超声复合微泡促进骨髓间充质干细胞归巢对大鼠前列腺炎的治疗作用

目的 研究静脉注射骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)对大鼠前列腺炎的治疗作用.方法 贴壁法分离、培养、扩增BMSCs.将50只SD大鼠按随机数字表法分为慢性细菌性前列腺炎(chronic bacterial prostatitis,CBP)组、CBP+BMSCs组、CBP+超声复合微泡(microbubble-enhanced therapeutic ultrasound,MEUS)组、CBP+ MEUS+ BMSCs组和正常对照组,每组10只.在小动物超声引导下向大鼠前列腺两侧叶内注射大肠埃希菌建立前列腺炎症模型,注入细菌1～14 d为急性炎症期,4～ 12周为慢性炎症期,对照组注入等量PBS.建模28 d后经静脉单纯注入BMSCs、单纯行MEUS及行MEUS+注入BMSCs,活体成像观察BMSCs向前列腺归巢情况.观察移植BMSCs 2周后大鼠前列腺组织病理学变化并作炎症评分,RT-PCR检测炎症因子IL-1β、TNF-α mRNA,ELISA检测IL-1β、TNF-α蛋白含量,统计分析各组表达差异.结果 前列腺组织病理学提示CBP组、CBP+ BMSCs组、CBP+ MEUS组前列腺呈典型炎症病理变化,腺管上皮增生,层次增加,炎细胞浸润,纤维组织增生,而CBP+ MEUS+ BMSCs组大鼠前列腺炎症明显减轻.RT-PCR检测结果提示CBP组炎症因子IL-1β(0.282±0.067)、TNF-α(0.631 ±0.116),CBP+BMSCs组IL-1[β(0.893 ±0.117)、TNF-α(0.876 ±0.137),CBP+ MEUS组IL-1β(0.683 ±0.097)、TNF-α(0.814±0.127)高于正常对照组IL-1β(0.282±0.067)、TNF-α(0.256±0.059)和CBP+MEUS+BMSCs组IL-1β(0.322±0.086)、TNF-α(0.313 ±0.079) (P ＜0.05);ELISA检测结果显示CBP组炎症因子IL-1β[(315.14±86.08) pg/mL]、TNF-α[(86.41 ±24.32) pg/mL],CBP+BMSCs组IL-1 β[(278.87±72.04) pg/mL]、TNF-α[(67.77±16.98) pg/mL],CBP+ MEUS组IL-1 β[(321.24 ±93.12) pg/mL]、TNF-α[(79.14±19.17) pg/mL]含量均显著高于正常对照组[IL-1β(43.36±11.35) pg/mL、TNF-α(13.26±3.97) pg/mL]和CBP+MEUS+BMSCs组[IL-1 β (65.34±17.23) pg/mL、TNF-α(19.94±5.37) pg/mL],差异有统计学意义(P＜0.01),而CBP+ MEUS+ BMSCs组与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 超声复合微泡促进BMSCs向前列腺归巢,能够减轻前列腺炎症反应,可能为前列腺炎的治疗带来新策略.     

不同浓度大肠杆菌制作大鼠慢性细菌性前列腺炎模型探讨

目的采用不同浓度大肠杆菌制作慢性细菌性前列腺炎模型。方法选取SD大鼠36只,每组12只,随机分为空白对照组、低浓度组和高浓度组。高浓度及低浓度组给予相同剂量不同浓度的大肠杆菌注射大鼠前列腺,空白对照组注射等量生理盐水,4周后切片观察并做炎症评分及细菌检测。结果高浓度组4只大鼠死亡,高浓度以及低浓度组炎症评分均高于空白对照组(P0.05)。结论低浓度组使用的细菌浓度更符合慢性细菌性前列腺炎的病理表现,且动物死亡率低,适用于大鼠慢性细菌性前列腺炎模型的建立。     

