基础医学实验室仪器设备科学管理的思考

充分发挥基础医学实验室培育人才的重要作用,推动教学科研同步发展,必须不断强化基础医学实验室科学管理,健全仪器设备全生命周期各环节的管理制度,提升实验室仪器设备的使用价值并发挥其效益的最大化。文章结合汕头大学医学院在开展生物化学与分子生物学实验室建设中,强化对本科生人才培养的实践,系统阐述了加强基础医学实验室仪器设备科学管理多个层面上的思考。     

酵母双杂交筛选NGAL相互作用蛋白

目的:中性粒细胞明胶酶相关脂萼蛋 白(neutrophilgelatinase assiociatedlipocalin, NGAL)功能不明,籍筛选与之相互作用蛋白, 构筑相互作用图谱,为揭示其功能提供新途径。 方法:利用蛋白质相互作用原理,应用酵母双杂 交技术,构建pGBKT7 NGAL载体,以NGAL 为诱饵,在人类骨髓cDNA文库中筛选与之相 互作用蛋白的基因。结果:通过酵母交配筛库、 一对一验证和β gal分析筛选出40个阳性克 隆;测序,利用网上数据库(http://www.ncbi. nlm.nih.gov)对序列进行比对,初步确定了31 种基因,其中11种为未知基因,20种为已知基 因。已知基因中含有编码区的有LGALS1、 MT2A、COX1、RNP24、ATP1B3、IGL、IGH VDJ、RARRES2、GYPA、NEB和NPC2。结论: 筛选得到31种可能与NGAL相互作用蛋白的 基因,这为研究NGAL功能及作用机制提供了 新途径。     

酵母单杂交筛选实验中的关键问题

目的 酵母单杂交系统是研究生物大分子DNA和蛋白质间相互作用的有效手段之一，酵母单杂交筛库实验是获取可以和诱饵序列相互作用的反式作用因子的关键。方法 酵母单杂交诱饵质粒pHISi3NF转化YM4271；通过不同浓度3-AT实验，获得酵母单杂交用宿主细胞YM4271pHISi3NF4；大规模筛选人食管癌细胞cDNA文库。结果 经筛库后续验证实验证实得到阳性克隆。结论通过准确确定3-AT的工作浓度，有效地完成了酵母单杂交的大规模筛选人食管癌细胞cDNA文库的实验。     

酵母单杂交筛选人食管癌细胞系SHEEC中NF-kappa B元件结合蛋白

背景与目的：从食管癌细胞cDNA文库中筛选能够特异性结合NF-kappa B核心元件的蛋白质分子,探讨NGAL基因的表达调控机制,探寻NGAL基因在食管上皮细胞癌变中过表达的原因。材料与方法：应用酵母单杂交系统,以三重NF-kappa B元件寡聚核苷酸串为诱饵,对人食管癌细胞系SHEEC cDNA酵母杂交文库进行筛选,应用DNA测序及生物信息学技术对筛选克隆进行分析。结果：共获得30个阳性克隆,包括4种编码蛋白,2个hypothetical protein,2种线粒体基因,3类非编码RNA等。结论：应用酵母单杂交手段筛选出食管癌细胞NF-kappa B核心元件结合蛋白,但只是一种初步的实验,还需进一步研究证实。