大蒜素对MRSA和白念珠菌后效应的研究

目的 测定大蒜素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和白念珠菌(C.alb)的最低抑菌浓度(MIC)、抗菌药后效应(PAE)和抗菌后亚抑菌浓度效应(PASME).方法 取临床分离的MRSA和C.alb各1株,以肉汤稀释法测定大蒜素MIC;以菌落计数法测定菌落形成单位(CFU),根据CFU做生长曲线,计算PAE和PAS...     

南京地区社区成年健康人群鼻咽部机会致病菌携带情况调查

目的了解南京地区社区成年健康人群鼻咽部机会致病菌携带情况。方法对南京地区社区1019例成年健康者进行非感染状态下鼻咽拭子菌种鉴定。结果鼻咽部检出率较高的机会致病菌依次为凝固酶阴性葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、嗜血杆菌属、肺炎链球菌和肺炎克雷伯杆菌;单一菌群携带率为30.7%,复合致病菌携带率为3.4%,总携带率为34.2%;随年龄增长,金黄色葡萄球菌、嗜血杆菌属的检出率显著降低(P<0.05)。结论南京地区社区健康成年人群鼻咽部普遍存在大量凝固酶阴性葡萄球菌,同时金黄色葡萄球菌、嗜血杆菌属、肺炎链球菌和肺炎克雷伯菌等亦有较高检出率。     

血培养阳性标本直接细菌鉴定和药敏中应用分离胶试管的方法探讨

目的探讨血培养的细菌快速鉴定和药敏实验,与常规法(转种后取得的纯菌落鉴定及药敏试验)的符合率。方法血培养仪器报警阳性后,无菌吸取一定量的培养液至含分离胶的试管中,2 000 rpm离心15 min后吸取分离胶上层含菌液体,直接进行细菌鉴定和药物敏感试验;同时与转种后取得的纯菌落鉴定及药敏试验常规方法结果进行比较。结果 66株血培养阳性标本离心集菌直接鉴定和转种菌落常规鉴定结果符合率达85%以上;药敏试验结果符合率>95%。离心集菌法比常规法提前近24 h。结论血培养阳性标本使用分离胶的试管离心集菌后直接进行细菌鉴定及药敏试验,可以缩短检验时间,且与常规法的实验结果符合率高。     

发现大肠埃希菌喹诺酮耐药株gyrA基因新亚型和aac（6′）-Ⅰ b-Cr、mdfA基因

目的 了解大肠埃希菌(E.coli)对常用抗菌药物的耐药性及喹诺酮类DNA旋转酶基因、多药外排基因及氨基糖苷类修饰酶基因（AMEs）的存在情况。 方法 收集2006年1月~2008年10月本院临床标本分离的E.coli 60株,用K-B法检测细菌对16种抗菌药物的敏感性,用PCR及测序技术分析6种喹诺酮类基因(gyrA、qnrA、qnrB、qnrS、qepA、mdfA)和1种AMEs基因aac(6′)-Ⅰ b。 结果 60株菌对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率均为78.4%（47/60）;55株菌存在gyrA基因突变,其中3株菌gyrA与美国NCBI中已登录的gyrA基因序列不同,为新亚型;mdfA基因均阳性;对9株aac(6′)-Ⅰ b基因PCR阳性产物进行测序,证实5株携带aac（6′）-Ⅰ b-Cr双功能酶基因。 结论 gyrA基因突变是E.coli对喹诺酮类药物最主要的耐药机制,耐喹诺酮类药物的E.coli株中发现aac（6′）-Ⅰ b-Cr基因和gyrA新亚型,E.coli检出mdfA基因为中国大陆地区首次报道。     