RDP1258对大鼠脾细胞增殖及HO-1活性的抑制作用

目的 :观察一种新型HLA衍生肽 (RDP12 5 8)的免疫抑制作用 ,并探讨其机制。方法 :用化学方法合成一种HLA衍生肽(RDP12 5 8) ,以3 H TdR掺入法观察其在体外对大鼠脾细胞增殖的影响 ;以酶化学法观察其对脾细胞血红素氧合酶 1(hemeoxygenase 1,HO 1)活性的影响。结果 :RDP12 5 8可显著抑制大鼠脾细胞增殖并以剂量依赖的方式降低HO 1的活性。结论 :RDP12 5 8能够显著抑制丝裂原或同种抗原刺激所致大鼠脾细胞的增殖反应 ,其抑制作用可能是通过降低HO 1活性而实现的     

移植免疫耐受与HLA衍生肽

随着免疫学和现代分子生物学等技术的发展，器官移植已成为拯救许多终末期器官功能衰竭患者生命的有效手段。由于供受者MHC分子多态性差异而引起的免疫排斥反应，使得其成功率仍不令人满意。尽管新型免疫抑制剂降低了排斥反应的发生率，但因长期服用免疫抑制剂所引起的诸如     

逆转录病毒转染法建立耐药性人膀胱癌细胞系

目的 建立高效、稳定的人膀胱癌多药耐药性细胞模型。方法 应用逆转录病毒转染法建立人膀胱癌耐药性细胞模型;ＭＴＴ法检测细胞系在不同化疗药物作用下的生存率。免疫组化检测肿瘤的Ｐ－ＧＰ表达,原位杂交检测肿瘤细胞ｍｄｒ１ ｍＲＮＡ的表达量,ＰＣＲ检测ｍｄｒ１基因转移至细胞基因组片段。结果 转基因细胞系对阿霉素、秋水仙素的耐药性分别提高８倍和２１倍,免疫组化示转基因细胞系Ｐ－ＧＰ表达量增强,原位杂交结果示肿     

瘤体内注射逆转录病毒上清液介导体内基因导入

目的：探讨逆转录病毒上清液瘤内及瘤周注射介导体内基因导入。方法：应用逆转录病毒上清液裸鼠皮下移植内及瘤周注射法导入多药耐药基因（mdrl),腹腔注射化疗药物观察肿瘤模型的耐药性,免疫组化检测肿瘤细胞P-糖蛋白的表达RT－PCR检测肿瘤内mdrl mRNA的表达量。结果：携带mdrl基因的逆转录病毒上清液注射后肿瘤表现出多药耐药性,高滴度病毒上清液可达到60％细胞表达P－GP;RT－PCR表明,基因转移后肿瘤组织内mdrl mRNA的表达量明显增加。结论：逆转录病毒上清液瘤内及瘤周注射,可发生部分肿瘤细胞的基因转移,高滴度的病毒上清液具有较高的基因转移率。     

体内基因转移建立多药耐药性人膀胱癌裸鼠荷瘤模型

目的 建立人膀胱癌多药耐药性裸鼠荷瘤模型。方法 应用逆转录病毒上清液裸鼠皮下移植瘤内及瘤周注射法转移ｍｄｒ１基因,腹腔注射化疗药物观察肿瘤模型的耐药性,免疫组化检测肿瘤细胞Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ＧＰ）的表达,ＲＴ－ＰＣＲ检测肿瘤内ｍｄｒ１ ｍＲＮＡ的表达量。结果 携带ｍｄｒ１基因的逆转录病毒上清液注射后肿瘤模型产生多药耐药性,经过滤和离心浓缩的病毒上清液６０％细胞表达Ｐ－ＧＰ,是病毒原液基因转移率的２倍     

HSV-TK/GCV系统体外对膀胱癌细胞的旁观杀伤作用

目的 探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV－TK）基因联合羟基无环鸟苷（GCV）对膀胱癌细胞的旁观杀作作用及其机制。方法 将转染HSV－TK基因的膀胱癌细胞（BIU 87－TK）分别与人膀胱癌细胞（BIU 87、T 24）和鼠膀胱癌细胞（T 739）混合培养。在GCV作用下,观测细胞的存活情况及BIU 87－TK条件培养液和细胞死亡裂解对共培养细胞的影响。结果 当BIU 87－TK细胞占50％时,共培养细胞对GCV的敏感性与100％ BIU 87－TK细胞一致。表明每个表达HSV－TK基因的细胞能杀死至少一个不含HSV－TK基因的膀胱癌细胞。BIU 87－TK细胞的条件培养液对BIU 87亲本细胞的生长无影响。G 418诱导的细胞裂解与对其共培养的BIU 87－TK细胞无旁观毒性作用。结论 HSV－TK／GCV对膀胱癌细胞产生的“旁观者”效应是该系统特异性的毒性作用。“旁观者”效应不仅可在人膀胱癌不同细胞株之间产生,而且不局限于某一种属的膀胱癌细胞之间。     

