人p58.2重组逆转录病毒载体的构建及稳定包装细胞系的鉴定

目的　构建并鉴定携带人p5 8 2基因的重组逆转录病毒载体及稳定的包装细胞系。方法　用PCR技术从pSPORT1-p5 8 2扩增出编码p5 8 2N端 1～ 3 45个氨基酸的全长基因 ,定向克隆入逆转录病毒载体pMSCVneo中 ,酶切鉴定 ;脂质体法将重组逆转录病毒转入包装细胞系PT67,G418筛选建立稳定产病毒的细胞株。结果　双酶切鉴定 ,成功构建重组逆转录病毒载体 ;重组逆录病毒载体转入包装细胞 ,经G418筛选 ,形成了抗性克隆 ,并测得病毒滴度为 3×10 5cfu/ml,提示构建携带人p5 8 2基因的逆转录病毒载体及稳定的包装细胞系成功。结论　构建人p5 8 2基因的逆转录病毒载体可行 ,并且可望成为一种很好的对血液系统疾病进行基因治疗的方法     

人自然杀伤细胞抑制性受体P58.2基因克隆与鉴定

目的：P58．2基因克隆与鉴定。方法：采用RT—PCR技术，从正常人外周血单个核细胞中扩增自然杀伤细胞抑制性受体P58．2基因全长cDNA，经酶切后构建重组克隆载体，双酶切和测序鉴定。结果：RT—PCR获得了预期的扩增产物P58．2全长cDNA，成功构建了pSPORT1-P58．2重组克隆载体，酶切、酶谱分析与预期结果相符。DNA测序结果与GenBank登记的人P58．2cDNA全长碱基序列一致。结论：pSPORT1-P58．2重组克隆载体构建成功；P58．2基因序列与文献报道一致，为下一步构建表达载体和基因转染等工作打下良好的基础。     

Tju103和CTLA4-Ig诱导MHC半相合小鼠骨髓移植耐受比较

目的：观察Tju103和CTLA4—Ig各自对MHC半相合小鼠骨髓移植免疫耐受的诱导。方法：半相合供鼠T细胞与受鼠抗原、Tju103(或CTLA4—Ig)共育后与骨髓细胞混合移植，观测移植后受情况。结果：A．单纯照射组：全部小鼠于照射后11d内死于造血衰竭；B．白血病CTX治疗组：全部小鼠于接种白血病细胞后16—23d死于白血病；C．单纯移植组：全部小鼠于移植后21d内死于移植物抗宿主病(GVHD)；D．CsA预防组：5只小鼠于移植后8—22d死亡，1只死于白血病，各有2只死于GVHD和感染，5只活过30d；E．Tju103处理组：4只小鼠于移植后9～26d死亡，2只死于GVHD，各有1只死于白血病和感染，6只活过30d；F．CTLA4—Ig处理组：2只小鼠于移植后17—26d死亡GVHD，8只活过30d。结论：Tju103和CTLA4—Ig均明显延长生存期，降低GVHD发生和严重程度，CTLA4—Ig保留有抗感染和移植抗白血病(GVL)作用，而Tju103没有。     

人p58.2重组逆转录病毒载体的构建及稳定包装细胞系的鉴定

目的　构建并稳定携带人p5 8.2基因的重组逆转录病毒载体及稳定的包装细胞系。方法　用PCR技术从pSPORT1 -p5 8.2扩增出编码p5 8.2N端 1～ 345个氨基酸的全长基因 ,定向克隆入逆转录病毒载体pMSCV neo中 ,酶切鉴定 ;脂质体法将重组逆转录病毒转入包装细胞系PT6 7,G4 1 8筛选建立稳定产病毒的细胞株。结果　双酶切鉴定 ,成功构建重组逆转录病毒载体 ;重线逆录病毒载体转入包装细胞 ,经G4 1 8筛选 ,形成了抗性克隆 ,并测得病毒滴度为 3× 1 0 5cfu/ml,提示构建携带人p5 8.2基因的逆转录病毒载体及稳定的包装细胞系成功。结论　构建人p5 8.2基因的逆转录病毒载体可行 ,并且可望成为一种很好的对血液系统疾病进行基因治疗的方法     

用于造血干细胞基因治疗的逆转录病毒载体

造血干细胞是理想的血液疾患基因治疗靶细胞,具有整合功能的逆转录病毒是应用最广泛的基因转载体。从莫洛尼小鼠白病毒衍生的逆转录病毒载体（ＭＬＶ）对人造血干细胞转染效率低、不能长期稳定表达,已成为开展造血干细胞基因治疗的障碍。本文就提高基因转移效率、改进ＭＬＶ载体特性和研究新的逆转录病毒载体等几方面的进展作一综述。     