Xpert艰难梭菌检测系统的临床应用评价

目的评估Xpert艰难梭菌检测系统的临床应用价值。方法选取43份腹泻粪便标本,采用厌氧培养法、VIDAS检测A/B毒素法和Xpert艰难梭菌检测系统检测艰难梭菌,以产毒培养法作为金标准对检测方法进行评价,并比较不同检测方法对临床标本检测结果的一致性。通过自配027型标准菌株模拟粪便标本,验证Xpert艰难梭菌检测系统筛选027型流行株的能力。结果以产毒培养法为金标准,Xpert艰难梭菌检测系统的敏感性和特异性分别为90.9%和93.8%,阳性和阴性预测值分别为83.3%和96.8%。与产毒培养法结果一致性检验Kappa值为0.822(P0.05),与VIDAS检测A/B毒素法结果一致性检验Kappa值为0.419(P0.05);027型标准菌株模拟粪便标本检测结果阳性并报告为027型。结论 Xpert艰难梭菌检测系统能够快速准确地检测粪便标本中的艰难梭菌相关基因,且能准确报告027型高产毒力菌株。     

六家医院整合子介导宋内志贺菌多重耐药的形成和传播机制研究

目的 探讨我国多个地区宋内志贺菌的同源性与整合子介导其耐药的机制.方法 连续收集2010年我国六家医院分离的22株宋内志贺菌,采用纸片扩散法测定其对抗菌药物的敏感性.采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子同源性检测,PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)进行整合子检测及分类,联合RFLP和DNA测序技术分析整合子携带的耐药基因.结果 宋内志贺菌多重耐药率高达90.9％ (20/22),对四环素和复方磺胺甲噁唑耐药率最高,为95.5％,对青霉素类抗生素(氨苄西林、哌拉西林、阿莫西林)也呈高水平耐药,耐药率分别为86.4％,90.9％和90.9％.PFGE聚类分析结果显示,22株宋内志贺菌可分为10种PFGE亚型,且均属于同一群,其中优势型为F6型,在济南、长春和上海三市传播.59.1％(13/22)的宋内志贺菌中检出Ⅰ类整合子,其中7株Ⅰ类整合子阳性菌株可变区扩增阳性;86.4％(19/22)的宋内志贺菌检出Ⅱ类整合子,Ⅱ类整合子可变区扩增全部阳性;未检测到Ⅲ类整合子.22株宋内志贺菌中仅有1株(4.5％)检测到非典型Ⅰ类整合子,其可变区扩增亦阳性.DNA测序发现Ⅰ类整合子中携带耐药基因盒dfrA17-aadA5,Ⅱ类和非典型Ⅰ类整合子可变区分别携带耐药基因盒dfrA1-sat1-aadA1和bla oxa-30-aadA1.结论 多重耐药宋内志贺菌在我国不同地区间传播,整合子在宋内志贺菌中广泛存在,参与多重耐药的形成.     

双侧双瓶血培养在临床应用的初步研究

目的探讨双侧双瓶血培养在临床应用的必要性。方法采用全自动血培养仪对2010年4月～2011年4月南京医科大学第一附属医院血液科送检的693份血液标本进行培养,对双侧双瓶、单侧双瓶和单侧单瓶血培养的真阳性率和污染率分别进行统计学分析。结果 308份双侧双瓶标本中,有44份培养出细菌,其中37份为有意义阳性标本,真阳性率为12.0%(37/308),污染率为2.3%(7/308);320份单侧双瓶标本中,阳性标本31份,有意义的阳性标本23份,真阳性率为7.2%(23/320),污染率为2.5%(8/320);65份单侧单瓶标本中,有7份细菌生长,其中4份为凝固酶阴性葡萄球菌生长,真阳性率为4.6%(3/65),污染率为6.2%(4/65)。双侧双瓶血培养真阳性率明显高于单侧双瓶(χ2=4.051,P<0.05)及单侧单瓶,但与后者比较无统计学意义。3种培养方法污染率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论双侧双瓶血培养可提高血培养阳性率,且并不增加污染率。推广双侧双瓶血培养在临床应用有一定价值。     

