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RT-PCR检测HCVRNA假阳性结果分析宋燕斌,崔晓红,潘卫,王锦红,戚中田丙型肝炎病毒(HCV)是新近认识的一种单股正链RNA病毒,在感染者外周血中的含量低[1],目前认为逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HCVRNA是诊断HCV感染的最敏... 相似文献
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目的;研制特异的抗GBV-C/HGV抗体诊断试剂。方法:PCR扩增GBV-C/HGV NS5基因片段并定向克隆至转座载体pFastBac HTa,转化DH10Bac感受态细胞,37℃振荡培养4h使发生转座,于三抗选择平皿筛选重组bacmid。脂质体介导转染sf9细胞,将转染上清再次感染sf细胞,以批量表达NS5重组蛋白。利用SDS-PAGE和Western blot方法分析,检测重组蛋白。结果:序 相似文献
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庚型肝炎病毒NS3蛋白在大肠杆菌中的表达 总被引:4,自引:0,他引:4
目的 获取具备免疫反应原性的庚型肝炎病毒NS3 抗原。方法 从重组质粒Iwq2利用PCR 反应扩增出GBVC/HGV NS3 基因片段,克隆至表达载体pPROEX HTa 后进行核苷酸序列测定,待鉴定正确后经IPTG 诱导重组工程菌,用SDSPAGE 和Western blot 对重组蛋白进行鉴定。结果 酶切鉴定和核苷酸序列测定结果表明成功地构建了重组工程菌pHTNS3/ DH5α且克隆的基因片段为GBVC/HGV NS3 基因片段。SDSPAGE 分析诱导表达产物发现在相对分子质量约43 810处有一条明显的蛋白表达带,占菌体总量的17 .7 % 。用NiNTA 亲和层析柱快捷地获得了纯化的重组蛋白。Western blot 鉴定发现重组蛋白可与GBVC/HGV RNA 阳性病人血清发生抗原抗体反应。结论 获得了具备免疫反应原性的GBVC/HGV NS3 抗原,该重组蛋白可用于GBVC/HGV 感染的检测。 相似文献
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宋燕斌 《国际生物制品学杂志》1995,(4)
作者发现,在冬季以色列国防部(IDF)献血员中的丙型肝炎病毒(HCV)抗体阳性率由0.4%增至0.8%,其中不少HCV血清阳性的献血员在6~11个月前献血时,血清阴性。已知各国防部队在初冬时接种过流感疫苗,故作者研究了流感疫苗对HCV血清学的影响。研究方法包括确定献血员的接种 相似文献
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慢性肝炎和肝癌病人血清中乙型肝炎病毒DNA的检测 总被引:5,自引:0,他引:5
为了了解慢性肝炎和肝癌病人患者体内乙型肝炎病毒(HBV)复制与HBV血清标志之间的关系,用酶联免疫吸附实验(ELISA)、聚合酶链反应(PCR)及斑点杂交方法对61例慢性肝炎和47例肝癌患者的HBV表面抗原(HBsAg)、相关e抗原(HBeAg)、表面抗体(抗-HBs)、核心抗体(抗-HBc)、相关e抗体(抗-HBe)进行了检测。结果表明:HBVDNA在HBsAg、HBeAg、/抗-HBc阳性的慢性肝炎和肝癌患者血清中的检出率分别为90.50%和50.00%;在HBsAg/抗-HBe、抗-HBc阳性者的检出率分别为45.40%和7.14%;在HBsAg阳性、HBeAg阴性/抗-HBe阴性者中的检出率分别为60.00%和40.00%;HBsAg阴性、/抗-HBc阳性或/抗-HBe阳性或/抗-HBs阳性者中的检出率分别为20.00%和22.22%;在血清学指标全阴性时,慢性肝炎和肝癌患者血清中HBVDNA的检出率均为0。实验提示:无论是肝炎或肝癌,在HBsAg、HBeAg同时阳性时,HBV复制最为活跃;在单独HBsAg阳性时,HBV有一定程度的复制;HBV复制在肝癌细胞中受到一定程度的抑制。 相似文献
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