HLA-Cw研究进展

HLA—Cw属于经典的HLA—Ⅰ类基因，HLA—Cw分子与HLA—A、B分子一样具有高度多态性，广泛分布于有核细胞表面，不仅呈递内源性多肽给CD8^ T细胞，诱发特异性细胞杀伤效应，还可作为NK细胞免疫球蛋白样受体(KIR)的配体参与免疫反应。因此，HLA—Cw与疾病相关性研究、在移植免疫、抗病毒、抗肿瘤免疫中的作用日益受到重视。     

供者表达活化性杀伤细胞免疫球蛋白样受体对造血干细胞移植预后的影响

目的 观察供者表达活化性杀伤细胞免疫球蛋白样受体（aKIR）对受者造血干细胞移植（HSCT）预后的影响。方法 1996年至2001年共行亲缘性人类白细胞抗原（HLA）全相合骨髓移植59例，以序列特异性引物多聚酶链反应法（SSP-PCR）检测供者aKIR的表型。分析供者表达aKIR对受者移植后病毒、细菌和真菌感染及出血、复发、存活情况的影响。结果 供者表达aKIR与受者移植后出血、病毒及细菌感染发生的概率无明显相关性；当供者表达KIR3DS1表型时，发生真菌感染概率增高（X^4．804，P=0．028）。供者表达aKIR对受者HSCT后存活率和白血病复发率均无明显影响。结论 亲缘性HLA全相合HSCT中，供者表达aKIR并不能改善受者的移植效果。     

广东汉族人群HLA-Cw多态性及单体型分析

目的检测广东汉族人群HLA．Cw及HLA-A、B、DRB1基因频率，分析该人群HLA-Cw等位基因多态性及其单体型特点。方法骨髓移植供者185例，抗凝血提取DNA，半量全自动PCR-RSSO分型检测HLA-A、B、Cw、DRB1基因型。结果在分辨水平检出Cw等位基因11个，其中分布频率较高的依次为：Cw*03(0．2580)、Cw*07(0．1887)、Cw*01(0．1732)、Cw*08(0．1070)。统计分析呈现显著连锁不平衡的HLA-Cw．A单体型7个，HLA-Cw-B单体型20个，HLA—Cw．DRB1单体型10个。结论广东汉族群体HLA-Cw基因具有较为丰富的多态性，其与HLA-A、B、DRB1间连锁不平衡单体型具有地区性遗传特征。     

应用伊曲康唑预防化疗后继发真菌感染的疗效

目的探讨应用伊曲康唑预防恶性血液病化疗后继发真菌感染的疗效。方法将入院治疗的114例恶性血液病患者随机分为对照组及预防用药组,观察2组发生真菌感染的次数。结果用伊曲康唑预防组,52例仅2例并发真菌感染,继发真菌感染率为仅为3.8%。而对照组62例中,8例发生真菌感染,真菌发生为12.8%,两组比较,统计学有显著差异(P<0.05)。结论化疗前口服伊曲康唑可以减少恶性血液病患者化疗后并发真菌的感染率。     

人自然杀伤细胞抑制性受体P58.2基因克隆与鉴定

目的：P58．2基因克隆与鉴定。方法：采用RT—PCR技术，从正常人外周血单个核细胞中扩增自然杀伤细胞抑制性受体P58．2基因全长cDNA，经酶切后构建重组克隆载体，双酶切和测序鉴定。结果：RT—PCR获得了预期的扩增产物P58．2全长cDNA，成功构建了pSPORT1-P58．2重组克隆载体，酶切、酶谱分析与预期结果相符。DNA测序结果与GenBank登记的人P58．2cDNA全长碱基序列一致。结论：pSPORT1-P58．2重组克隆载体构建成功；P58．2基因序列与文献报道一致，为下一步构建表达载体和基因转染等工作打下良好的基础。     

广东汉族人群HLA-Cw基因多态性分析

检测HLA Cw在广东汉族人群中的基因频率 ,与其他人群进行比较 ,分析该人群HLA Cw等位基因多态性及其特点。骨髓移植供者 15 8例 ,抗凝血提取DNA ,半量全自动PCR RSSO分型检测Cw。结果显示 ,广东汉族人群HLA Cw基因频率分布由高至低依次为 :Cw 0 3(0 2 5 80 ) >Cw 0 7(0 1887) >Cw 0 1(0 1732 ) >Cw 0 8(0 10 70 ) >Cw 14 (0 0 6 5 4 ) >Cw 0 4(0 0 5 87) >Cw 15 (0 0 4 5 3) >Cw 12 (0 0 387) >Cw 0 6 (0 0 32 2 ) >Cw 0 5 (0 0 12 7) >Cw 16 (0 0 0 32 )。Hardy Weinberg平衡检验 χ2 =6 0 35 ,υ =5 4 ,P >0 1。表明广东汉族群体Cw 0 3、 0 7、 0 1、 0 8出现频率较高 ,该人群Cw等位基因处于遗传平衡状态 ,具有较为丰富的多态性及特点。     

