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目的 克隆并表达结核分枝杆菌 HtpG 分子,并鉴定其免疫反应性。 方法 采用聚合酶链式反
应扩增结核分枝杆菌 H37Ra HtpG 基因,并克隆至 pET22b 质粒,测序筛选到重组成功的质粒。 重组质粒
pET22b - HtpG 转化大肠埃希菌 BL21(DE3),表达的 HtpG 重组蛋白通过镍柱纯化。 Western blot 鉴定表达
蛋白,并使用 HtpG 重组蛋白经 ELISA 法检测肺结核患者血清特异性抗体水平。 结果 成功构建了 pET22b
- HtpG 重组质粒; 在大肠埃希菌中表达出分子质量约 73kDa 的重组蛋白。 Western blot 鉴定该重组蛋白具
有良好免疫反应性,ELISA 法检测肺结核患者血清中存在特异性抗 HtpG 抗体。 结论 在大肠埃希菌内成功
表达 HtpG 重组蛋白,为将该蛋白用于结核免疫诊断试剂的研制奠定了基础。 相似文献
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目的 建立基于“染料-蜡丸”的目视LAMP检测恙螨中恙虫病东方体的方法,为恙虫病的防治提供新工具。方法 选择Ot GroEL 基因作为检测靶序列,在线设计并合成LAMP引物。构建rOt-GroEL 重组质粒作为阳性对照。建立基于SYBR Green I的“染料-蜡丸”目视LAMP,并联合便携式LAMP仪使其利于现场应用。结果 新设计的引物针对Ot GroEL 基因的237 bp靶区域,所构建的重组质粒rOt-GroEL 测序结果正确。在便携式LAMP仪上运用“染料-蜡丸”目视LAMP法,其检测下限为1×102 拷贝质粒。结论 成功建立了一种可与便携式LAMP仪联合使用的检测恙螨体内恙虫病东方体的“染料-蜡丸”目视LAMP法。 相似文献
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