2008—2017年脑脊液病原菌分布和药物敏感性分析

目的：统计分析2008—2017年南京医科大学第一附属医院临床送检脑脊液培养标本中主要病原菌分布及药物敏感性情况。方法：细菌鉴定、药物敏感试验和真菌鉴定采用 VITEK?2 Compact 全自动微生物鉴定及药敏系统,链球菌药敏为纸片扩散法（K?B 法）,真菌药敏试验采用 ATB FUNGUS 3 方法,WHONET 5.6 软件进行统计分析。结果：2008—2017年南京医科大学第一附属医院脑脊液标本培养阳性率为6.0%,前5位的病原菌分别是鲍曼不动杆菌（35.8%）,凝固酶阴性葡萄球菌（11.3%）,肺炎克雷伯菌（9.3%）,铜绿假单胞菌（5.8%）,大肠埃希菌（5.1%）和新型隐球菌（5.1%）。鲍曼不动杆菌对常见抗菌药物敏感性均较低,肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗菌药物最敏感（>55.0%）,铜绿假单胞菌对除氨曲南之外的抗菌药物均有较好的敏感性（>46.7%）,革兰阳性球菌对万古霉素、利奈唑胺、替考拉宁敏感性较好,新型隐球菌对常见抗真菌药物均有较好的敏感性（>90.0%）。结论：2008—2017年脑脊液标本中,革兰阴性杆菌在中枢神经系统感染中占重要地位,应重点防范多重耐药菌的感染,尤其是鲍曼不动杆菌。统计并分析脑脊液常见病原菌和药物敏感性可为本地区临床医生合理用药提供理论依据。     

硝酸益康唑对葡萄球菌体外抗菌活性的研究

目的为了解和评价硝酸益康唑在体外对葡萄球菌的抗菌活性和效果,以及其与6种临床常用抗菌药物对葡萄球菌抗菌活性的比较。方法从湿疹和特应性皮炎患者皮损处分离的257株葡萄球菌,采用肉汤稀释法对硝酸益康唑、新霉素、青霉素、红霉素、环丙沙星、阿米卡星和头孢噻肟进行最小抑菌浓度测定。结果对甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),益康唑与新霉素、环丙沙星、阿米卡星、头孢噻肟MIC50值相近;对MRSA,益康唑MIC50明显低于其他6种抗菌药物;对甲氧西林敏感的表皮葡萄球菌(MSSE)MIC50与青霉素、环丙沙星、阿米卡星相同,低于新霉素、红霉素、头孢噻肟;对MRSE,益康唑的MIC50与青霉素、新霉素、环丙沙星、阿米卡星接近,低于头孢噻肟和红霉素。益康唑的MIC50和MIC90值相近。结论益康唑对葡萄球菌有明显的抗菌效果,益康唑的MIC50与MIC90值相近,目前未明显出现葡萄球菌对益康唑的耐药现象。     

靶向PCSK9基因shRNA慢病毒载体的构建及其对PCSK9基因表达的沉默

目的设计以PCSK9基因为靶点的短发夹状RNA（shRNA）,构建重组慢病毒载体并鉴定此RNA干扰体系对PCSK9基因表达的影响。方法将3条人PCSK9基因的shRNA片段插入至慢病毒载体pLentilox3．7,与pCDNA3-hPCSK9．FLAG质粒用Lipofectamine2000共转染293细胞,Western blotting法鉴定出最有效的shRNA。此重组质粒与pCre—VSV-G、pLoxp．CMV—R8．91经293细胞包装后,产生的重组慢病毒感染293细胞,48h后转染pCDNA3．hPCSK9-FLAG质粒,Western blotting法检测人PCSK9基因表达的情况。结果经双酶切鉴定,构建了PCSK9shRNA慢病毒载体pLentilox—hPC—SK9,鉴定出hshRNA-2为最有效的shRNA。重组的慢病毒能明显的抑制人PCSK9的表达。结论慢病毒介导的shRNA干扰技术可特异性的阻断PCSK9的表达,为进一步探讨PCSK9特异性的shRNA治疗脂代谢异常疾病奠定了基础。