79例广东汉族人群HLA-Cw及其KIR分析

目的：了解HLA—Cw与相应刺激性KIR（杀伤细胞免疫球蛋白样受体）和抑制性KIR在广东汉族人群中的分布。方法：对79例广东汉族骨髓移植供者，以DNA技术检测HLA-Cw和KIR表型。根据对KIR识别的特异性，将HLA-Cw分为HLA-Cw^lys.HLA-Cw^asn，分析个体HLA-Cw与相应刺激性或抑制性KIR的识别情况。结果：本组人群中，HLA-Cw^lys、HLA-Cw^asn的频率分别为26．6％、97．5％。表达KIR2DL1而无栩应配体者62．0％，表达2DS1而无相应配体者15．1％。27．8％表达HLA-Cw^asn而不表达相应KIR。25．3％、55．6％有抑制性HLA-Cw^lys或HLA-Cw^asn配体受体对，1．3％和14．0％的个体单独表达刺激性HLA-Cw^lys扣或HLA-Cw^asn配体受体对。15．1％的个体表达KIR2DS1而不表达HLA-Cw^lys。结论：在广东汉族人群中，存在KIR表型与自身HIA表型分离现象。抑制性HIA-Cw-KIR配对表达高于刺激性配对，约1／5单独表达刺激性HLA-Cw—KIR配对。     

同种异体NK细胞对不同肿瘤细胞的体外杀伤活性及其机制的初步探讨

为了观察同种异体NK细胞对不同肿瘤细胞的体外杀伤活性,并初步探讨其分子机制。以K562细胞为对照,应用LDH释放法检测不同效靶比时同种异体NK细胞杀伤CNE2、KG1a和U251细胞的活性。应用RT-PCR和流式细胞仪分别检测4种细胞MHCI类链相关分子(MICA/B)和人巨细胞病毒糖蛋白UL16结合蛋白(ULBP1~3)基因和分子的表达情况。效靶比20∶1时用AMO-1、BMO-1、M295、M310和M551单抗分别阻断肿瘤细胞表面MICA、MICB、ULBP1、ULBP2和ULBP3分子,观察NK细胞对其杀伤活性的变化。结果:NK细胞对K562、CNE2和KG1a细胞均有杀伤活性,对U251细胞无杀伤活性。在mRNA水平4种细胞均表达MICA/B和ULBP1~3基因。K562细胞表达MICA/B和ULBP1~3全部分子;KG1a和U251细胞均不表达5种分子;CNE2细胞表达MICA/B和ULBP2,不表达ULBP1和ULBP3。CNE2、KG1a和U251细胞均高表达HLAI分子,而K562细胞不表达。用单抗分别阻断靶细胞表面相应的NKG2D配体分子,NK细胞对KG1a和U251细胞的杀伤活性无变化。NK细胞对K562和CNE2细胞的杀伤活性可部分被封闭。同种异体NK细胞在体外对不同肿瘤细胞的杀伤活性不同,其杀伤机制也不完全相同。     

Raji细胞逃逸NK细胞免疫杀伤机制的初步探讨

目的 探讨人B细胞淋巴瘤Raji细胞逃逸NK细胞免疫杀伤的机制.方法 以K562细胞作为对照,应用LDH释放法检测不同效靶比时同种异体NK细胞杀伤Raji细胞的活性.并分别用PCR方法和流式细胞仪检测K562和Raji细胞MICA/B、ULBP1-3、HLA基因型和分子的表达情况.效靶比20∶1时用单抗分别阻断K562和Raji细胞表面MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3和HLA-Ⅰ类分子,观察NK细胞对其杀伤活性的变化.结果 不同效靶比时NK细胞杀伤Raji细胞的活性明显低于杀伤K562细胞的活性,二者之间差异有统计学意义(P<0.05).K562细胞表达MICMB和ULBP1～3基因和分子,不表达HLA-Ⅰ类分子,Raji细胞表达ULBP1～3基因和HLA-Ⅰ类分子,不表达MICA/B和ULBP1～3分子.Raji细胞HLA基因型为A*3、3.B*71、71,Cw3、4.用单抗封闭MICMB和ULBP1～3分子后,NK细胞对K562细胞的杀伤活性明显降低,对Raji细胞的杀伤活性无明显改变.结论 Raji细胞逃逸NK细胞免疫杀伤机制和Raji细胞高表达HLA-Ⅰ类分子,不表达NKG2D的配体MI-CA/B和ULBPI～3有关.     

Tju103和CTLA4-Ig诱导MHC半相合小鼠骨髓移植耐受比较

目的：观察Tju103和CTLA4—Ig各自对MHC半相合小鼠骨髓移植免疫耐受的诱导。方法：半相合供鼠T细胞与受鼠抗原、Tju103(或CTLA4—Ig)共育后与骨髓细胞混合移植，观测移植后受情况。结果：A．单纯照射组：全部小鼠于照射后11d内死于造血衰竭；B．白血病CTX治疗组：全部小鼠于接种白血病细胞后16—23d死于白血病；C．单纯移植组：全部小鼠于移植后21d内死于移植物抗宿主病(GVHD)；D．CsA预防组：5只小鼠于移植后8—22d死亡，1只死于白血病，各有2只死于GVHD和感染，5只活过30d；E．Tju103处理组：4只小鼠于移植后9～26d死亡，2只死于GVHD，各有1只死于白血病和感染，6只活过30d；F．CTLA4—Ig处理组：2只小鼠于移植后17—26d死亡GVHD，8只活过30d。结论：Tju103和CTLA4—Ig均明显延长生存期，降低GVHD发生和严重程度，CTLA4—Ig保留有抗感染和移植抗白血病(GVL)作用，而Tju103没有。