兔自体骨髓间充质干细胞移植对冷缺血再灌注损伤肾脏细胞增殖与凋亡和肾功能的影响

目的:建立兔肾脏冷缺血再灌注损伤(Ischemia-reperfusion injury,IRI)模型,观察经肾动脉灌注移植的自体骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)对IRI肾脏细胞增殖与凋亡的影响,探讨其保护作用机制.方法:45只兔随机均分为假手术组(I组)、对照组(Ⅱ组)和移植组(Ⅲ组)(n=15).分离移植组兔BM-MSCs,建立肾脏IRI模型后,移植组于肾血流恢复后经肾动脉推注自体BM-MSCs.对照组和假手术组同法推注等最生理盐水.分别于术后3、7、14d 3组各随机取5只经耳缘静脉采血,检测血清肌酐(Crea)和尿素(Urea),观察肾功能情况;同时取肾组织进行增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2、Bax免疫组化染色,TUNEL法检测肾脏凋亡细胞,计算Bcl-2、Bax含量和肾小管上皮细胞增殖指数(Proliferating cell nuclear antigen index,PI)和凋亡指数(Apoptosis index,AI).结果:IRI后第3 d移植组和对照组兔Crea和Urea均达到最高水平[移植组:(297.9±18.6)μmol/L,(19.2±1.5)mmol/L;对照组:(326.6±20.O)μmol/L,(22.6±2.6)mmol/L],以后逐渐下降,到第14d,移植组Crea和Urea分别为(224.1±19.2)μmol/L,(13.9±1.6)mmol/L;对照组Crea和Urea分别为(278.6±16.9)μmol/L,(17.4±1.0)mmol/L,各时间点移植组Crea和Urea明显低于对照组(P<0.05).各时间点移植组Bcl-2含量和肾小管上皮细胞PI高于对照组,Bax含量和肾小管上皮细胞AI低于对照组,两组间差异有统计学意义(P<0.05).结论:BM-MSCs移植能促进肾脏I/R损伤后肾脏细胞增殖,抑制肾脏细胞凋亡,从而降低血清Crea和Urea,在一定程度上促进IRI后肾功能的恢复.     

应用钛轮钉机械吻合对比手工吻合肾移植动脉的临床研究

目的:本研究应用钛轮钉血管吻合器作肾移植动脉重建术,以确定其能否快捷而安全地完成大血管吻合.方法:75例因慢性肾衰而接受同种异体肾移植病人,36例采用血管吻合器行供肾动脉与髂内动脉端端吻合术,另39例采用间断缝合端端吻合肾动脉与髂内动脉.然后比较分析两组的动脉吻合时间,血管阻断时间,整个手术时间和血管并发症.结果:钛轮钉吻合移植肾动脉全部成功.钛轮钉的动脉吻合时间为(710±6.1)min,缝合组是(16.1±7.2)min(P<0.01),血管阻断时间分别为(17.8±6.0)min,(28.1±6.8)min(P<0.05);手术总时间分别为(2.2±0.9)h,(2.5±1.2)h(P>0.05).用2mm钛轮钉,2只肾下极动脉与腹壁下动脉吻合成功.手术无1例大出血而重新吻合,吻合口通常率达到100%.61例获得随访,随访时间2～5年.吻合器组发生移植肾动脉狭窄1例,而缝合组有3例出现此并发症.结论:血管吻合器吻合血管安全、简便、快捷,血管外翻吻合,内膜对合平整.应用此技术吻合动脉可缩短热缺血时间,降低肾动脉狭窄的发生,因此可提高肾移植效果.