人CD34分化抗原转录调控序列的克隆与调控表达

目的：克隆有特异调控活性的人ＣＤ３４基因５’端转录调控序列。方法：根据已知的ＣＤ３４抗原基因５’－端启动子调控序列,自行设计２对引物,用巢式－ＰＣＲ方法从染色体ＤＮＡ中成功的克隆６６１ｂｐ长度的ＣＤ３４抗原转录调控序列（ＣＤ３４ＴＲＳ,ＣＤ３４ＴＲＳ片段插入启动子报告质粒ｐＥＧＦＰ－１,观察重组质粒ｐＣＤ３４ＥＧＦＰ在造血系细胞和非造血系细胞中的调控表达作用。结果：经限制性内切酶酶切鉴定及ＤＮＡ序列分析证实,克隆的ＣＤ３４启动子序列与文献报道的顺序基本一致,能特异调探ＥＧＦＰ基因在造血细胞系细胞Ｋ５６２中表达。结论：所克隆的人ＣＤ３４分化抗原转录调控序列有特异调控真核基因表达作用,本研究为构建造血干细胞特异性表达载体奠定了基础。     

用于造血干细胞基因治疗的逆转录病毒载体

造血干细胞是理想的血液疾患基因治疗靶细胞,具有整合功能的逆转录病毒是应用最广泛的基因转移载体。从莫洛尼小鼠白血病病毒衍生的逆转录病毒载体(MLV)对人造血干细胞转染效率低、不能长期稳定表达,已成为开展造血干细胞基因治疗的障碍。本文就提高基因转移效率、改进MLV载体特性和研究新的逆转录病毒载体等几方面的进展作一综述。     

异基因MHC Ⅰ修饰对骨髓细胞的免疫学特性的影响

目的：观察异基因MHC Ⅰ修饰对骨镑细胞的免疫学特性的影响，探讨MHC Ⅰ类分子在诱导免疫耐受中的作用机制。方法：由逆转录病毒载体pMSCV介导，将BALB/C小鼠的MHC Ⅰ类分子H—2D^d基因导入C57BL/6小鼠的骨骼细胞，流式细胞仪检测转染后基因的表达。MTT法检测混合淋巴细胞反应，乳酸脱氢酶释放法测定BALB/C小鼠NK细胞对H-2D^d修饰后C57BL/6小鼠骨髓细胞的杀伤活性。结果：重组逆转录病毒感染的C57BL/6小鼠骨髓细胞对BALB/C小鼠脾细胞的刺激强度或应答程度，与未转染和空载体病毒感染的C57BL/6小鼠骨髓细胞相比都显著减弱。BALB/C小鼠NK细胞对转染H-2D^d基因后的C57BL/6小鼠骨髓细胞的杀伤显著降低。结论：在骨髓移植中用受者MHC Ⅰ分子修饰供者骨髓细胞可能诱导免疫耐受。     

人间充质干细胞对裸鼠体内造血重建影响的实验研究

间充质干细胞 (MSC)是骨髓中除造血干细胞和内皮祖细胞以外的另一种成体干细胞 ,有广泛的分化潜能 ,近年来其体内造血支持作用日益受到重视 ,我们对此进行了研究。材料和方法1　主要材料与仪器　骨髓取自胸科切除的非血液病患者肋骨。低糖DMEM干粉培养基为Gibco公司产品 ,胎牛血清为杭州四季青公司产品 ,BALB/c裸鼠购自广州南方医科大学动物中心 ,6～ 8周龄 ,雌雄不限 ,体重 18～ 2 3g,无病原菌条件下饲养。脐血取自广州南方医科大学附属珠江医院妇产科足月产妇 ,产前检测排除HIV、肝炎病毒等感染。CFU Mix甲基纤维素集落培养基Meth…     

TJU103联合CTLA4-Ig对T细胞表型和分泌细胞因子的影响

本研究应用HLA半相合供、受者间单向混合淋巴细胞培养 (MLC )体系 ,体外检测了联合应用TJU10 3和CTLA4 Ig对供者T细胞增殖以及表型和分泌细胞因子的影响。结果显示 ,单独应用TJU10 3和CTLA4 Ig均能够降低T细胞的增殖活性 ,二者联合应用具有明显的协同抑制增殖效应 ,并能够使CD4 + CD6 9+ /CD8+ CD6 9+ 比值降低 ,Th1型细胞因子 (TNF α ,IFN γ )分泌减少 ,Th2型细胞因子 (IL 4 )分泌增加。提示TJU10 3和CTLA4 Ig联合应用能够阻断供者T细胞激活的抗原和共刺激双信号通路 ,抑制T细胞的增殖活性 ,使CD4 + CD6 9+ /CD8+ CD6 9+ 比值降低 ,并能够调节Th细胞分化 ,诱导Th细胞免疫偏离 ,使辅助性T细胞更多地向Th2细胞方向分化 ,可以作为一条预防临床HLA半相合造血干细胞移植重度移植物抗宿主病 (GVHD )的新途径