周，监测心功能，行苏木精-伊红(HE)染色、Masson染色、凋亡检测并定量分析，于透射电镜下观察左室组织自噬体形成情况，并对S组、M组、T组左室组织行miRNA测序并验证。结果：术后2周时，T组在提高左心射血分数方面优于其他组(P<0.05)，术后4周时，T组、E组在提高左室心射血分数方面优于其他组；除S组，其他组可见不同程度心脏几何形状变形、心肌肥厚。T组和E组相比较其他组，心肌纤维凋亡百分比更低(P<0.05)。除S组，其他组可见自噬滤泡、自噬体及自噬溶酶体，肌纤维细胞排列紊乱。M组相较于S组，测序结果提示新陈代谢通路、溶酶体通路与心肌自噬的联系非常密切并且其富集因子较高，具有显著的差异性；在T组较M组中，哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、溶酶体通路富集明显，与自噬密切相关。结论：QSTH有效改善由压力负荷导致的心力衰竭小鼠的心功能及其心肌重构，其作用机制可能是基于miRNA调节自噬通量以产生相应的保护作用。